一、原核基因的結(jié)構(gòu)一、原核基因的結(jié)構(gòu)二、真核基因的結(jié)構(gòu)二、真核基因的結(jié)構(gòu)（二）基因操作的工具

基因的剪刀—限制性?xún)?nèi)切酶基因的針線—DNA連接酶

基因的運(yùn)輸工具—運(yùn)載體（二）基因操作的工具基因的剪刀—限制性?xún)?nèi)切酶基限制性核酸內(nèi)切酶1.特點(diǎn)：特異性，即識(shí)別特定核苷酸序列，在特定的切點(diǎn)(磷酸二酯鍵)切割。2.分布：主要在微生物(細(xì)菌，酵母菌等）。3.結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端4用途：用于提取目的基因和切割運(yùn)載體限制性核酸內(nèi)切酶1.特點(diǎn)：特異性，即識(shí)別特定核苷酸序列，

被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端或平末端？要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)末端。要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾基因的針線——DNA連接酶（二）基因操作的工具連接的部位：磷酸二酯鍵，不是氫鍵。DNA連接酶的分類(lèi)：基因的針線——DNA連接酶（二）基因操作的工具連接的部位：磷AATTGCCTTAAGAATTGCCTTAAGDNA連接酶與DNA聚合酶的異同點(diǎn)：相同點(diǎn)：形成磷酸二酯鍵但是：1）DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2）DNA聚合酶需要以一條DNA鏈為模板；而DNA連接酶不需要模板。DNA連接酶與DNA聚合酶的異同點(diǎn)：相同點(diǎn)：形成磷酸二酯鍵運(yùn)載體1.作用：2.條件：3.種類(lèi)：質(zhì)粒（常用的）、噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒。將外源基因送入受體細(xì)胞。(1)能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存。(2)具多個(gè)限制酶切點(diǎn)

(3)具有某些標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選。如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有

顏色反應(yīng)的基因等。運(yùn)載體1.作用：將外源基因送入受體細(xì)胞。(1)能夠在宿主1.以下說(shuō)法正確的是（）

A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列

B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體

C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接

D、DNA連接酶使黏性末段的堿基之間形成氫鍵C練習(xí)1.以下說(shuō)法正確的是2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是

A、能復(fù)制（）

B、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)

C、具有標(biāo)記基因

D、它是環(huán)狀DNAD練習(xí)2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是D練習(xí)3.(多選）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（）

A、基因工程技術(shù)能定向地改造生物的遺傳性狀，培育生物新品種

B、重組DNA的形成在細(xì)胞內(nèi)完成

C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞

D、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體BD練習(xí)3.(多選）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（5）基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是（）

A、人工合成目的基因

B、目的基因與載體結(jié)合

C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

D、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C鞏固練習(xí)5）基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基因操作的基本步驟目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)和鑒定基因操作的基本步驟目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因獲取目的基因的方法：1從基因文庫(kù)中獲取（基因組文庫(kù)或CDNA文庫(kù)）2利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因3人工化學(xué)方法合成獲取目的基因的方法：1從基因文庫(kù)中獲?。ɑ蚪M文庫(kù)或CDN基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)從基因文庫(kù)中獲取目的基因：基因文庫(kù):

將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存,各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱(chēng)為基因文庫(kù)(genelibrary)基因組文庫(kù):

基因文庫(kù)中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫(kù)叫做基因組文庫(kù).部分基因文庫(kù):

基因文庫(kù)中包含了一種生物的一部分基因,這種基因文庫(kù)叫做部分基因文庫(kù).從基因文庫(kù)中獲取目的基因：基因文庫(kù):1變性（90-95度）2退火（55-60度）3延伸（70-75度）2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因1變性2退火3延伸2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因基因工程(復(fù)習(xí))課件①概念：PCR全稱(chēng)為_(kāi)______________，是一項(xiàng)在生物____復(fù)制___________的核酸合成技術(shù)③條件：_______________________、

_______________、___________、___________.②原理：__________④方式：以_____方式擴(kuò)增，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對(duì)引物耐高溫的DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增①概念：PCR全稱(chēng)為_(kāi)______________，是一項(xiàng)⑥過(guò)程：a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成___________b、退火（復(fù)性55℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈⑥過(guò)程：a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板b、基因工程(復(fù)習(xí))課件啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因：是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞用Ca2+處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子用Ca2+處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞四環(huán)素抗性基因氨芐青霉素抗性基因四環(huán)素氨芐青霉(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定檢測(cè)—鑒定——①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體上是否插入了目的基因②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法：方法：方法：DNA分子雜交DNA分子雜交抗原抗體雜交(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定檢測(cè)—鑒定——①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色DNA分子雜交示意圖將兩種生物的DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒(méi)有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。DNA分子雜交示意圖將兩種生物的DNA分子的單鏈放在一起，基因探針：用放射性同位素標(biāo)記的含目的基因的DNA片段如果有雜交帶出現(xiàn)，說(shuō)明被檢測(cè)物含有與目的基因可以堿基配對(duì)的序列基因探針：用放射性同位素標(biāo)記的含目的基因的DNA片段如果有雜一、原核基因的結(jié)構(gòu)一、原核基因的結(jié)構(gòu)二、真核基因的結(jié)構(gòu)二、真核基因的結(jié)構(gòu)（二）基因操作的工具

基因的剪刀—限制性?xún)?nèi)切酶基因的針線—DNA連接酶

基因的運(yùn)輸工具—運(yùn)載體（二）基因操作的工具基因的剪刀—限制性?xún)?nèi)切酶基限制性核酸內(nèi)切酶1.特點(diǎn)：特異性，即識(shí)別特定核苷酸序列，在特定的切點(diǎn)(磷酸二酯鍵)切割。2.分布：主要在微生物(細(xì)菌，酵母菌等）。3.結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端4用途：用于提取目的基因和切割運(yùn)載體限制性核酸內(nèi)切酶1.特點(diǎn)：特異性，即識(shí)別特定核苷酸序列，

被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端或平末端？要切兩個(gè)切口，產(chǎn)生四個(gè)末端。要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾基因的針線——DNA連接酶（二）基因操作的工具連接的部位：磷酸二酯鍵，不是氫鍵。DNA連接酶的分類(lèi)：基因的針線——DNA連接酶（二）基因操作的工具連接的部位：磷AATTGCCTTAAGAATTGCCTTAAGDNA連接酶與DNA聚合酶的異同點(diǎn)：相同點(diǎn)：形成磷酸二酯鍵但是：1）DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2）DNA聚合酶需要以一條DNA鏈為模板；而DNA連接酶不需要模板。DNA連接酶與DNA聚合酶的異同點(diǎn)：相同點(diǎn)：形成磷酸二酯鍵運(yùn)載體1.作用：2.條件：3.種類(lèi)：質(zhì)粒（常用的）、噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒。將外源基因送入受體細(xì)胞。(1)能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存。(2)具多個(gè)限制酶切點(diǎn)

(3)具有某些標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選。如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有

顏色反應(yīng)的基因等。運(yùn)載體1.作用：將外源基因送入受體細(xì)胞。(1)能夠在宿主1.以下說(shuō)法正確的是（）

A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列

B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體

C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接

D、DNA連接酶使黏性末段的堿基之間形成氫鍵C練習(xí)1.以下說(shuō)法正確的是2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是

A、能復(fù)制（）

B、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)

C、具有標(biāo)記基因

D、它是環(huán)狀DNAD練習(xí)2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是D練習(xí)3.(多選）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（）

A、基因工程技術(shù)能定向地改造生物的遺傳性狀，培育生物新品種

B、重組DNA的形成在細(xì)胞內(nèi)完成

C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞

D、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體BD練習(xí)3.(多選）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（5）基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是（）

A、人工合成目的基因

B、目的基因與載體結(jié)合

C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

D、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C鞏固練習(xí)5）基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基因操作的基本步驟目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)和鑒定基因操作的基本步驟目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因獲取目的基因的方法：1從基因文庫(kù)中獲?。ɑ蚪M文庫(kù)或CDNA文庫(kù)）2利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因3人工化學(xué)方法合成獲取目的基因的方法：1從基因文庫(kù)中獲?。ɑ蚪M文庫(kù)或CDN基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)從基因文庫(kù)中獲取目的基因：基因文庫(kù):

將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存,各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱(chēng)為基因文庫(kù)(genelibrary)基因組文庫(kù):

基因文庫(kù)中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫(kù)叫做基因組文庫(kù).部分基因文庫(kù):

基因文庫(kù)中包含了一種生物的一部分基因,這種基因文庫(kù)叫做部分基因文庫(kù).從基因文庫(kù)中獲取目的基因：基因文庫(kù):1變性（90-95度）2退火（55-60度）3延伸（70-75度）2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因1變性2退火3延伸2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因基因工程(復(fù)習(xí))課件①概念：PCR全稱(chēng)為_(kāi)______________，是一項(xiàng)在生物____復(fù)制___________的核酸合成技術(shù)③條件：_______________________、

_______________、___________、___________.②原理：__________④方式：以_____方式擴(kuò)增，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對(duì)引物耐高溫的DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增①概念：PCR全稱(chēng)為_(kāi)______________，是一項(xiàng)⑥過(guò)程：a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成___________b、退火（復(fù)性55℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈⑥過(guò)程：a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板b、基因工程(復(fù)習(xí))課件啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋