國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)與

細(xì)菌培養(yǎng)采樣方法

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)1第一部分

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)第一部分

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)2無(wú)菌技術(shù)操作的重要性無(wú)菌技術(shù)操作是每個(gè)醫(yī)務(wù)工作者憑良心做事的準(zhǔn)則，無(wú)菌技術(shù)的管理，在醫(yī)療護(hù)理技術(shù)操作中,對(duì)于預(yù)防感染或交叉感染,提高疾病治愈率，起著重要的作用。無(wú)菌技術(shù)管理質(zhì)量的優(yōu)劣，直接影響著醫(yī)療質(zhì)量的高低，這是保障病人順利康復(fù)的一個(gè)較為重要的環(huán)節(jié)。因而，醫(yī)務(wù)工作者必須注重加強(qiáng)細(xì)菌形態(tài)學(xué)和細(xì)菌生理學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí)，增強(qiáng)無(wú)菌觀念；在工作中嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作原則和規(guī)程，并對(duì)外來(lái)人員（包括進(jìn)修、實(shí)習(xí)生、參觀訪問(wèn)者）進(jìn)行無(wú)菌要求的指導(dǎo)和監(jiān)督，防止菌塵增落，減少被污染的機(jī)會(huì)。同時(shí)，要以對(duì)工作、對(duì)病人負(fù)責(zé)的精神，一絲不茍、不怕麻煩地做好清潔、消毒、滅菌等一系列瑣碎工作，每月進(jìn)行空氣及各種消毒物品的細(xì)菌培養(yǎng)，以確定菌落數(shù)量，鑒別細(xì)菌種類；確定病源，協(xié)助臨床診斷傳染病；有效控制室內(nèi)細(xì)菌繁殖、感染，達(dá)到以下衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。無(wú)菌技術(shù)操作的重要性3表1各類環(huán)境空氣物體表面醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)表1各類環(huán)境空氣4表1各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)表1各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總5

1.2各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手不得檢出致病性微生物不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他致病性微生物。在可疑污染情況下進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒及兒科病房的物體表面和醫(yī)護(hù)人員手上，不得檢出沙門氏菌。1.2各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員6

國(guó)家醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)2.1進(jìn)入人體無(wú)菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無(wú)菌。2.2接觸粘膜的醫(yī)療用品細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g或100cm2:：致病性微生物不得檢出。

國(guó)家醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)7

使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)3.1使用中消毒劑細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml，致病性微生物不得檢出。3.2、無(wú)菌器械保存液必須無(wú)菌4、污物處理衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)污染物品無(wú)論是回收再使用的物品，或是廢棄的物品，必須進(jìn)行無(wú)害化處理。不得檢出致病性微生物。在可疑污染情況下，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。

使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)8

第二部分

采樣方法第二部分

采樣方法9

采樣及檢查原則1.1操作者必須服裝整齊，戴好口罩、帽子，剪短指甲；洗凈雙手；操作時(shí)做到三輕，即走路輕、開門輕、放置或取器皿動(dòng)作輕。1.2采樣前，先將培養(yǎng)器皿分別用紅筆標(biāo)明取樣標(biāo)本序號(hào)。

采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過(guò)6h。若樣品保存0—4℃條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過(guò)24h。采樣及檢查原則10空氣采樣方法2.1采樣時(shí)間選擇消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間采樣。2.2采樣高度與地面垂直高度80—150cm。2.3布點(diǎn)方法室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)一條對(duì)角線上取3點(diǎn)，既中心一點(diǎn)、兩端各距墻1m處各取一點(diǎn)：室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻1m。2.4采樣方法用9cm直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5min后送檢培養(yǎng)。空氣采樣方法11空氣采樣方法2.5操作時(shí)，前臂不能越過(guò)已打開的培養(yǎng)皿；放培養(yǎng)器皿時(shí)，要從內(nèi)往外放，取時(shí)要從外往內(nèi)，動(dòng)作不能粗重，以免影響培養(yǎng)效果。2.6按照平開平放法或平開扣放法放置5分鐘，即送檢驗(yàn)室化驗(yàn)結(jié)果?？諝獠蓸臃椒?.5操作時(shí)，前臂不能越過(guò)已打開的培養(yǎng)皿；放12物體表面采樣方法

3.1采樣時(shí)間選擇消毒處理后4h內(nèi)進(jìn)行采樣。

3.2采樣面積被采表面＜100cm2，取全部表面：被采表面≥100cm2，取100cm2

3.3采樣方法用5×5cm2的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭紙1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭紙，連續(xù)采樣1—4個(gè)規(guī)格板面積，用無(wú)菌剪剪去手接觸部分，將棉拭紙放入裝10ml采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭紙直接涂抹物體的方法采樣。放入物品前后，瓶口必須按常規(guī)在酒精燈上烘烤，然后蓋好蓋塞送細(xì)菌培養(yǎng)。物體表面采樣方法13

實(shí)物采樣（液體培養(yǎng)試管)

進(jìn)行實(shí)物培養(yǎng)的目的，主要是確定使用中實(shí)物是否有細(xì)菌污染。培養(yǎng)實(shí)物有：器械、針線、膠片、硬外導(dǎo)管、手套、敷料、凡士林紗等。1、進(jìn)行實(shí)物采樣時(shí)，從細(xì)菌室取來(lái)的液體培養(yǎng)試管不能倒立，以免受污染。同時(shí)，標(biāo)明培養(yǎng)物品。2、無(wú)菌持物鉗（鑷子）和培養(yǎng)的物品，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，以便確定細(xì)菌來(lái)源是持物鉗或是物品。3、由兩人操作，在無(wú)菌操作下，一人打開無(wú)菌試管，將瓶口和瓶蓋在酒精燈上烘烤片刻；另一人用無(wú)菌持物鉗夾持準(zhǔn)備培養(yǎng)的無(wú)菌物品。如是化學(xué)浸泡物品，必須注意避免液體滴入試管內(nèi)；將物品放入試管中，應(yīng)注意不能碰及試管口，以免影響培養(yǎng)效果。4、放入物品后，瓶口必須按常規(guī)在酒精燈上烘烤，然后蓋好塞蓋送細(xì)菌培養(yǎng)。5、或用培養(yǎng)試管采樣液的棉拭紙進(jìn)行采樣，方法同上。

實(shí)物采樣（液體培養(yǎng)試管)

進(jìn)行實(shí)物培養(yǎng)的目的14創(chuàng)傷傷口、手術(shù)傷口分泌物細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本采樣1、同前采樣及檢查原則2、標(biāo)本采集：采取標(biāo)本時(shí)，先用無(wú)菌生理鹽水清洗病灶表面的污染雜菌，然后用無(wú)菌拭子提取病灶分泌物送檢。3、細(xì)菌培養(yǎng)及病原分離鑒定：標(biāo)本無(wú)菌采集后立即送檢，按實(shí)物采樣方法采樣。4、標(biāo)本處理完畢，送細(xì)菌室作細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定。

創(chuàng)傷傷口、手術(shù)傷口分泌物細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本采樣1、15醫(yī)護(hù)人員手采樣方法（試管法）醫(yī)務(wù)人員手采樣目的：是為了檢測(cè)醫(yī)務(wù)人員的責(zé)任感，防止將帶有細(xì)菌的手污染無(wú)菌傷口。1、按無(wú)菌操作要求，進(jìn)行手細(xì)菌采樣。2、選定抽查對(duì)象，（手術(shù)室參加手術(shù)者事先不能通知被抽查對(duì)象）。4.1采樣時(shí)間在接觸病人、從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣。4.2采樣面積及方法被檢人五指并攏，將浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭紙一支在雙手指曲面從指根到指端來(lái)回涂擦各兩次（一只手涂擦面30cm2）并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭紙，用無(wú)菌剪剪去手接觸部位，將棉拭紙放入裝有10ml采樣液的試管內(nèi)送檢。采樣面積按平方厘米計(jì)算。醫(yī)護(hù)人員手采樣方法（試管法）醫(yī)務(wù)人員手采樣目的：是為了檢測(cè)醫(yī)16

醫(yī)護(hù)人員手采樣方法

(營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板采樣法）

進(jìn)行手劃痕采樣按常規(guī)洗手后，待消毒液稍干，即由其用食指在培養(yǎng)基上劃“十”字痕。操作完畢，即送細(xì)菌室培養(yǎng)。如有細(xì)菌生長(zhǎng)，應(yīng)告知被抽查者，并追蹤污染源。醫(yī)護(hù)人員手采樣方法

(營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板采樣法）

進(jìn)行手劃痕采17

醫(yī)療用品采樣方法

5.1采樣時(shí)間在消毒或滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。

5.2采樣量及采樣方法可用破壞性方法取樣的醫(yī)療用品，如輸液（血）器、注射器和注射針等均參照《中華人民共和國(guó)藥典》1990年版一部附錄中《無(wú)菌檢查法》規(guī)定執(zhí)行。對(duì)不能用破壞性方法取樣的特殊醫(yī)療用品，可用浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。醫(yī)療用品采樣方法18使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液

6.1采樣時(shí)間

采取更換或使用中的消毒劑與無(wú)菌器械保存液。

使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液

6.1采樣時(shí)間

采取19使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液

6.2采樣量及方法

在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌吸管吸取1ml被檢樣液，加入9ml稀釋液中混均，對(duì)于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯即可；對(duì)于含氯消毒劑、含碘消毒劑、過(guò)氧化物消毒劑，需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉；對(duì)于洗必泰，季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3%（w/v）吐溫80和0.3%卵磷脂；對(duì)于醛類消毒劑，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對(duì)于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入3%（w/v）吐溫80，以中和備檢樣液的殘效作用。使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液

6.2采樣量及方法

在無(wú)菌條20謝謝!謝謝!21

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)與

細(xì)菌培養(yǎng)采樣方法

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)22第一部分

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)第一部分

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)23無(wú)菌技術(shù)操作的重要性無(wú)菌技術(shù)操作是每個(gè)醫(yī)務(wù)工作者憑良心做事的準(zhǔn)則，無(wú)菌技術(shù)的管理，在醫(yī)療護(hù)理技術(shù)操作中,對(duì)于預(yù)防感染或交叉感染,提高疾病治愈率，起著重要的作用。無(wú)菌技術(shù)管理質(zhì)量的優(yōu)劣，直接影響著醫(yī)療質(zhì)量的高低，這是保障病人順利康復(fù)的一個(gè)較為重要的環(huán)節(jié)。因而，醫(yī)務(wù)工作者必須注重加強(qiáng)細(xì)菌形態(tài)學(xué)和細(xì)菌生理學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí)，增強(qiáng)無(wú)菌觀念；在工作中嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作原則和規(guī)程，并對(duì)外來(lái)人員（包括進(jìn)修、實(shí)習(xí)生、參觀訪問(wèn)者）進(jìn)行無(wú)菌要求的指導(dǎo)和監(jiān)督，防止菌塵增落，減少被污染的機(jī)會(huì)。同時(shí)，要以對(duì)工作、對(duì)病人負(fù)責(zé)的精神，一絲不茍、不怕麻煩地做好清潔、消毒、滅菌等一系列瑣碎工作，每月進(jìn)行空氣及各種消毒物品的細(xì)菌培養(yǎng)，以確定菌落數(shù)量，鑒別細(xì)菌種類；確定病源，協(xié)助臨床診斷傳染??；有效控制室內(nèi)細(xì)菌繁殖、感染，達(dá)到以下衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。無(wú)菌技術(shù)操作的重要性24表1各類環(huán)境空氣物體表面醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)表1各類環(huán)境空氣25表1各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)表1各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總26

1.2各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手不得檢出致病性微生物不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他致病性微生物。在可疑污染情況下進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒及兒科病房的物體表面和醫(yī)護(hù)人員手上，不得檢出沙門氏菌。1.2各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員27

國(guó)家醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)2.1進(jìn)入人體無(wú)菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無(wú)菌。2.2接觸粘膜的醫(yī)療用品細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g或100cm2:：致病性微生物不得檢出。

國(guó)家醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)28

使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)3.1使用中消毒劑細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml，致病性微生物不得檢出。3.2、無(wú)菌器械保存液必須無(wú)菌4、污物處理衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)污染物品無(wú)論是回收再使用的物品，或是廢棄的物品，必須進(jìn)行無(wú)害化處理。不得檢出致病性微生物。在可疑污染情況下，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。

使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)29

第二部分

采樣方法第二部分

采樣方法30

采樣及檢查原則1.1操作者必須服裝整齊，戴好口罩、帽子，剪短指甲；洗凈雙手；操作時(shí)做到三輕，即走路輕、開門輕、放置或取器皿動(dòng)作輕。1.2采樣前，先將培養(yǎng)器皿分別用紅筆標(biāo)明取樣標(biāo)本序號(hào)。

采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過(guò)6h。若樣品保存0—4℃條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過(guò)24h。采樣及檢查原則31空氣采樣方法2.1采樣時(shí)間選擇消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間采樣。2.2采樣高度與地面垂直高度80—150cm。2.3布點(diǎn)方法室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)一條對(duì)角線上取3點(diǎn)，既中心一點(diǎn)、兩端各距墻1m處各取一點(diǎn)：室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻1m。2.4采樣方法用9cm直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5min后送檢培養(yǎng)。空氣采樣方法32空氣采樣方法2.5操作時(shí)，前臂不能越過(guò)已打開的培養(yǎng)皿；放培養(yǎng)器皿時(shí)，要從內(nèi)往外放，取時(shí)要從外往內(nèi)，動(dòng)作不能粗重，以免影響培養(yǎng)效果。2.6按照平開平放法或平開扣放法放置5分鐘，即送檢驗(yàn)室化驗(yàn)結(jié)果。空氣采樣方法2.5操作時(shí)，前臂不能越過(guò)已打開的培養(yǎng)皿；放33物體表面采樣方法

3.1采樣時(shí)間選擇消毒處理后4h內(nèi)進(jìn)行采樣。

3.2采樣面積被采表面＜100cm2，取全部表面：被采表面≥100cm2，取100cm2

3.3采樣方法用5×5cm2的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭紙1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭紙，連續(xù)采樣1—4個(gè)規(guī)格板面積，用無(wú)菌剪剪去手接觸部分，將棉拭紙放入裝10ml采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭紙直接涂抹物體的方法采樣。放入物品前后，瓶口必須按常規(guī)在酒精燈上烘烤，然后蓋好蓋塞送細(xì)菌培養(yǎng)。物體表面采樣方法34

實(shí)物采樣（液體培養(yǎng)試管)

進(jìn)行實(shí)物培養(yǎng)的目的，主要是確定使用中實(shí)物是否有細(xì)菌污染。培養(yǎng)實(shí)物有：器械、針線、膠片、硬外導(dǎo)管、手套、敷料、凡士林紗等。1、進(jìn)行實(shí)物采樣時(shí)，從細(xì)菌室取來(lái)的液體培養(yǎng)試管不能倒立，以免受污染。同時(shí)，標(biāo)明培養(yǎng)物品。2、無(wú)菌持物鉗（鑷子）和培養(yǎng)的物品，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，以便確定細(xì)菌來(lái)源是持物鉗或是物品。3、由兩人操作，在無(wú)菌操作下，一人打開無(wú)菌試管，將瓶口和瓶蓋在酒精燈上烘烤片刻；另一人用無(wú)菌持物鉗夾持準(zhǔn)備培養(yǎng)的無(wú)菌物品。如是化學(xué)浸泡物品，必須注意避免液體滴入試管內(nèi)；將物品放入試管中，應(yīng)注意不能碰及試管口，以免影響培養(yǎng)效果。4、放入物品后，瓶口必須按常規(guī)在酒精燈上烘烤，然后蓋好塞蓋送細(xì)菌培養(yǎng)。5、或用培養(yǎng)試管采樣液的棉拭紙進(jìn)行采樣，方法同上。

實(shí)物采樣（液體培養(yǎng)試管)

進(jìn)行實(shí)物培養(yǎng)的目的35創(chuàng)傷傷口、手術(shù)傷口分泌物細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本采樣1、同前采樣及檢查原則2、標(biāo)本采集：采取標(biāo)本時(shí)，先用無(wú)菌生理鹽水清洗病灶表面的污染雜菌，然后用無(wú)菌拭子提取病灶分泌物送檢。3、細(xì)菌培養(yǎng)及病原分離鑒定：標(biāo)本無(wú)菌采集后立即送檢，按實(shí)物采樣方法采樣。4、標(biāo)本處理完畢，送細(xì)菌室作細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定。

創(chuàng)傷傷口、手術(shù)傷口分泌物細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本采樣1、36醫(yī)護(hù)人員手采樣方法（試管法）醫(yī)務(wù)人員手采樣目的：是為了檢測(cè)醫(yī)務(wù)人員的責(zé)任感，防止將帶有細(xì)菌的手污染無(wú)菌傷口。1、按無(wú)菌操作要求，進(jìn)行手細(xì)菌采樣。2、選定抽查對(duì)象，（手術(shù)室參加手術(shù)者事先不能通知被抽查對(duì)象）。4.1采樣時(shí)間在接觸病人、從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣。4.2采樣面積及方法被檢人五指并攏，將浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭紙一支在雙手指曲面從指根到指端來(lái)回涂擦各兩次（一只手涂擦面30cm2）并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭紙，用無(wú)菌剪剪去手接觸部位，將棉拭紙放入裝有10ml采樣液的試管內(nèi)送檢。采樣面積按平方厘米計(jì)算。醫(yī)護(hù)人員手采樣方法（試管法）醫(yī)務(wù)人員手采樣目的：是為了檢測(cè)醫(yī)37

醫(yī)護(hù)人員手采樣方法

(營(yíng)