醫(yī)學(xué)微生物學(xué)第二章細菌的生理一細菌的化學(xué)組成水,無機鹽,蛋白質(zhì),糖,脂類,核酸等。水:占細胞總重量75-90%。有機物:碳,氫,氮,氧,磷,硫；無機離子:鉀,鈉,鐵,鎂,鈣,氯。原核細胞型微生物特有物質(zhì)：肽聚糖,磷壁酸,胞壁酸,吡啶二羧酸,D型氨基酸,二氨基庚二酸。第一節(jié)細菌的理化性狀第二節(jié)細菌的營養(yǎng)與生長繁殖一營養(yǎng)類型,根據(jù)營養(yǎng)要求分為:

自養(yǎng)菌:簡單無機物CO2N2為原料,

氧化或光合作用獲得能量,合成菌體成分。異養(yǎng)菌:蛋白,糖等有機物為營養(yǎng),獲取能量,合成菌體成分。從宿主體內(nèi)獲取營養(yǎng)-寄生菌,致病菌。動植物尸體腐敗食物為營養(yǎng)-腐生菌。二細菌的營養(yǎng)物質(zhì)水:營養(yǎng)物質(zhì)先溶于水,吸收和代謝進行。碳:提供能量,病原菌主要來源于糖。氮:菌體原料,來源于氨基酸,蛋白胨。無機鹽:常用元素:磷,硫,鉀,鈉,鎂,鈣,鐵；微量元素:鈷,鋅,錳,銅,鉬。無機離子:氯。無機鹽功能構(gòu)成菌體成分酶組成部分調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外滲透壓與細菌的生長繁殖和致病有關(guān)白喉桿菌在高鐵環(huán)境易產(chǎn)生毒素。結(jié)核桿菌-分枝菌素,載鐵體。生長因子:需要但不能合成,氨基酸,維生素,嘌呤,嘧啶。流感嗜血桿菌。三細菌攝取營養(yǎng)物質(zhì)的機制被動擴散:胞外酶分解成小分子物質(zhì)。由濃度高向濃度低方向擴散。不需要能量,動力來自濃度梯度。有些物質(zhì)-甘油,需菌細胞特異性蛋白幫助或促進營養(yǎng)物跨膜轉(zhuǎn)運,易化擴散?；瘜W(xué)滲透驅(qū)使轉(zhuǎn)運系統(tǒng)膜兩側(cè)質(zhì)子或離子濃度差產(chǎn)生的質(zhì)子動力或鈉動力,營養(yǎng)物越膜轉(zhuǎn)移。載體是電化學(xué)離子梯度透性酶,在氧化狀態(tài)與營養(yǎng)物結(jié)合,還原狀態(tài)時構(gòu)象改變,營養(yǎng)物釋放進入細胞。基團轉(zhuǎn)移營養(yǎng)物轉(zhuǎn)運過程中即被磷酸化,轉(zhuǎn)運與代謝同步進行。氣體環(huán)境

O2和CO2專性需氧完善的呼吸酶系統(tǒng),分子氧為受氫體完成呼吸,結(jié)核桿菌,霍亂弧菌。微需氧含氧5-6%生長好,如幽門螺桿菌。兼性需氧都能生長,有氧更好,致病菌。專性厭氧菌有氧環(huán)境產(chǎn)生超氧陰離子和H2O2。缺乏過氧化氫酶,化物酶,呼吸酶。初次培養(yǎng)加入CO2,促進細菌繁殖。滲透壓自然界各種環(huán)境,培養(yǎng)基標準配制。20‘分裂一次,1hr3次;7hr200萬個;10hr10億。第三節(jié)

細菌的新陳代謝與能量轉(zhuǎn)換一細菌的能量代謝發(fā)酵有機物為受氫體,無氧條件下進行。呼吸無機物為受氫體。需氧呼吸分子氧為受氫體。厭氧呼吸硝酸鹽等其它無機物為受氫體,無氧條件下進行。EMP途徑糖酵解,大多數(shù)細菌共有的基本代謝方式。是專性厭氧菌唯一產(chǎn)能途徑。反應(yīng)最終受氫體是未徹底氧化的中間代謝產(chǎn)物,產(chǎn)能少。1分子葡萄糖能生成2分子丙酮酸,產(chǎn)生2分子ATP和2分子NADH+H+

。磷酸戊糖途徑EMP途徑的分支,由己糖生成戊糖的循環(huán)途徑。功能是為生物合成提供前體和還原能。產(chǎn)能效果僅為EMP途徑的50%,不是產(chǎn)能的主要途徑。需氧呼吸1分子葡萄糖在有氧條件下徹底氧化,生成CO2,H2O;產(chǎn)生38分子ATP。葡萄糖經(jīng)EMP途徑生成丙酮酸,脫羧產(chǎn)生乙酰輔酶A,進入三羧酸循環(huán)徹底氧化。脫出的氫進入電子傳遞鏈,進行氧化磷酸化,最終以分子氧為受氫體。需氧菌和兼性厭氧菌進行需氧呼吸。二細菌的分解代謝產(chǎn)物糖發(fā)酵試驗用于腸道菌的鑒定葡,乳,麥,甘,蔗單糖液體;溴甲酚紫。接種后置37℃,24hr;觀察指標:產(chǎn)酸產(chǎn)氣。結(jié)果：致病菌分解葡,麥,甘,產(chǎn)酸;不分解乳糖,蔗糖。非致病菌分解葡,乳,麥,甘;產(chǎn)酸產(chǎn)氣。不分解蔗糖。吲哚試驗蛋白胨水培養(yǎng)基細菌分解色氨酸產(chǎn)生吲哚,與二甲基氨基苯甲醛反應(yīng),產(chǎn)生玫瑰紅色。大腸埃希菌,霍亂弧菌,變形桿菌陽性。甲基紅試驗葡萄糖培養(yǎng)基+甲基紅產(chǎn)氣桿菌分解葡萄糖產(chǎn)丙酮酸,脫羧成乙酰甲基甲醇,pH≥5.4,桔黃色為陰性。大腸埃希菌產(chǎn)丙酮酸后不再反應(yīng),培養(yǎng)液成酸性pH≤5.4,紅色為陽性。IMViC鑒定腸道菌的經(jīng)典試驗大腸桿菌結(jié)果:++--;產(chǎn)氣桿菌結(jié)果:--++。尿素酶試驗2%尿素+酚紅:變形菌分解尿素產(chǎn)氨,紅色。硫化氫試驗細菌分解培養(yǎng)基中胱氨酸和甲硫氨酸,產(chǎn)硫化氫,與鉛或鐵離子生成黑色硫化物。色素脂溶性-菌落顯色,水溶性-培養(yǎng)基?？股匚⑸锂a(chǎn)生,能抑制或殺死其它微生物的物質(zhì),多粘菌素,桿菌肽。維生素大腸艾希菌大量產(chǎn)生維生素B和K。細菌素有抗菌作用的蛋白質(zhì),只對近緣關(guān)系的細菌有殺滅或抑制作用,大腸菌素。水溶性色素脂溶性色素第四節(jié)細菌的人工培養(yǎng)培養(yǎng)基的種類基礎(chǔ)培養(yǎng)基:肉湯,蛋白胨水,營養(yǎng)瓊脂。增菌培養(yǎng)基:血清培養(yǎng)基,堿性蛋白胨水。鑒別培養(yǎng)基:SS瓊脂,抗生素培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基:底物+指示劑;糖發(fā)酵管。厭氧培養(yǎng)基:吸氧劑,還原劑,指示劑,苞肉。物理狀態(tài):液體,固體,半固體培養(yǎng)基。細菌在培養(yǎng)基生長現(xiàn)象液體培養(yǎng)基

渾濁

大多數(shù)細菌沉淀

鏈狀生長菌菌膜

專性需氧菌結(jié)核桿菌枯草桿菌固體培養(yǎng)基劃線接種-分離培養(yǎng)菌落colony挑選一個菌落-純種轉(zhuǎn)種-純培養(yǎng)半固體培養(yǎng)基有鞭毛細菌：擴散生長,周圍渾濁。無鞭毛細菌：沿穿刺線生長,周圍透明觀察動力,保存菌種。

人工培養(yǎng)細菌的用途感染性疾病的病原學(xué)診斷和藥物選擇。標本:早,準;呼吸,消化,泌尿,皮膚。生物制品疫苗,類毒素,抗毒素,免疫血清?；蚬こ桃葝u素,干擾素,乙肝疫苗。工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)抗生素,維生素,氨基酸;發(fā)酵食品;環(huán)保;菌肥。抗生素敏感試驗紅綠慶青鏈第五節(jié)細菌的分類表型分類根據(jù)形態(tài)和生理特征形態(tài),結(jié)構(gòu),染色,培養(yǎng),生化,抗原。分析分類電泳,色譜,質(zhì)譜方法分析菌體組份,代謝產(chǎn)物,圖譜特征,細胞脂類和蛋白分析。基因分類遺傳物質(zhì)DNAG+Cmol%,核酸雜交,16S。屬

genera由密切相關(guān)的種組成,如金黃色葡萄球菌,表皮葡萄球菌屬于葡萄球菌屬。種species細菌的基本分類單位。型type同一種細菌基本性狀相同,而某些方面的特征稍有不同,便可分為不同的型別。株strain對不同來源的同一菌種的細菌稱為該菌的不同菌株。第三章消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全滅菌sterilization：

殺滅物體上所有微生物的方法,手術(shù)器械,注射器等。

消毒disinfection：

殺死物體上或環(huán)境中病原微生物的方法,消毒劑。防腐antisepsis：

防止或抑制皮膚表面細菌生長繁殖的方法,安全有效。第一節(jié)常用術(shù)語清潔cleaning：

是指通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過程。

無菌

asepsis無活菌,是滅菌的結(jié)果。無菌操作

防止細菌進入人體或其它物品的操作技術(shù)。第一節(jié)消毒滅菌的方法

物理消毒滅菌法熱力,輻射,濾過,干燥,低溫。熱力滅菌法干熱滅菌焚燒:廢棄物,人及動物尸體。燒灼:接種環(huán),試管。干烤:171℃1hr;160℃hr;121;℃16hr,玻璃。紅外線:電磁波,1-10um最強,類似干烤。濕熱滅菌原理:蛋白易凝固,穿透力強,潛熱效應(yīng)。

巴氏消毒法:61.1-62.8,30’;71.7,15-30秒。

煮沸法:100℃,5’芽孢1-2hr,碳酸氫鈉105℃

流動蒸汽消毒法:蒸籠,繁殖體,15-30’。

間歇蒸汽滅菌法:流動蒸汽消毒3次。

高壓蒸汽滅菌法:103.4kpa,121.3℃,15-20。

預(yù)真空壓力蒸汽滅菌器:抽氣98%,3-4’快。高壓蒸汽滅菌器輻射殺菌法紫外線UV265-266nm最強,使DNA鏈上相鄰的2個胸腺嘧啶形成二聚體,干擾復(fù)制轉(zhuǎn)錄。穿透力弱,紙張,玻璃,塵埃,水,蒸氣?？諝夂臀矬w表面消毒,手術(shù)室,無菌室。對皮膚,眼睛有損傷。電離輻射高能量射線,輸液器,食品,消毒微波microwave穿透玻璃,陶瓷,塑料,水分子快速運動,摩擦產(chǎn)熱,迅速。濾過除菌法濾菌器filter物理阻留,去除液體或空氣中細菌真菌。

含微孔,小于細菌,血清等不耐熱液體?？諝獬?生物潔凈技術(shù)超級空氣凈化無菌操作臺或?qū)恿魇摇３?中,高3級高效空氣過濾器,除掉空氣中塵埃顆粒,并在空間形成層流空氣。濾菌器空氣凈化臺干燥與低溫抑菌法干燥抑菌法腦膜炎球菌,淋球菌,霍亂弧菌特敏感。結(jié)核桿菌,芽孢桿菌抗干燥很強。保存食品,鹽,糖;脫水蔬菜。低溫抑菌法保存菌種。冷凍真空干燥?；瘜W(xué)消毒滅菌法高效消毒劑殺滅所有微生物包括芽孢。含氯消毒劑:次氯酸鈉,漂白粉等。水中產(chǎn)氯,次氯酸,新生態(tài)氧,殺菌。飲用水,皮膚,地面,排泄物,污水。過氧化物消毒劑:過氧化氫,過氧乙酸。醛類消毒劑:戊二醛,甲醛。環(huán)氧乙烷:高效殺菌,易燃,有毒性。中效消毒劑殺滅結(jié)核菌,真菌。內(nèi)窺鏡,喉鏡,麻醉器材,皮膚粘膜消毒。含碘消毒劑:碘酊,碘伏:沉淀蛋白,氧化殺菌,皮膚體溫計。醇類消毒劑:乙醇:70-75%,皮膚粘膜消毒。異丙醇:作用強,毒性強,器材體溫計。低效消毒劑季銨鹽類消毒劑新潔爾滅:表面活性劑,清潔作用。皮膚粘膜,地面。氯已定洗必泰:皮膚粘膜,地面。高錳酸鉀氧化殺菌作用皮膚粘膜,餐具,水果,蔬菜消毒。第三節(jié)消毒滅菌的應(yīng)用一醫(yī)療器械物品的消毒滅菌高危器械物品注射器,手術(shù)器械,注射液體,導(dǎo)管進入無菌組織物品。滅菌使用。

中危器械物品呼吸機,麻醉機,胃鏡,支氣管鏡,體溫計接觸黏膜。消毒使用。低危器械物品治療盤,食品器皿,便盆用后清洗,消毒即可。快速周轉(zhuǎn)醫(yī)療器械內(nèi)窺鏡,牙科器械。二室內(nèi)空氣消毒滅菌物理消毒紫外線照射1.5w/m31hr,空氣物體表面。濾過除菌法0.2um高效過濾,除去塵埃。化學(xué)消毒過氧乙酸噴霧0.5%水溶液30ml/m31hr。過氧化氫噴霧0.3%溶液,30ml/m31hr。二氧化氯熏蒸水溶解飽合液自然逸散。中藥煙熏手和皮膚的消毒醫(yī)護人員帶菌,院內(nèi)感染重要途徑,30%。勤洗手,會洗手,肥皂,水;乙醇,次氯酸鈉。粘膜的消毒口腔-過氧化氫,泌尿-氯已定pp。病人排泄物分泌消毒糞尿膿痰,次氯酸鈉。病人污染物品蒸,煮,熏,擦;過氧乙酸浸泡,燒。飲用水消毒氯氣消毒,或漂白粉。環(huán)境消毒房間-過氧乙酸噴灑,廁所-生石灰,污水-氯。第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素微生物種類芽孢菌,結(jié)核菌強;腸道病毒強。微生物的物理狀態(tài)營養(yǎng)缺陷下生長的微生物抵抗力強。數(shù)量,溫度,酸堿度,有機物顯著影響消毒劑的效果,洗凈后消毒。消毒劑的性質(zhì),濃度,作用時間表面活性劑對G-效果好,芽孢菌,真菌無效。濃度高比低效果好,但乙醇70-75%最好。第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全

病原微生物所致的安全問題:

實驗室的安全隱患,生物武器,生物恐怖,重大傳染病的暴發(fā)流行。核心是防擴散和防感染。我國法令包括:病原微生物的分類管理,實驗室的分級管理,實驗室感染的控制,監(jiān)督和法律責任。

一病原微生物的分類根據(jù)傳染性,感染后對個體或者群體的危害程度,分為四類：第一類:能引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物,以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物,天花病毒等29種。第二類:能引起人類或者動物嚴重疾病,比較容易在人與人,動物與人,動物與動物間傳播的微生物,HIV,SRAS,結(jié)核,霍亂,禽流感等70種。第三類:

能引起人或動物疾病,但對人,動物或環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害,實驗室感染后很少引起嚴重疾病,可有效治療和預(yù)防的微生物。

肝炎病毒,流感病毒,鼻病毒,破傷風(fēng),傷寒,痢疾等275種。第四類:在通常情況下不會引起人或動物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一,二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。二、病原微生物實驗室的分級級別處理對象一級對人體、動植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動植物致病的致病因子。二級對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因子，對健康成人、動植物和環(huán)境不會造成嚴重危害，具有有效的預(yù)防和治療措施。三級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴重的甚至是致命的疾病，或?qū)又参锖铜h(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預(yù)防治療措施。四級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險的致病因子。沒有預(yù)防治療措施。一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級,四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。高致病性病原微生物實驗,２人以上共同進行。一個實驗室