菌種推理選育文獻(xiàn)綜述摘要推理選育是建立在已知的或較清楚的抗生素生物合成機(jī)制或化學(xué)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上的產(chǎn)生菌生物合成抗生素，在遺傳因子的控制下進(jìn)行的；同時(shí)還受到合成抗生素所必須的環(huán)境因素——營養(yǎng)物質(zhì)的調(diào)節(jié)，這些因素控制著抗生素生物合成的量變——增產(chǎn)、減產(chǎn)或消產(chǎn)及質(zhì)變——多組分混合物有其各組分含量或比率的增減或消除。以及微小組分轉(zhuǎn)化為主要組分或沉默基因活化導(dǎo)致新質(zhì)的產(chǎn)生，這些都受到遺傳與環(huán)境調(diào)控因素的影響[1]本文通過青霉素高產(chǎn)菌種的推理選育以及谷胱甘肽高產(chǎn)菌株的選育說明菌種推理選育的方法。青霉素高產(chǎn)菌種的推理選育材料與方法材料菌種青霉素產(chǎn)生菌20#菌種培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基（％）蛋白胨：0.6,葡萄糖：1.5,NaCL：0.5。KCL：0.05,KH2P04：0.03。MgSO,-7H20：0.005,CuS0,：0.002,FeS0,：0.0015,MnS04：0.00002,甘油：5,瓊脂：2.PH：6.8種子培養(yǎng)基（％）玉米漿：6.7,蔗糖：2.CaCO,：0.5（PH調(diào)后加入），PH：5.8發(fā)酵培養(yǎng)基（％）玉米漿：4.5,蔗糖：15,麩質(zhì)粉：l。KH2PO,：0.4,（NH4鶿04：1。無水硫酸鈉：o.15,CaC03：I（PH調(diào)后加入），PH：s9.6.0,種子培養(yǎng)基的制備：按所需量依次稱取各種原料加入裝有適量蒸餾水的玻璃容器中攪均，用2.5N的NaOH調(diào)PH至5.8補(bǔ)足體積使消后PH為6.0-6.1,加入碳酸鈣后分裝于250ml錐形瓶中裝量為40ml,250mi瓶。發(fā)酵培養(yǎng)基的制備：[2]方法同種子培養(yǎng)基，PH調(diào)至5.9,消后PH為5.6-6.0,每瓶中加0.25ml的油和0.1ml的前體溶液.裝量為30ml，250ml錐形瓶。1.2推理選育方法紫外線誘變處理20#菌種制成孢子懸液。將單孢子懸液置紫外燈下30cm處照射3-Stain,用吸管吸取誘變后的孢子懸液,稀釋10倍后,再進(jìn)行紫外線誘變處理。連續(xù)處理5次。[3]1.2.2定向篩選將紫外線照射處理后的孢子懸浮液依次于含纈氨酸、6.氨基青霉素烷酸、苯乙酸等底物的固體培養(yǎng)基平板中,置25"（2恒溫下培養(yǎng)7天。隨后挑選孢子豐富,結(jié)構(gòu)緊密的抗性菌落,傳斜面經(jīng)培養(yǎng)后、分別進(jìn)行搖瓶發(fā)酵,篩選高產(chǎn)菌株,得到突變菌株431#。結(jié)果與討論l群菌種經(jīng)傳代后其搖瓶效價(jià)和總憶得量并無明顯變化,證明該菌種特性穩(wěn)定（表1）。試驗(yàn)結(jié)果表明431#菌種無論在發(fā)酵效價(jià)或總憶產(chǎn)量發(fā)面都高于20#對(duì)照菌.分別提高了7％和7.6％（表2）。2討論我們以青霉菌生產(chǎn)菌株20#為出發(fā)菌株,經(jīng)紫外線照射誘變處理,并根據(jù)青霉素的代謝機(jī)理在固體培養(yǎng)基中加人底物纈氨酸、6-氨基青霉素烷酸、苯己酸,對(duì)誘變處理后的存活孢子進(jìn)行曲分離篩選.得到431#高產(chǎn)菌株。該菌株無論是發(fā)酵效價(jià)、總產(chǎn)量、單位菌絲產(chǎn)量,還是其它的特性方面均優(yōu)于對(duì)照菌株,僅發(fā)酵效價(jià)和總產(chǎn)量就提高7％左右.其傳代穩(wěn)定較好,用于生產(chǎn)后可望獲得較可觀的經(jīng)濟(jì)效益。自工業(yè)生產(chǎn)青霉素以來,人們無不為提高青霉素產(chǎn)生菌的產(chǎn)率而盡全力。通過各種育種方法來提高產(chǎn)量,降低消耗,推理選育為當(dāng)前一種積極可行的方法。[4]抗生素產(chǎn)生菌為了白身生存的需要，筑起了一通又一通的壁壘．阻礙因初、次級(jí)代謝產(chǎn)物過多積累而引起的身體自殺。通過人工的誘變，改變基因調(diào)節(jié)突變型菌株解除抑制，得到一系列抗性菌，使這有更高的產(chǎn)率．這是推理選育的產(chǎn)生結(jié)果．因此證明推理選育理論的生要性與適用性。谷胱甘肽高產(chǎn)菌株的選育誘變處理紫外線處理：取培養(yǎng)1~2d的新鮮斜面，用無菌生理鹽水洗下菌體制成菌懸液，經(jīng)玻璃珠振蕩打散和脫脂棉過濾后得單細(xì)胞懸浮液，調(diào)整菌懸液菌數(shù)108/ml左右，吸取3ml菌懸液至無菌的小平皿中，在15W紫外燈(距離30cm)照射下，磁力攪拌30s,菌懸液在無菌室紅燈下適當(dāng)稀釋涂平板，平板倒置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng))5~7d。射線輻照處理：采用培養(yǎng)好的新鮮試管斜面直接進(jìn)行輻照。分別以0.5kgy、2.0kgy劑量對(duì)試管中菌體進(jìn)行射線輻照，用無菌生理鹽水將經(jīng)輻照處理后的斜面制成菌懸液，并經(jīng)適當(dāng)稀釋后涂平板，平板倒置于28C恒溫箱中培養(yǎng)5~7day。[6]總結(jié)：由上述這些例子和筆者所列參考文獻(xiàn)來看，推理選育是一種常見的誘變方法，其主要的方式就是由紫外線射線等其他物化方法，提高其突變率，使其突變?cè)黾?，從而達(dá)到篩選菌種的目的。參考文獻(xiàn):辛繼國,宗兆霞.青霉素高產(chǎn)菌種的推理選育研究[J].南北橋.2009(4)賈建萍,裘娟萍?谷胱甘肽高產(chǎn)菌株的選育[J].微生物學(xué)通報(bào).2003,30(4).金志華，等.利福霉素B產(chǎn)生菌一地中海諾卡氏菌的推理選育[J].中國抗生素雜志，1995，20(3)：265—267．周德慶"微生物學(xué)教程"北京：高等教育出版社，1993,104-105.陳思妘，蕭熙佩"酵母生物化學(xué)"濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社,1990.61張旭麗,李昆,翁艷君,等.以青霉素菌種為主線的推理選育高效菌種的探索[J].黑龍江醫(yī)藥.2000,13(2).高德喜，白鐵忠?青霉素產(chǎn)生菌的誘變育種[J].黑龍江醫(yī)藥.2004,17(5).韓斌，韓峰?董艷峰青