第二章生物制藥基本技術(shù)生物制藥是把生物體內(nèi)的具有生物活性的基本物質(zhì)保持原來的結(jié)構(gòu)和功能,又能在含有多種物質(zhì)的液相或固相中較高純度的分離出來。它是一項嚴格、細致、復雜的工藝過程,涉及物理、化學、生物學、工程等方面的知識和操作技術(shù)問題:1、標準化方法?2、如何發(fā)現(xiàn)或研制新藥?·對于一個新研制的生物藥物,從查閱文獻開始,到探索實驗、條件考察(記錄客觀)、總結(jié)制定工藝規(guī)程、制定分析鑒定方法,再進行中試放大,全面考察工藝是否成熟,是否穩(wěn)定等。第二章生物制藥基本技術(shù)1基本制造方法·1、提取法(Extraction2、發(fā)酵法(Zymotechnics)·3、化學合成(Chemicalsynthesize)組織培養(yǎng)法(Tissueculture)5、現(xiàn)代生物技術(shù)(Modernbiotechnics):Geneengineering,Enzymeengineering,Cellengineering,proteinEngineeringFermentationengineering基本制造方法2生化制藥的六個階段1.原料的選擇和預處理2固液分離3.提取:從原料中經(jīng)溶劑分離有效成分,制成粗品的工藝過程4.精制純化:粗制品經(jīng)鹽析、有機溶劑沉淀、吸附、層析透析、超離心、膜分離、結(jié)晶等步驟進行精制的工藝過程。5,成品加工/濃縮、干燥及保存、制劑:原料藥(精制品)經(jīng)精細加工制成片劑、針劑、凍干劑、粉劑等供臨床應用的各種劑型生化制藥的六個階段3、原料選擇和預處理(RawMaterialSelectingandPretreatment)原料選擇的基本準則:1、在大量的信息資料和實踐經(jīng)驗的基礎(chǔ)上,選擇目標原料。2、選擇有效成分含量高的新鮮材料;3、來源豐富易得4、制造工藝簡單易行;5、成本比較低;6、原料的采集不破壞生態(tài)環(huán)境,選擇對環(huán)境友好的原材料資源,防止生物入侵。、原料選擇和預處理4預處理方法1、動物組織先要剔除結(jié)締組織、脂肪組織等非活性部分植物種子去殼除脂;微生物要進行菌體與發(fā)酵液分離等基本操作。便于貯存和運輸。2、冷凍法預處理:有些材料要冷凍保存或低溫保存,以便抑制微生物和酶的作用。3、有機溶劑除去部分水分:用丙酮或乙醇進行脫水和脫脂有利于貯存。預處理方法5原料的粉碎:在提取前先將大塊的原料粉碎或絞碎成適度的粒度,或?qū)⒓毎扑?使胞內(nèi)活性物質(zhì)充分釋放到溶液中,有利于提取或吸附動物臟器組織:常用絞肉機機械法粉碎;植物肉質(zhì)組織:常用磨碎法;微生物:常用自溶、冷熱交替、加砂研磨、超聲、加壓等處理方法原料的粉碎:在提取前先將大塊的原料粉碎或6·1.機械法:組織搗碎機、勻漿器、研缽、球磨機、萬能粉碎機、絞肉機、擊碎機、刨片機。動物組織多在冰凍狀態(tài)絞碎、溶漿。2物理法A、反復凍融法:把待破碎的樣品冷至-20℃-15℃,使之凝固,然后緩慢的溶解,如此反復操作,大部分動物性細胞及細胞內(nèi)的顆粒可以破碎B、冷熱交替法:將材料投入沸水中,在90℃左右維持數(shù)分鐘,立即置于冰浴中,使之迅速冷卻,絕大部分細胞被破壞。此法多用于細菌或病毒中提取蛋白和核酸·1.機械法:組織搗碎機、勻漿器、研缽、球磨機、萬能粉碎7C、超聲波處理法:多用于微生物材料,處理的效果與樣品濃度、使用頻率有關(guān)。用大腸桿菌制備各種酶時,常用50~100mg/L菌體濃度,在1~10Kc頻率下處理10~15min。操作時注意避免溶液中氣泡的存在加壓破碎法:加氣壓或水壓,達059~3432MPa(210-350kgf/cm2)的壓力時,可使90%以上細胞被壓碎。多用于微生物酶制劑的工業(yè)制備。C、超聲波處理法:多用于微生物材料,處理的效果與83.生化及化學法A.自溶法:將新鮮的生物材料存放在一定的pH和適當溫度下,利用組織細胞中自身的酶系將細胞破壞,使細胞內(nèi)含物釋放出來的方法。自溶的溫度,動物材料在0-4℃,微生物在室溫下。自溶時,需加少量的防腐劑,甲苯、氯仿,以防止外界細菌的污染。*由于自溶時間較長,不易控制,故制造具有活性的核酸和蛋白質(zhì)時比較少用。3.生化及化學法9B.溶菌酶處理法:溶菌酶是專一地破壞細菌細胞壁的酶多用于微生物,對蝸牛酶、纖維酶及植物細胞也適用。如用噬菌體感染大腸桿菌細胞制造DNA時,采用pH8.0的0.1mol/LTris-0.01mo/LEDTA制成2億/m的細胞懸液,然后加入100μg-1mg的溶菌酶,在37°C保溫10min,細菌胞壁即被破壞。C.表面活性劑處理法:表面活性劑的分子中,兼有親脂性和親水性基團,能降低水的界面張力,具有乳化、分散、增溶作用。常用有:SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧膽酸鈉。B.溶菌酶處理法:溶菌酶是專一地破壞細菌細胞壁的酶10生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件11生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件12生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件13生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件14生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件15生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件16生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件17生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件18生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件19生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件20生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件21生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件22生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件23生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件24生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件25生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件26生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件27生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件28生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件29生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件30生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件31生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件32生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件33生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件34生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件35生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件36生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件37生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件38生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件39生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件40生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件41生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件42第二章生物制藥基本技術(shù)生物制藥是把生物體內(nèi)的具有生物活性的基本物質(zhì)保持原來的結(jié)構(gòu)和功能,又能在含有多種物質(zhì)的液相或固相中較高純度的分離出來。它是一項嚴格、細致、復雜的工藝過程,涉及物理、化學、生物學、工程等方面的知識和操作技術(shù)問題:1、標準化方法?2、如何發(fā)現(xiàn)或研制新藥?·對于一個新研制的生物藥物,從查閱文獻開始,到探索實驗、條件考察(記錄客觀)、總結(jié)制定工藝規(guī)程、制定分析鑒定方法,再進行中試放大,全面考察工藝是否成熟,是否穩(wěn)定等。第二章生物制藥基本技術(shù)43基本制造方法·1、提取法(Extraction2、發(fā)酵法(Zymotechnics)·3、化學合成(Chemicalsynthesize)組織培養(yǎng)法(Tissueculture)5、現(xiàn)代生物技術(shù)(Modernbiotechnics):Geneengineering,Enzymeengineering,Cellengineering,proteinEngineeringFermentationengineering基本制造方法44生化制藥的六個階段1.原料的選擇和預處理2固液分離3.提取:從原料中經(jīng)溶劑分離有效成分,制成粗品的工藝過程4.精制純化:粗制品經(jīng)鹽析、有機溶劑沉淀、吸附、層析透析、超離心、膜分離、結(jié)晶等步驟進行精制的工藝過程。5,成品加工/濃縮、干燥及保存、制劑:原料藥(精制品)經(jīng)精細加工制成片劑、針劑、凍干劑、粉劑等供臨床應用的各種劑型生化制藥的六個階段45、原料選擇和預處理(RawMaterialSelectingandPretreatment)原料選擇的基本準則:1、在大量的信息資料和實踐經(jīng)驗的基礎(chǔ)上,選擇目標原料。2、選擇有效成分含量高的新鮮材料;3、來源豐富易得4、制造工藝簡單易行;5、成本比較低;6、原料的采集不破壞生態(tài)環(huán)境,選擇對環(huán)境友好的原材料資源,防止生物入侵。、原料選擇和預處理46預處理方法1、動物組織先要剔除結(jié)締組織、脂肪組織等非活性部分植物種子去殼除脂;微生物要進行菌體與發(fā)酵液分離等基本操作。便于貯存和運輸。2、冷凍法預處理:有些材料要冷凍保存或低溫保存,以便抑制微生物和酶的作用。3、有機溶劑除去部分水分:用丙酮或乙醇進行脫水和脫脂有利于貯存。預處理方法47原料的粉碎:在提取前先將大塊的原料粉碎或絞碎成適度的粒度,或?qū)⒓毎扑?使胞內(nèi)活性物質(zhì)充分釋放到溶液中,有利于提取或吸附動物臟器組織:常用絞肉機機械法粉碎;植物肉質(zhì)組織:常用磨碎法;微生物:常用自溶、冷熱交替、加砂研磨、超聲、加壓等處理方法原料的粉碎:在提取前先將大塊的原料粉碎或48·1.機械法:組織搗碎機、勻漿器、研缽、球磨機、萬能粉碎機、絞肉機、擊碎機、刨片機。動物組織多在冰凍狀態(tài)絞碎、溶漿。2物理法A、反復凍融法:把待破碎的樣品冷至-20℃-15℃,使之凝固,然后緩慢的溶解,如此反復操作,大部分動物性細胞及細胞內(nèi)的顆粒可以破碎B、冷熱交替法:將材料投入沸水中,在90℃左右維持數(shù)分鐘,立即置于冰浴中,使之迅速冷卻,絕大部分細胞被破壞。此法多用于細菌或病毒中提取蛋白和核酸·1.機械法:組織搗碎機、勻漿器、研缽、球磨機、萬能粉碎49C、超聲波處理法:多用于微生物材料,處理的效果與樣品濃度、使用頻率有關(guān)。用大腸桿菌制備各種酶時,常用50~100mg/L菌體濃度,在1~10Kc頻率下處理10~15min。操作時注意避免溶液中氣泡的存在加壓破碎法:加氣壓或水壓,達059~3432MPa(210-350kgf/cm2)的壓力時,可使90%以上細胞被壓碎。多用于微生物酶制劑的工業(yè)制備。C、超聲波處理法:多用于微生物材料,處理的效果與503.生化及化學法A.自溶法:將新鮮的生物材料存放在一定的pH和適當溫度下,利用組織細胞中自身的酶系將細胞破壞,使細胞內(nèi)含物釋放出來的方法。自溶的溫度,動物材料在0-4℃,微生物在室溫下。自溶時,需加少量的防腐劑,甲苯、氯仿,以防止外界細菌的污染。*由于自溶時間較長,不易控制,故制造具有活性的核酸和蛋白質(zhì)時比較少用。3.生化及化學法51B.溶菌酶處理法:溶菌酶是專一地破壞細菌細胞壁的酶多用于微生物,對蝸牛酶、纖維酶及植物細胞也適用。如用噬菌體感染大腸桿菌細胞制造DNA時,采用pH8.0的0.1mol/LTris-0.01mo/LEDTA制成2億/m的細胞懸液,然后加入100μg-1mg的溶菌酶,在37°C保溫10min,細菌胞壁即被破壞。C.表面活性劑處理法:表面活性劑的分子中,兼有親脂性和親水性基團,能降低水的界面張力,具有乳化、分散、增溶作用。常用有:SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧膽酸鈉。B.溶菌酶處理法:溶菌酶是專一地破壞細菌細胞壁的酶52生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件53生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件54生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件55生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件56生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件57生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件58生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件59生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件60生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件61生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件62生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件63生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件64生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件65生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件66生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件67生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件68生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件69生化制藥基本技術(shù)生化制藥技術(shù)課件70生化制藥基本技術(shù)生化