電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4218

可見分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×2瓶-20℃保存試劑二液體25mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體80mL×1瓶2-8℃保存標準品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、試劑一：臨用前每瓶加入10mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；2、標準品：5μmol/mL的對硝基苯酚溶液。產(chǎn)品說明：β-GC（EC1）β-β-GC分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GC活性。p-Nitrophenylβ-D-Glucopyranoside

β-GC

Nitrophenol(400nm)2-3可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、研缽/操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1104個10001mL冰0031030次15000，02（g為15100.gL液150，0二、測定步驟1、分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。2、標準液的稀釋：臨用前將5μmol/mL標準液稀釋至100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL標準溶液待測。3、標準液稀釋可參考下表：序號（nmol/mL）標準液體積（μL）蒸餾水體積（μL）（nmol/mL）1500010040010002100020018001003100100010005045010001000255251000100012.5612.5100010006.2576.25010000（空白管）備注：實驗中每個標準管需500μL標準溶液。4、加樣表：試劑名稱（μL）對照管測定管標準管試劑一400試劑二500500樣本100100迅速混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準確水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）試劑一400充分混勻，8000g，4℃離心5min，取上清液待測上清液500500標準液500試劑三100010001000充分混勻，室溫靜置2min后，400nm處測定吸光值A，分別記為A測定、A對照、A標準、A空白。計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。三、β-GC活力單位的計算1、標準曲線建立：根據(jù)標準管的濃度（x，nmol/mL）和吸光度（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本產(chǎn)物濃度x（nmol/mL）。2、按樣本蛋白濃度計算單位的定義：每mg組織蛋白每小時產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。β-GC活力(U/mgprot)=(x×V反總)÷(V樣×Cpr)÷T=20x÷Cpr3、按樣本質量計算單位的定義：每g組織每小時產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。β-GC(U/g)=樣4單位的定義：每1萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。β-GC活力(U/104cell)=(x×V反總)÷(1000×V樣÷V樣總)÷T=0.02xCpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL，蛋白濃度需要另外測定；V反總：反應體系總體積，1mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積