試劑盒基礎(chǔ)知識(shí)試劑盒的概念把某一項(xiàng)臨床生化分析測(cè)定項(xiàng)目的試劑及輔助用品配套組裝在一起，各組分在較長(zhǎng)的保存期內(nèi)穩(wěn)定使用時(shí)按試劑盒中的說明書操作。試劑盒所采用的測(cè)定方法特異性好、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度符合衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心、IFCC、WHO等推薦的指標(biāo)。試劑盒的儲(chǔ)存期至少為1年。水溶性、低粘度、無腐蝕、無毒害、不爆炸、不易燃、不污染環(huán)境。所用標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)參考物符合衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心、IFCC、WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)和要求。試劑盒的要求特異性：即專一性，指分析測(cè)定中只對(duì)某一物質(zhì)起反應(yīng)，對(duì)其他物質(zhì)毫無影響或基本沒有影響。例如，GLU的HK法靈敏度：化學(xué)反應(yīng)中能檢出的最小量準(zhǔn)確度：測(cè)定值與真值的相符合程度,常表示為真值與測(cè)定結(jié)果之差,單位與結(jié)果單位一致,或?yàn)檎嬷档陌俜直?常以“不準(zhǔn)確度”表示,目前使用標(biāo)準(zhǔn)差SD來評(píng)價(jià)精密度：同一標(biāo)本用同一方法在同樣條件下多次重復(fù)測(cè)定所得各次結(jié)果之間或各次結(jié)果與均值之間的相符合程度。精密度不能由數(shù)值表示,但以不精度方式進(jìn)行定量表示,即一組重復(fù)測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)CV來表示。

按劑型分類干粉試劑將各組份溶于液體中分裝再凍干，或用球磨粉碎、或混合后打成片劑，用前再加入指定量的緩沖液使其溶解（稱復(fù)溶），這種類型的試劑稱為干粉試劑。液體試劑優(yōu)點(diǎn)：液體試劑具有組份均一、瓶間差和批間差極其微小以及使用方便（不必復(fù)溶，避免了復(fù)溶時(shí)所用蒸餾水中污染雜質(zhì)的干擾）、操作誤差小等明顯優(yōu)勢(shì)。缺點(diǎn)：許多酶類試劑盒受溫度的影響保質(zhì)期短。濃縮試劑使用時(shí)只取很少的量，再加入重蒸水稀釋（例如：R-50l+重蒸水-250l）配制成工作液。按試劑組成分類單試劑

液體單試劑就是將某種生化檢驗(yàn)項(xiàng)目所用到的試劑科學(xué)地混合在一起，組成為一種試劑。應(yīng)用時(shí)，只須將標(biāo)本和試劑按一定比例混合，即可進(jìn)行相應(yīng)的生化反應(yīng)，然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)結(jié)果。雙試劑

液體雙試劑就是將某些生化檢測(cè)項(xiàng)目所用到的試劑，按用途科學(xué)地分成兩類，分別配成兩種試劑，通常第一試劑加入后可起到全部或部分消除某些內(nèi)源性干擾的作用，第二試劑為啟動(dòng)被檢測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試劑，兩種試劑混合后才共同完成被檢項(xiàng)目的生化反應(yīng)。按試劑組成分類單試劑優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便適用于各類生化分析儀，節(jié)約試劑位缺點(diǎn)：配方復(fù)雜（穩(wěn)定劑、掩蔽劑），穩(wěn)定性差，不

能完全避免內(nèi)外源物質(zhì)干擾。按試劑組成分類雙試劑的特點(diǎn)（1）可較徹底排除樣品空白和內(nèi)外源干擾物（2）更加符合酶偶聯(lián)反應(yīng)的特性和過程（3）試劑配方簡(jiǎn)單（4）試劑穩(wěn)定，便于儲(chǔ)存，運(yùn)輸和使用（5）可用抑制法直接測(cè)定某些同工酶增強(qiáng)了工作試劑的穩(wěn)定性：試劑組分高度均一：不必凍干復(fù)溶，避免了干粉試劑復(fù)溶時(shí)所用蒸餾水污染雜質(zhì)的干擾作用。避免了干粉試劑盒分裝，凍干，復(fù)溶過程中引起的瓶間差，提高了測(cè)定的精密度和準(zhǔn)確度.液體雙試劑的優(yōu)點(diǎn)按是否為專用包裝分類專用包裝試劑：7060、7170、貝克曼包裝等非專用包裝試劑試劑盒性能評(píng)價(jià)實(shí)用性可靠性實(shí)用性標(biāo)本類型操作要求服務(wù)要求：電力供應(yīng)，通風(fēng)環(huán)境，試劑處理等消耗品要求技術(shù)職能要求成本分析速度一般問題如臨床應(yīng)用價(jià)值、試劑的效期、包裝規(guī)格是否多樣、操作是否簡(jiǎn)便等?？煽啃裕ㄔ噭┖谢拘阅苤笜?biāo)）準(zhǔn)確度：測(cè)定值與真值的相符合程度精密度：同一標(biāo)本用同一方法在同樣條件下多次重復(fù)測(cè)定所得各次結(jié)果之間或各次結(jié)果與均值之間的相符合程度。線性范圍（分析范圍）干擾性靈敏度：化學(xué)反應(yīng)中能檢出的最小量穩(wěn)定性特異性方法學(xué)性能（IFCC，酶法，HDL，LDL方法等）重點(diǎn)選擇的幾個(gè)指標(biāo)準(zhǔn)確度通常以回收率、定值血清的靶值范圍、對(duì)照試驗(yàn)及干擾試驗(yàn)的結(jié)果來分析判斷。精密度試劑的瓶間差異、批內(nèi)精密度和批間差異三組測(cè)定的平均值之間應(yīng)無顯著差異，否則，試劑盒的均一性不符合要求。線性范圍指該試劑盒按其說明使用時(shí)可準(zhǔn)確測(cè)量的范圍?？垢蓴_作用雙試劑型試劑盒主要優(yōu)點(diǎn)是抗干擾作用。靈敏度采用蒸餾水（5%牛血清白蛋白溶液）作為空白樣本，空白樣本應(yīng)不含被測(cè)物。在生化分析儀上連續(xù)檢測(cè)20次，記錄檢測(cè)結(jié)果。計(jì)算20次結(jié)果的均值與標(biāo)準(zhǔn)差SD。以空白均值加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差作為報(bào)告方法的檢測(cè)限。穩(wěn)定性試劑盒穩(wěn)定性是指試劑盒在規(guī)定條件下儲(chǔ)存仍保持其性能指標(biāo)的期限。該期限應(yīng)符合規(guī)定的儲(chǔ)存期。方法有以下三種。1．原包裝試劑的穩(wěn)定性2．復(fù)溶后試劑的穩(wěn)定性3．不同溫度下的保存期重點(diǎn)選擇的幾個(gè)指標(biāo)常用監(jiān)測(cè)物質(zhì)的特性1．NADH輔酶I或NADPH輔酶II：乳酸脫氫酶（LDH）NAD+或NADP+（alt）蘋果酸脫氫酶（MDH）NAD+或NADP+（co2）谷氨酸脫氫酶（GLDH）NAD+或NADP+（hcy）常用監(jiān)測(cè)物質(zhì)的特性NADH或NADPH在340nm有特征性光吸收，而它們的氧化型NAD+或NADP+則沒有這個(gè)吸收峰，340nm波長(zhǎng)處的吸光度與NAD（P）H的濃度成正比。常用監(jiān)測(cè)物質(zhì)的特性2．H2O2指示反應(yīng)

葡萄糖氧化酶、尿酸酶、甘油氧化酶、膽固醇氧化酶：用于葡萄糖、尿酸、甘油、膽固醇的測(cè)定，可使相應(yīng)底物被O2氧化成H2O2，H2O2可通過一系列指示反應(yīng)來檢測(cè)。常用監(jiān)測(cè)物質(zhì)的特性①使單一的色素原顯色。無色色素原過氧化物酶（POD）存在下被H2O2氧化后可生成有色的色素。②使成對(duì)的色素原顯色。必須要兩個(gè)色素原共同存在，再在指示酶POD的催化下生成色素。③發(fā)光反應(yīng)。H2O2也可用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)來監(jiān)測(cè)，它是憑借某些熒光前身物在氧化后，處于激發(fā)狀態(tài)的分子可發(fā)射光子，光子量和H2O2的濃度成正比。常用監(jiān)測(cè)物質(zhì)的特性3．硝基苯衍生物

芳香酯酶、磷酸酯酶和硫酸酯酶：對(duì)-硝基酚和有機(jī)酸或無機(jī)酸形成的酯類

糖苷酶：對(duì)硝基酚和糖苷衍生物

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、芳香酰胺酶和胰蛋白酶：對(duì)-硝基苯胺的氨基酰衍生物常用監(jiān)測(cè)物質(zhì)的特性例一：堿性磷酸酶（ALP）磷酸對(duì)硝基苯＋H2OALP

磷酸鹽＋對(duì)硝基苯酚例一：γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）

γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺＋雙甘肽γ-GT

谷氨?；p甘肽＋5-氨基-2-硝基安息香酸試劑盒測(cè)定基本方法四個(gè)區(qū)域三大方法試劑盒測(cè)定基本方法四個(gè)區(qū)域

延遲區(qū)：delaytime,lagtime；

等速區(qū)：斜率相等的線性段；

過渡區(qū)：兩點(diǎn)固定時(shí)間法，可在此段開窗；

平衡區(qū)：終點(diǎn)法在此區(qū)內(nèi)開窗；試劑盒測(cè)定基本方法三大方法

速率法（Rate）：亦稱動(dòng)力學(xué)法，連續(xù)監(jiān)測(cè)法；

固定時(shí)間法（Fixedtime）：亦稱兩點(diǎn)法；

終點(diǎn)法（EndPoint）：一點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)終點(diǎn)法（日立系統(tǒng)）；Olympus只有終點(diǎn)法；Beckman的終點(diǎn)法1（不減試劑空白）終點(diǎn)法2（減去試劑空白）試劑盒測(cè)定基本方法速率法（Rate）：

測(cè)光點(diǎn)一般設(shè)置在加入啟動(dòng)因子并孵育一段時(shí)間后開始，持續(xù)1-3min。

一般應(yīng)用于酶類項(xiàng)目。

可以使用因數(shù)法來計(jì)算待測(cè)濃度。固定時(shí)間法

測(cè)光點(diǎn)設(shè)置在加入啟動(dòng)因子后，分前后兩點(diǎn)。

多用于免疫比濁法類項(xiàng)目終點(diǎn)法（EndPoint）：

按照測(cè)光點(diǎn)的個(gè)數(shù)分為：一點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)終點(diǎn)法。

兩點(diǎn)終點(diǎn)法的測(cè)光點(diǎn)一般分別設(shè)置在加入啟動(dòng)因子前后。

多數(shù)基質(zhì)類項(xiàng)目都采用這種方法。試劑盒測(cè)定基本方法試劑盒說明書一看反應(yīng)原理，確定測(cè)定方法、反應(yīng)方向、檢測(cè)波長(zhǎng)二看操作程序，確定試劑量、樣本量、反應(yīng)量三看標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控的使用方式及貨號(hào)四看標(biāo)本的要求，使用血清、血漿還是尿液及注意事項(xiàng)五看試劑/工作試劑的穩(wěn)定性六看靈敏度、抗干擾性、線性范圍等技術(shù)指標(biāo)，觀察與其它試劑比較的優(yōu)缺點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和質(zhì)控品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)又稱參考物質(zhì)，是一類充分均勻，并具有一個(gè)(或多個(gè))確定的特性值的材料和物質(zhì)。作用：它用以校準(zhǔn)儀器設(shè)備、評(píng)價(jià)測(cè)量方法，或給其它物質(zhì)賦值。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果一般表示為：標(biāo)準(zhǔn)值±總不確定度。理解標(biāo)準(zhǔn)品和校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品的定值由稱量和容積計(jì)算確定。檢定不合格即報(bào)廢，決不可將實(shí)測(cè)值替代修正。校準(zhǔn)品為了克服因純標(biāo)準(zhǔn)液和患者樣品間的基體差異，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的嚴(yán)重誤差，20年前開始引用具有與患者樣品基體相似的校準(zhǔn)品替代標(biāo)準(zhǔn)品，用于日常工作?？墒牵M管校準(zhǔn)品的主要來源是人的血清，為了使校準(zhǔn)品內(nèi)的一些分析物水平達(dá)到某個(gè)程度，而且形成穩(wěn)定的產(chǎn)品，所有的校準(zhǔn)品、控制品、室間調(diào)查品等都是處理過的血清。和原來的天然血清間又產(chǎn)生了新的基體差異。理解標(biāo)準(zhǔn)品和校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品的特點(diǎn)

校準(zhǔn)值隨方法而異校準(zhǔn)品中被檢分析物的含量無法由稱量法和容量法確定，只能倚賴于分析方法。校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值必須取決于分析方法或檢測(cè)系列。

新鮮患者標(biāo)本是最佳校準(zhǔn)品須明確的，所有用于檢驗(yàn)中的檢測(cè)方法、儀器、試劑等都是用來檢測(cè)患者新鮮標(biāo)本的，不是用來檢測(cè)校準(zhǔn)品這樣的處理過樣品。理解標(biāo)準(zhǔn)品和校準(zhǔn)品質(zhì)控品IFCC的定是專門用于質(zhì)量控制目的的標(biāo)本或溶液，不用于校準(zhǔn)，對(duì)穩(wěn)定性、瓶間差要求高。分定值和不定值兩種。質(zhì)控品選擇：

應(yīng)該選擇有幾個(gè)濃度的、濃度范圍分布較寬的、最好是醫(yī)學(xué)決定水平的、有可報(bào)告范圍范圍是上下限值的質(zhì)控品。

人血清基質(zhì)，以減少基質(zhì)效應(yīng)；無傳染性；成分分布均勻，瓶間差??；液態(tài)及凍干品復(fù)溶后穩(wěn)定性性對(duì)要好。理解室內(nèi)質(zhì)量控制

在全面質(zhì)量管理體系中，