電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁肌酐（Cr）含量檢測試劑盒說明書（肌氨酸氧化酶法）貨號(hào)：UPLC-MS-6019規(guī)格：50T/48S

可見分光光度法產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液一液體60mL×1瓶4℃保存提取液二液體8mL×1瓶4℃保存試劑一粉劑×2支-20℃保存試劑二粉劑×2支-20℃保存試劑三粉劑×2支-20℃保存試劑四粉劑×1支4℃保存試劑五粉劑×2瓶-20℃保存試劑六A液液體10mL×1瓶4℃保存試劑六B液液體10mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1.7mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。1.65mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。1mL-20℃分裝保存兩周。試劑三工作液：根據(jù)試驗(yàn)所需用量，按照試劑三：蒸餾水=1:9的比例，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。1mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩個(gè)月。3.4mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。AB液=1:1的比例，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。mg1mL1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃150μL200μL200μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說明：肌酐（creatinine，Cr），C4H7N3O\h，是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，主要由腎小球?yàn)V過排出體外。血中肌酐來自外源性和內(nèi)源性兩種，外源性肌酐是肉類食物在體內(nèi)代謝后的產(chǎn)物；內(nèi)源性肌酐是體內(nèi)肌肉組織代謝的產(chǎn)物。肌酐在肌酸酶的催化下肌酸水解生成肌氨酸和尿素，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化產(chǎn)生過氧化氫。過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505nm有特征吸收峰。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1（104個(gè)提取液一體積（mL）的比例（500萬細(xì)胞加入1L提取液一）（功率300W395mn于10min0.8mL0.15mL提取液二，混勻，4℃，12000g10min后取上清待測。2提取液一體積(mL)（0.1g1mL提取液一g100.8mL0.15mL混勻，4℃，12000g10min后取上清待測。3、血清（漿）：取100μL血清（漿）加入1mL提取液一，4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，混勻，4℃，12000g離心10min后取上清待測。二、測定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，蒸餾水調(diào)零。2、按下表步驟加樣：試劑名稱（μL）測定管空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本60--蒸餾水-60-標(biāo)準(zhǔn)液--60試劑一606060試劑二606060試劑三工作液151515試劑四151515充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）條件下，反應(yīng)10min。試劑五120120120試劑六270270270充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）條件下，顯色30min。蒸餾水400400400505nmA測定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測=A測定-A空白，ΔA標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。注：空白管只需做1-2次。三、肌酐含量計(jì)算1、計(jì)算公式按照蛋白濃度計(jì)算肌酐含量（μg/mgprot）=C標(biāo)×ΔA測÷ΔA標(biāo)×V樣÷（V樣×Cpr）=200×ΔA測÷ΔA標(biāo)÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算肌酐含量（μg/g質(zhì)量）=C標(biāo)×ΔA測÷ΔA標(biāo)×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）=237.5×ΔA測÷ΔA標(biāo)÷W按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算肌酐含量（μg/104cell）=C標(biāo)×ΔA測÷ΔA標(biāo)×（V上清+V提取液二）÷（細(xì)胞數(shù)量×V上清÷V提取液一）=237.5×ΔA測÷ΔA標(biāo)÷細(xì)胞數(shù)量按照血清（漿）體積計(jì)算肌酐含量（μg/mL）=C標(biāo)×ΔA測÷ΔA標(biāo)×(V上清+V提取液二)÷[V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]=2612.5×ΔA測÷ΔA標(biāo)C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，200μg/mL；V樣：加入樣本體積，60μL=0.06mL；V上清：提取時(shí)上清液體積，0.810.15