電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第3頁(yè)，共3頁(yè)谷氨酰胺合成酶（GS）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)貨號(hào)：UPLC-MS-4449規(guī)格：100T/48S產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶4℃保存試劑一液體10mL×1瓶-20℃保存試劑二液體10mL×1瓶-20℃保存試劑三粉劑×2瓶-20℃保存試劑四液體15mL×1瓶4℃保存溶液的配制：試劑三：用時(shí)每瓶加入5mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃分裝保存。

微量法產(chǎn)品說(shuō)明：GS（EC）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過(guò)多的銨離子對(duì)生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。GS在ATP和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ-谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物；該絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰，可用分光光度計(jì)測(cè)定。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）500~10001的比例（5001L提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（20200W3s10s30次；8000g410min，取上清，置冰上待測(cè)。（g提取液體積(mL)15~10的比例（0.1g1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g410min，取上清，置冰上待測(cè)。2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。2、在EP管中加入下列試劑：試劑名稱(chēng)（μL）測(cè)定管對(duì)照管試劑一160試劑二160試劑三7070樣本7070混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴30min試劑四10010010min200μL96540nm處的吸光值A(chǔ)。ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。三、GS活力單位的計(jì)算A、用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下1、按血清（漿）體積計(jì)算mL血清（漿）mLmin5400.01定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=19×ΔA2、按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每min使540nm下吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/mgprot）=ΔA×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.01÷T=19×ΔA÷Cpr3、按樣本質(zhì)量計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每g組織在反應(yīng)體系中每min使540nm下吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/g質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷0.01÷T=19×ΔA÷W4、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每min使540nm下吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/104cell）＝ΔA×V反總÷（500×V樣÷V樣總）÷0.01÷T=0.038×ΔA400μ=0.4mL70μL=0.07L1m：反應(yīng)時(shí)間，30min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。B、用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下1、按血清（漿）體積計(jì)算mL血清（漿）mLmin5400.005GS（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.005÷T=38×ΔA2、按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每min使540nm下吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/mgprot）=ΔA×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.005÷T=38×ΔA÷Cpr3、按樣本質(zhì)量計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每g組織在反應(yīng)體系中每min使540nm下吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/g質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷0.005÷T=38×ΔA÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每min使540nm下吸光值變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。GS（U/104cell）＝ΔA×V反總÷（500×V樣÷V樣總）÷0.005÷T=0.076×ΔA400μ=0