關(guān)于實驗大腸桿菌的培養(yǎng)和分離第一頁，共七十八頁，2022年，8月28日微生物包括哪五類：病毒細菌放線菌真菌原生生物特點：結(jié)構(gòu)簡單,形體微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu).且體內(nèi)一般不含有葉綠素.不能進行光合作用.

原核生物界

原生生物界真菌界病毒界一、基礎(chǔ)知識：

(一)微生物第二頁，共七十八頁，2022年，8月28日大腸桿菌（E.coli）分布：人和哺乳動物腸道，此外還廣泛分布于水、污水、土壤、谷類、乳制品等當中。大腸桿菌在人體的_____中一般對人體無害，但任何大腸桿菌如果進入__________都會對人體產(chǎn)生危害。大腸桿菌是_______工程中被廣泛采用的工具。腸道泌尿系統(tǒng)基因革蘭氏______（填陰或陽）性菌陰代謝類型：異養(yǎng)，兼性厭氧型生長適宜溫度：質(zhì)粒、EcoRⅠ限制酶、E.coli-DNA連接酶、受體細胞37℃左右第三頁，共七十八頁，2022年，8月28日細菌的代謝類型自養(yǎng)型細菌異養(yǎng)型細菌:光合自養(yǎng)型:化能自養(yǎng)型:大部分腐生菌和寄生菌如藍細菌如硝化細菌1、同化作用類型2、異化作用類型需氧型細菌厭氧型細菌兼性厭氧型細菌大多數(shù)細菌如破傷風桿菌如酵母菌、大腸桿菌。大腸桿菌屬于異養(yǎng)、兼性厭氧型細菌第四頁，共七十八頁，2022年，8月28日大腸桿菌酵母菌放線菌霉菌菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量生長繁殖時，所形成的肉眼可見的具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體。不同微生物形成的菌落具有不同的特征，是鑒定菌種的重要依據(jù)。如菌落的大小、形狀、邊緣、光澤度、顏色、透明度等。菌落的概念白色或乳白色，光滑大腸桿菌菌落：第五頁，共七十八頁，2022年，8月28日芽孢

有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌.第六頁，共七十八頁，2022年，8月28日一、基礎(chǔ)知識：（二）培養(yǎng)基

培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。（2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。1.培養(yǎng)基的類型和用途第七頁，共七十八頁，2022年，8月28日液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長第八頁，共七十八頁，2022年，8月28日固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔第九頁，共七十八頁，2022年，8月28日半固體培養(yǎng)基：無動力有動力(彌散)(是否運動)

第十頁，共七十八頁，2022年，8月28日選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌

不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物

加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:

分離導(dǎo)入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基:

分離雜交瘤細胞第十一頁，共七十八頁，2022年，8月28日天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點：來源受限;成分復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析;易發(fā)生支原體污染;

根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。

優(yōu)點：標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定;成本低缺點：缺少某些成分，不能完全滿足體外細胞生長需要。合成培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基：第十二頁，共七十八頁，2022年，8月28日血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分

人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。第十三頁，共七十八頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌，常用于發(fā)酵工業(yè)固體培養(yǎng)基：增菌，菌種保存及分離純化、鑒定菌落、活菌計數(shù)等半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種第十四頁，共七十八頁，2022年，8月28日不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方調(diào)節(jié)pH2、成分水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子(生長因子即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)真菌：5～6細菌：6.5～

7.5有時會加一定量的氯化鈉以維持一定的滲透壓第十五頁，共七十八頁，2022年，8月28日1.無菌操作的概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止________污染的方法。四、無菌操作_________必須無菌、_________也必須要無菌、___________時不能帶入其他雜菌主要包括：雜菌2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

消毒：使用較溫和理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)部的一部分對人體有害的微生物的過程。不能殺死芽孢和孢子。滅菌：使用強烈的理化因素消滅物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。各種器具培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移菌種第十六頁，共七十八頁，2022年，8月28日比較消毒與滅菌較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能能全部微生物強烈第十七頁，共七十八頁，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）灑精燈灼燒滅菌干熱滅菌（1）滅菌方法：3、常用的滅菌和消毒的方法培養(yǎng)基、無菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具100kPa、121℃下維持15-30min需要保持干燥耐高溫的玻璃金屬器皿160-170℃下加熱1-2h接種環(huán)等金屬器具第十八頁，共七十八頁，2022年，8月28日第十九頁，共七十八頁，2022年，8月28日1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(2)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法第二十頁，共七十八頁，2022年，8月28日請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。第二十一頁，共七十八頁，2022年，8月28日（一）制備LB培養(yǎng)基（通用的細菌培養(yǎng)基）1、配方：蛋白胨0.5克，酵母提取物0.25克，氯化鈉0.5克，水50ml（配固體培養(yǎng)基再加瓊脂1克）溶解計算稱量調(diào)pH分裝加塞，包扎2、流程二操作步驟滅菌倒平板第二十二頁，共七十八頁，2022年，8月28日①分裝：注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，因此在將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶或試管中時必須用__________。②加塞：試管用塑料蓋或________；三角瓶口用_______或_________封口,再用_________或報紙封口。③包扎：用________或報紙三角漏斗棉花塞封口膜6層紗布牛皮紙牛皮紙高壓蒸氣滅菌法④滅菌1）加水：2）裝鍋：向外層鍋內(nèi)加入適量的水，加水的要求是_________.物品放置的要求______________________：加蓋：將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的_______內(nèi)。再以________方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。不觸及內(nèi)膽整齊、穩(wěn)定、留出空隙排氣槽兩兩對稱第二十三頁，共七十八頁，2022年，8月28日3）加熱排氣：4）保溫保壓：5）出鍋：

打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的_______。_________________后，關(guān)上排氣閥。

當鍋內(nèi)壓力升到_______kg/cm2時，控制熱源，維持壓力至______min。

切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力降至____時，打開________，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。冷空氣待冷空氣完全排盡0115排氣閥否則會因鍋內(nèi)壓力較高，打開氣閥后造成的壓力差可能使容器內(nèi)的培養(yǎng)基噴濺造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染，甚至使容器爆炸。滅菌后，通常將實驗用具放入60℃~80℃_____中烘干，以除去滅菌時的水分，避免引起_____。烘箱污染第二十四頁，共七十八頁，2022年，8月28日倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至_____℃時，將每只培養(yǎng)皿倒入_________ml未凝固的固體培養(yǎng)基，置于_____位置上，輕輕晃動使其均勻鋪滿平皿底部，待凝，使之形成平面。_______備用。制斜面：將未凝固的固體培養(yǎng)基的試管____放，冷卻待凝使即成為斜面。６０10～12水平倒置斜⑤倒平板、制斜面操作平臺：滅菌好的培養(yǎng)基和實驗器具置于超凈臺上打開_________和___________，滅菌30min.過濾風紫外線超凈臺第二十五頁，共七十八頁，2022年，8月28日思考題：A、操作過程中避免帶入雜菌的方法有哪些？1、滅菌后的培養(yǎng)基、器具置于超凈臺上，并打開超凈臺的紫外燈和過濾風，滅菌30分鐘。2、用鑷子夾出灑精棉球擦拭桌面和實驗者雙手。3、整個操作在酒精燈火焰旁進行4、打開后或加塞前試管口、三角瓶口灼燒滅菌。B、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到60后才倒平板，你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度呢？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。第二十六頁，共七十八頁，2022年，8月28日思考題C、為何要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落培養(yǎng)基，造成污染。

D、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。E、如何檢查培養(yǎng)基是否受雜菌的污染？將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)，若無菌落產(chǎn)生則未受雜菌污染。第二十七頁，共七十八頁，2022年，8月28日（二）液體培養(yǎng)基接種培養(yǎng)主要器具：操作方法：先將接種環(huán)進行_____滅菌,______后的接種環(huán)挑取少量菌種，放入三角瓶的液體培養(yǎng)基中，加塞。置于____℃搖床振蕩培養(yǎng)１２小時。無菌操作：略搖床思考：如何冷卻接種環(huán)？可通過接觸試管內(nèi)壁或未長菌的培養(yǎng)基達到冷卻的目的。接種環(huán)、搖床等３７灼燒冷卻第二十八頁，共七十八頁，2022年，8月28日（三）平板劃線分離法主要器具：操作過程：注意：無菌操作方法：同前。將培養(yǎng)皿______（蓋在下），放于_____℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)__________小時。在作第二次以及其后的劃線操作時，要從上一次劃線的開始________劃線。接種環(huán)、思考：若如上圖所示進行劃線分離，則接種環(huán)總共進行幾次灼燒滅菌？恒溫培養(yǎng)箱。每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。末端１２～２４倒置３７第二十九頁，共七十八頁，2022年，8月28日第三十頁，共七十八頁，2022年，8月28日

平板劃線的操作方法交叉劃線法連續(xù)劃線法

第三十一頁，共七十八頁，2022年，8月28日

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。2、在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。第三十二頁，共七十八頁，2022年，8月28日3.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。4.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。5、如何判斷接種操作是否符合無菌要求？如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求。第三十三頁，共七十八頁，2022年，8月28日（四）稀釋涂布平板法主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管操作過程：先將培養(yǎng)菌液稀釋（10-5~10-7倍）用移液管或吸管取0.1ml稀釋度不同的菌液，加在平板上，用無菌玻璃三角刮刀均勻涂布在培養(yǎng)基平面上。在適當稀釋度下，可培養(yǎng)得到相互分開的的菌落。將培養(yǎng)皿倒置（蓋在下），放于３７℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１２～２４小時。劃線分離方法簡單；涂布分離，易形成單菌落，但操作復(fù)雜些。第三十四頁，共七十八頁，2022年，8月28日10g土樣從土壤中分離微生物稀釋涂布法第三十五頁，共七十八頁，2022年，8月28日（五）斜面接種及菌種保存主要器具：操作過程：在無菌操作下，用接種環(huán)挑取___菌落，再用劃線法（自斜面底部向上輕輕劃直線）接種在_____上，_____℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)____小時后，____℃冰箱保存。無菌操作：同前試管斜面培養(yǎng)基密閉效果比平面的好很多,不容易進入雜菌，同時能用來做純細菌的長期保存。思考：菌種保存為何采用斜面而不是平板？接種環(huán)、恒溫箱、冰箱單斜面３７２４４第三十六頁，共七十八頁，2022年，8月28日菌種的保存1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。

2、長期保存：甘油冷凍管藏法第三十七頁，共七十八頁，2022年，8月28日實驗一大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實驗步驟：一配制LB培養(yǎng)基溶解計算稱量調(diào)pH分裝加塞，包扎滅菌二倒平板、制斜面三大腸桿菌的培養(yǎng)三大腸桿菌的分離平板劃線分離法（或稀釋涂布平板法）使所需細菌大量繁殖獲得單菌落，純化菌株四斜面接種培養(yǎng)目的菌株的純培養(yǎng)和菌種保存第三十八頁，共七十八頁，2022年，8月28日類型一培養(yǎng)基及無菌技術(shù)【典例1】(2015·紹興模擬)請回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題。(1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于

。第三十九頁，共七十八頁，2022年，8月28日(2)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。第四十頁，共七十八頁，2022年，8月28日根據(jù)物理狀態(tài)劃分，該培養(yǎng)基屬于

(固體、液體)培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基中的碳源是

。(3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行

(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需要進行清洗和

?？諝庵械募毦捎米贤饩€殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能

。第四十一頁，共七十八頁，2022年，8月28日(4)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入

中滅菌，溫度為

，時間為

。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時，將試管取出。如果棉塞上沾有培養(yǎng)基，此試管應(yīng)

。(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時注意，先向鍋內(nèi)倒入

。把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后，將鍋密閉。若在滅菌前，沒有排盡鍋內(nèi)的冷空氣會導(dǎo)致

。

第四十二頁，共七十八頁，2022年，8月28日(6)從一支試管向另一支試管接種時注意，接種環(huán)要在酒精燈

(選填“內(nèi)焰”或“外焰”)滅菌，并且待接種環(huán)

后蘸取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管在適宜溫度下培養(yǎng)，長成菌落后放入

冰箱中保存。第四十三頁，共七十八頁，2022年，8月28日【解題指南】解答本題需明確以下兩點：(1)根據(jù)表中提供的信息分析培養(yǎng)基的類型。(2)根據(jù)題干信息總結(jié)無菌操作應(yīng)注意的問題。第四十四頁，共七十八頁，2022年，8月28日【解析】(1)大腸桿菌營腐生生活，從生態(tài)系統(tǒng)的成分來看，大腸桿菌屬于分解者。(2)表中的培養(yǎng)基配方中含有瓊脂，是固體培養(yǎng)基，其中能為大腸桿菌提供碳元素的物質(zhì)有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)微生物培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進行滅菌，操作者的雙手要進行消毒；紫外線殺菌的原理是紫外線不僅能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。第四十五頁，共七十八頁，2022年，8月28日(4)培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)用高壓蒸汽滅菌鍋，在壓力為1kg/cm2、溫度為121℃條件下，滅菌15min。若棉塞上沾有培養(yǎng)基，易被雜菌污染，應(yīng)廢棄。(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時要先加入適量水，否則沒有高壓蒸汽，還有可能損壞設(shè)備。(6)酒精燈外焰溫度高，滅菌效果好。灼燒后待冷卻后再蘸取菌種，否則會殺死菌種造成實驗失敗。第四十六頁，共七十八頁，2022年，8月28日答案：(1)分解者(2)固體乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)(4)高壓蒸汽滅菌鍋121℃

15min廢棄(5)適量水鍋內(nèi)溫度上升不到應(yīng)有度數(shù)，使滅菌不徹底(6)外焰冷卻4℃第四十七頁，共七十八頁，2022年，8月28日【互動探究】(1)培養(yǎng)大腸桿菌除用題中所給培養(yǎng)基外，還可用何種培養(yǎng)基？提示：LB液體培養(yǎng)基。(2)表中的培養(yǎng)基在配制時應(yīng)如何操作？提示：表中的培養(yǎng)基中含有瓊脂成分，配制時要不斷攪拌，否則易引起瓊脂糊底而使燒杯炸裂。第四十八頁，共七十八頁，2022年，8月28日【加固訓練】(2015·嘉興模擬)下面是肺炎雙球菌離體轉(zhuǎn)化實驗的主要步驟：第四十九頁，共七十八頁，2022年，8月28日(1)實驗用的器皿必須是無菌的，常用

法滅菌。用此法對培養(yǎng)基滅菌時，常將培養(yǎng)基裝在

(器皿)中進行。(2)實驗操作需在超凈工作臺上進行。工作臺上，實驗前一段時間需打開，而實驗中需關(guān)閉的是

。A.酒精燈B.照明燈C.過濾風D.紫外燈(3)平面培養(yǎng)基與懸浮培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基相比，應(yīng)增加的成分是

。

第五十頁，共七十八頁，2022年，8月28日(4)常用涂布法給平面培養(yǎng)基接種。下列敘述錯誤的是(

)A.接種的目的是使細菌相互分離B.接種需過濾除去雜菌后進行C.接種工具需灼燒后使用D.接種需在酒精燈火焰旁進行(5)在37℃恒溫箱中培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿需

，主要目的是避免水滴影響

的形成。(6)培養(yǎng)后，如果觀察到菌落重疊，則在涂布法接種之前需進行

操作。第五十一頁，共七十八頁，2022年，8月28日【解析】(1)微生物培養(yǎng)實驗中的各種器皿常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，培養(yǎng)基則裝在三角瓶中再進行滅菌。(2)在超凈工作臺上操作時應(yīng)關(guān)閉紫外燈，避免對實驗者造成傷害。(3)平面培養(yǎng)基因含有瓊脂而呈固體或半固體狀態(tài)。(4)接種的目的是為了得到所需要的細菌，在無菌條件下進行，雜菌和肺炎雙球菌大小差不多，所以用過濾的方法是不能除去雜菌的。(5)培養(yǎng)皿在培養(yǎng)箱中應(yīng)倒置，防止水滴滴落污染培養(yǎng)基，影響單菌落的形成。(6)如果菌落重疊，說明菌液濃度過高，需要稀釋。第五十二頁，共七十八頁，2022年，8月28日答案：(1)高壓蒸汽滅菌三角瓶(2)D

(3)瓊脂(4)B(5)倒置單菌落(6)稀釋菌液第五十三頁，共七十八頁，2022年，8月28日類型二大腸桿菌的培養(yǎng)和分離【典例2】大腸桿菌是生存在人體腸道中的正常菌群，每克糞便中含有109個，且能夠與致病菌混雜生長。如果食品和飲用水中出現(xiàn)大腸桿菌，就意味著食物可能被糞便污染而帶上致病菌，因而常將大腸桿菌的數(shù)量作為食品衛(wèi)生的檢測指標之一。請據(jù)此回答下列問題：第五十四頁，共七十八頁，2022年，8月28日(1)測定街邊出售的奶茶中大腸桿菌的數(shù)目，常用涂布分離法進行測定。該方法首先配制LB

培養(yǎng)基，進行高壓蒸汽滅菌后冷卻至60℃，在

旁倒在培養(yǎng)皿中形成平板；對奶茶樣品進行一定倍數(shù)的稀釋，取0.1mL奶茶稀釋液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用

涂布在培養(yǎng)基平面上，然后進行培養(yǎng)；觀察統(tǒng)計培養(yǎng)皿中

數(shù)目；該數(shù)據(jù)比實際數(shù)值要

(填“高”或“低”)，原因是

。實驗完成后需要對培養(yǎng)基進行

處理，然后才能倒掉。

第五十五頁，共七十八頁，2022年，8月28日(2)若要對上述培養(yǎng)基中的菌種進行擴大培養(yǎng)，則需配制LB

培養(yǎng)基，滅菌后，將

在酒精燈火焰上燒紅后冷卻，然后蘸取單菌落中的菌體接種到新的培養(yǎng)基中，在適宜環(huán)境中培養(yǎng)

h即可。第五十六頁，共七十八頁，2022年，8月28日【解析】(1)微生物的分離通常用固體培養(yǎng)基。為防止雜菌污染，要在酒精燈火焰旁倒平板。在用涂布分離法分離細菌時，為了使細菌均勻涂布在固體培養(yǎng)基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培養(yǎng)基上。通過觀察菌落數(shù)推算細菌數(shù)目。培養(yǎng)基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一個菌落，因此觀察到的菌落數(shù)可能比實際菌落數(shù)低。為了防止實驗菌污染環(huán)境，實驗完成后需要對培養(yǎng)基進行滅菌處理，然后才能倒掉。第五十七頁，共七十八頁，2022年，8月28日(2)對微生物進行擴大培養(yǎng)，通常使用液體培養(yǎng)基。一般用接種環(huán)轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)物。接種時，先將接種環(huán)在明火上燒紅后冷卻，然后蘸取帶菌的培養(yǎng)物，接種到新的培養(yǎng)基中。在液體培養(yǎng)基中，只要接種培養(yǎng)12h，每毫升培養(yǎng)基中就有幾億個細菌。答案：(1)固體酒精燈火焰玻璃刮刀(涂布棒)菌落低培養(yǎng)基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一個菌落滅菌(2)液體接種環(huán)12第五十八頁，共七十八頁，2022年，8月28日【加固訓練】(2015·杭州模擬)大腸桿菌是生活在人和高等動物體內(nèi)的一種常見細菌，在飲用水的檢測中常用它作為水源是否受到污染的指示菌，在遺傳學上常作為實驗材料，在基因工程中常用它作為受體細胞，為人類的健康和科學技術(shù)的發(fā)展作出了許多貢獻。請回答下列有關(guān)大腸桿菌的問題：(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮

、

和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、易培養(yǎng)、

等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。第五十九頁，共七十八頁，2022年，8月28日(2)分離大腸桿菌時常用的接種方法是

法和

法。前者操作簡單，后者

更易分開，但操作復(fù)雜些。(3)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當?shù)臅r間，觀察

。第六十頁，共七十八頁，2022年，8月28日(4)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，下列對操作過程說法不妥的是(

)A.嚴格操作、多次重復(fù)B.保證待測樣品稀釋的濃度比較合適C.倒平板培養(yǎng)D.計數(shù)所有菌落，取其平均值(5)通常對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小、硬度和顏色等

對細菌進行初步的鑒定(或分類)。第六十一頁，共七十八頁，2022年，8月28日【解題指南】解答本題的關(guān)鍵有兩個方面：(1)在微生物培養(yǎng)操作過程中需要滅菌，不同的對象采用的滅菌方法不同。比較各種滅菌方法，并說明各種方法能消滅細菌的原因。(2)菌種的鑒定通常使用固體培養(yǎng)基，根據(jù)菌落的特征鑒定菌種，不能用單個的細菌進行菌種鑒定。第六十二頁，共七十八頁，2022年，8月28日【解析】(1)大腸桿菌的培養(yǎng)除需要合適的營養(yǎng)條件外，還需要適宜的溫度、酸堿度(pH)和滲透壓。由于大腸桿菌變異類型容易選擇、繁殖速度快，常作為遺傳學研究的實驗材料。(2)分離微生物常用的接種方法有劃線分離法和涂布分離法。前者方法簡單；后者單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些。第六十三頁，共七十八頁，2022年，8月28日(3)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當?shù)臅r間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。若固體培養(yǎng)基被細菌污染，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，細菌會大量繁殖，形成菌落，可根據(jù)菌落數(shù)量的多少判斷污染程度。第六十四頁，共七十八頁，2022年，8月28日(4)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，應(yīng)該采用倒平板培養(yǎng)，并且嚴格操作、多次重復(fù)；保證待測樣品稀釋的濃度比較合適。(5)對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌進行初步的鑒定。第六十五頁，共七十八頁，2022年，8月28日答案：(1)溫度酸堿度(pH)生活周期短(或繁殖快)(2)劃線分離涂布分離單菌落(3)培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(4)D

(5)菌落特征第六十六頁，共七十八頁，2022年，8月28日類型三分離以尿素為氮源的微生物【典例3】(2012·浙江高考)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下：第六十七頁，共七十八頁，2022年，8月28日請回答：(1)在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有

，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現(xiàn)

色環(huán)帶。(2)下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是

滅菌。A.高壓蒸汽B.紫外燈照射C.70%酒精浸泡D.過濾第六十八頁，共七十八頁，2022年，8月28日(3)步驟X表示

。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液

到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得

菌落。(4)在培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置并放在

中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致

。(5)臨床上用14C呼氣實驗檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標記的

分解為NH3和14CO2。

第六十九頁，共七十八頁，2022年，8月28日【解題指南】解答本題需注意兩個方面：(1)細菌和真菌的培養(yǎng)步驟一般為配制培養(yǎng)基、高溫滅菌、冷卻倒平板、接種、適宜條件下進行培養(yǎng)，依據(jù)這一步驟推測X的名稱。(2)檢測尿素是否分解依據(jù)其分解