植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定種子生命力

指種子的萌發(fā)能力。種子生命力測(cè)定的常規(guī)方法發(fā)芽實(shí)驗(yàn)、浮力實(shí)驗(yàn)

種子生命力快速測(cè)定的常用方法BTB法、TTC法、以及熒光法、紙上熒光法、電導(dǎo)率測(cè)定法、冷凍測(cè)定法等二、知識(shí)背景植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定三、測(cè)定方法BTB法TTC法紅墨水法熒光法植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定1、BTB法——原理凡活細(xì)胞必有呼吸作用，吸收空氣中的O2，放出CO2。CO2溶于水成為H2CO3，H2CO3解離成H+和HCO3-，使得胚周圍環(huán)境的pH值降低，可用酸堿指示劑溴麝香草酚藍(lán)（BTB）來(lái)測(cè)定pH值的改變。顏色變化越明顯則表明種子活力越強(qiáng)。死細(xì)胞沒有呼吸作用，也沒有BTB的顏色變化。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定BTB法——試劑0.1%BTB溶液：溶解于煮沸過(guò)的自來(lái)水100mL中，用濾紙濾去殘?jiān)?。溶液若呈黃色，可滴加稀氨水或NaOH溶液，使之呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)綠色，棕色試劑瓶中保存。BTB瓊脂凝膠：取1g瓊脂煎碎后加入100mL0.1%BTB溶液中，用小火加熱并不斷攪拌。待瓊脂完全溶解后，趁熱倒在干燥潔凈的培養(yǎng)皿中，使之為一均勻的薄層，冷卻后備用。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定BTB法——材料與設(shè)備恒溫箱、培養(yǎng)皿、小麥或綠豆植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定BTB法——步驟浸種：將待測(cè)種子在30℃溫水中浸種24h。倒平板：取預(yù)先加熱融化的BTB瓊脂凝膠倒入培養(yǎng)皿，靜置冷卻，使之形成凝膠薄層。

顯色：取吸脹的種子，整齊地將胚向下埋于準(zhǔn)備好的BTB瓊脂凝膠培養(yǎng)皿中，間隔距離在1cm左右。然后將培養(yǎng)皿置于恒溫培養(yǎng)箱中30-35℃培養(yǎng)1h。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定BTB法——步驟1h后，記數(shù)種胚附近出現(xiàn)的黃色暈圈的活種子數(shù)，計(jì)算活種子的百分率。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定2、TTC法——原理

凡是有生命活力的細(xì)胞均具有呼吸作用，從而都有氧化還原反應(yīng)，而死細(xì)胞則無(wú)此反應(yīng)。TTC（氯化三苯四氮唑）可滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被輔酶（NADH2或NADPH2）上的氫還原，此時(shí)無(wú)色的TTC便轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色的TTF（三苯基甲曁），并吸附在活細(xì)胞的表面，根據(jù)活細(xì)胞著色的深淺可定性的判斷種子活力的有無(wú)與大小。

該方法在國(guó)際間、地區(qū)間交換種子最為常用。

注意：染色部位為生活種子的胚細(xì)胞。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定TTC法——試劑0.5%TTC溶液：（酒精溶解后）定容至100ml，棕色瓶4℃保存。若溶液變成紅色，表示已被氧化不能再用。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定TTC法——材料與設(shè)備恒溫箱、培養(yǎng)皿、玉米種子、刀片植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定TTC法——步驟浸種：同BTB法。顯色：取吸脹的種子適量，用刀片沿胚的中心線縱切為兩半，將每一種子的半粒置于培養(yǎng)皿中，另半粒待用。加入適量的0.5%TTC溶液（以浸沒種子為度），置于30℃恒溫箱中；1h后，倒去染色液，觀察現(xiàn)象。計(jì)算活種子的百分率。將待測(cè)種子在30℃溫水中浸種24h。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定3、紅墨水法——原理活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有選擇透性，紅墨水中的染色成分大紅G不能進(jìn)入細(xì)胞；因而胚不被紅墨水染色。死亡的種胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失選擇透性，大紅G進(jìn)入胚細(xì)胞并染色。

注意：生活種子的胚細(xì)胞不染色。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定紅墨水法——試劑5%紅墨水：以市購(gòu)紅墨水為原液，用自來(lái)水配制成5%的紅墨水溶液

紅墨水法——材料與設(shè)備恒溫箱、培養(yǎng)皿、玉米種子、刀片植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定紅墨水法——步驟浸種：同BTB法。顯色：將TTC法中剩余待用的一半種子置于另1只培養(yǎng)皿中，加入適量的5%紅墨水液（以浸沒種子為度）。15min后倒去紅墨水，用自來(lái)水沖洗多次，直至沖洗液為無(wú)色為止。觀察現(xiàn)象，判斷種子活力的有無(wú)和大小。計(jì)算活種子的百分率。將待測(cè)種子在30℃溫水中浸種24h。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定紅墨水法植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定活種子死種子植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定4、熒光法——原理

植物種子中常含有一些物質(zhì)，能在紫外線照射下產(chǎn)生熒光，如黃酮類、香豆素類、酚類等。在衰老過(guò)程中：熒光物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、成分往往發(fā)生變化，因而改變熒光的顏色?？山柚苯佑^察熒光來(lái)鑒定種子的生命力?！m用于禾谷類、松柏綱等植物的種子。細(xì)胞膜透性增加，導(dǎo)致浸種后熒光物質(zhì)外泄，可通過(guò)觀察熒光物質(zhì)的滲出情況判斷種子的生命力?！m用于十字花科植物的種子。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定熒光法——材料與儀器玉米種子。紫外光燈，不產(chǎn)生熒光的濾紙。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定熒光法——步驟隨機(jī)取20粒種子，用刀片將玉米種子沿中心線切為兩半，使其切面朝上放在濾紙上，置于紫外光燈下照射觀察。有生命力的種子將產(chǎn)生明亮的藍(lán)色、藍(lán)紫、藍(lán)綠色熒光。死亡種子往往呈黃色、褐色，并暗淡無(wú)光。觀察、計(jì)數(shù)，計(jì)算活種子的百分率。植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定熒光法觀察孔紫外分析儀電源選擇波長(zhǎng)植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定思考題1、試比較TTC法、BTB法、紅墨水法及熒光法，測(cè)定的結(jié)果是否相同?為什么?哪一種方法更準(zhǔn)確？它們與種子的實(shí)際萌芽率是否一致？如若有偏差，理論上應(yīng)為偏高還是偏低？為什么？植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定2、BTB法測(cè)定種子發(fā)芽率時(shí)，若用煮死的種子做比較，有時(shí)也發(fā)現(xiàn)在種子周圍出現(xiàn)黃色暈圈，為什么？3、如果用以上各方法來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察沒有完全成熟的種子，將會(huì)有怎樣的結(jié)果？思考題植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)植物種子生命力快速測(cè)定紙上熒光法原理：凡