1.蛋白質(zhì)組(proteome)：proteinsexpressedbyagenome,即基因組表達(dá)的用網(wǎng)絡(luò)PPI）2.表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)研究的基本流程：蛋白樣品的制備及定量-總蛋白的雙向凝指紋圖譜）-數(shù)據(jù)庫(kù)搜索鑒定蛋白性質(zhì)3.相互垂直的兩個(gè)方向上，分別基于蛋白質(zhì)不同的等電點(diǎn)和分子量，先經(jīng)等電聚焦電泳(isoelectricfocusing，IEF)，再經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）把復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分分離。4.比較蛋白質(zhì)組學(xué)：通過(guò)比較同一個(gè)體腫瘤細(xì)胞（組織）與正常細(xì)胞（組織）之間蛋白質(zhì)在表達(dá)數(shù)量、表達(dá)位置和修飾狀態(tài)上的差異，發(fā)現(xiàn)與腫瘤發(fā)病或者發(fā)展有關(guān)的分子標(biāo)記，用來(lái)作為腫瘤診斷的腫瘤相關(guān)蛋白。5.軟電離：所謂“軟電離”是指樣品分子電離時(shí)保留整個(gè)分子的完整性，不會(huì)形成碎片離子。6.serologicproteome是從腫瘤免疫學(xué)觀點(diǎn)出發(fā)建立的一種蛋白質(zhì)組學(xué)和腫瘤免疫學(xué)相結(jié)合的方法。SERPA其實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：①雙向電泳分離腫瘤組織（細(xì)胞）總蛋白質(zhì)；②轉(zhuǎn)膜；③建立westernblotting④軟件分析確定差異反應(yīng)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)；⑤質(zhì)譜鑒定和生物信息對(duì)腫瘤組織平行膠(replicagel)中相應(yīng)的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定，篩選出腫瘤分子標(biāo)志物；⑥用ELISA、免疫組化等方法對(duì)該分子標(biāo)志物進(jìn)行原位驗(yàn)證，或者進(jìn)一步分析該蛋白功能，研究其在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮的作用。7.蛋白質(zhì)芯片：是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體表面，形成微陣列，根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，構(gòu)建微流體生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)生物分子的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測(cè)。8.DNA/RNA間的相互作用的研究。建立細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳遞的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。研究方法主要有：蛋白質(zhì)芯片技術(shù)目前常用蛋白質(zhì)芯片有：1.SELDI-TOF-MS蛋白質(zhì)芯片2.抗體芯片3.靶蛋白質(zhì)芯片4.液相蛋白質(zhì)芯片噬菌體展示技術(shù)酵母雙雜交系統(tǒng)免疫共沉淀9.胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。10.比例29N,N,N,’N’-TEMED）2.蛋白上樣緩沖液3.電泳緩沖液4.考馬斯亮藍(lán)R250染色液5.脫色液11.Westernblotting基本原理:將SDS分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜(nitrocellulosemembrane)上,在膜上進(jìn)行固相免疫化學(xué)染色,原位顯示蛋白質(zhì)帶,從而在已知分子量的基礎(chǔ)上對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。12.Southwesternblotting基本原理:細(xì)胞核蛋白提取物經(jīng)SDS后,轉(zhuǎn)移至NCM上,然后用標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)轉(zhuǎn)移至膜上的蛋白質(zhì)。細(xì)胞死亡形式Celldeath表現(xiàn)細(xì)胞生命現(xiàn)象不可逆的停止細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的不可逆喪失。細(xì)胞死亡并非與機(jī)體死亡同步。正常組織中也發(fā)生細(xì)胞死亡，它是維持組織機(jī)能和形態(tài)所必需的。細(xì)胞壞死細(xì)胞受到外來(lái)的急性的強(qiáng)力的致病因素作用下，細(xì)胞正常代謝活動(dòng)被強(qiáng)行中斷而引起的“意外”的、被動(dòng)性死亡過(guò)程；只見(jiàn)于病理情況下。細(xì)胞腫脹，線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹。核染色質(zhì)隨機(jī)降解呈絮狀,蛋白合成減少。細(xì)胞膜、溶酶體破裂,細(xì)胞內(nèi)容物流出,引起周?chē)装Y指在一定的生理和病理?xiàng)l件下，多細(xì)胞有機(jī)體為調(diào)控機(jī)體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制并遵循一定程序的細(xì)胞主動(dòng)性死亡過(guò)程.又程序性細(xì)胞死亡(programmedcelldeath,PCD).凋亡小體：胞膜皺縮內(nèi)陷、反折，包圍凝集斷裂的染色質(zhì)、胞質(zhì)、細(xì)胞器等形成芽狀、泡狀突起并分離脫落，形成一些有膜包被，內(nèi)涵物不外溢的小塊，稱(chēng)凋亡小體（apoptotic多細(xì)胞生物體在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞在基因調(diào)控下，按照一定時(shí)空順序發(fā)生的受到嚴(yán)格程序控制的生理性死亡。“特殊的定時(shí)自殺”ApoptosisPCD:PCDApoptosis功能性概念發(fā)育學(xué)概念僅存在于發(fā)育細(xì)胞形態(tài)學(xué)概念可存在于發(fā)育和成體細(xì)胞大部分凋亡是PCD。PCD的最終結(jié)果是凋亡某些凋亡是非程序性。如細(xì)胞毒物誘導(dǎo)的凋亡13.凋亡的生物學(xué)意義1、確保正常生長(zhǎng)發(fā)育、2、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、3、防御功能14.細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征亡小體內(nèi)有結(jié)構(gòu)完整的細(xì)胞器。細(xì)胞凋亡的生化特征：染色質(zhì)DNA片段化內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶活化，將核小體間的連接DNA降解，形成長(zhǎng)度為180～200bp整倍數(shù)的寡聚核苷酸片段。在瓊脂糖凝膠電泳中呈特征性的“梯狀”條帶（DNAladder：)一些DNA片斷，經(jīng)過(guò)提取和純化后在凝膠電泳上產(chǎn)生n條梯狀條帶，故稱(chēng)之為DNALadder，是判斷DNA損傷的重）活躍，迅速合成RNA和蛋白質(zhì)，細(xì)胞體積顯著增大。這一期的主要意義在于為下階段S2.S即DNA合成期，在此DNA組蛋白。DNA復(fù)制所需要的酶都在這一時(shí)期合成。20.HIF-1a：幾乎參與了對(duì)糖酵解每一步的調(diào)控；PI3K/Akt途徑；Myc；P53等21.Cyclin：周期素/周期蛋白，是CDK（周期素依賴(lài)的蛋白激酶）的調(diào)節(jié)亞基，分別在細(xì)胞周期的不同時(shí)期積累，激活CDK，使其具有催化關(guān)鍵底物的磷酸化修飾并調(diào)節(jié)其活性。參與細(xì)胞周期中不同時(shí)相的調(diào)節(jié)。22.G/S檢驗(yàn)點(diǎn)startR點(diǎn)(restrictionpoint)，1控制細(xì)胞由靜止?fàn)顟B(tài)的G進(jìn)入DNA是否損傷？1細(xì)胞外環(huán)境是否適宜？細(xì)胞體積是否足夠大？23.cyclinbox：各類(lèi)周期蛋白均含有一段約100個(gè)氨基酸的保守序列，稱(chēng)為周期蛋白盒(cyclinbox)，是與CDK相互作用的活性區(qū)域。24.RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是將雙鏈RNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)引起特異基因的mRNA降解的一種細(xì)胞反應(yīng)過(guò)程。屬于轉(zhuǎn)錄后基因沉默的一種。25.試述CDK1活性的調(diào)控機(jī)制？CDK的催化活性受到激活因素與抑制因素兩方面的調(diào)節(jié)。激活因素中，目前認(rèn)為CDK與周期素的結(jié)合以及保守的蘇氨酸殘基的磷酸化是較為重要的兩種的N-端氨基酸殘基的抑制性磷酸化以及抑制蛋白的結(jié)合是主要的調(diào)節(jié)因素。磷酸化修飾的激活作用：CDK的激活還必須依賴(lài)于其保守的蘇氨酸殘基的磷酸化，如在人CDK1（p34cdc2）的Thr161和CDK2的Thr160的磷酸化，就與這兩個(gè)酶的激活相關(guān)。催化CDK1和CDK2磷酸化的酶是activitingCDK7-CyclinH復(fù)合物。當(dāng)磷酸酶-1將此位點(diǎn)的磷酸水解，P34cdc2又失去激酶活性。磷酸化修飾的抑制作用在人的CDK1和CDK2和Tyr15殘基的磷酸化可抑制CDKThr14和Tyr15磷酸化的是兩種不同的蛋白激酶，使Thr14磷酸化的為蛋白激酶Myt1，使Tyr15磷酸化的是蛋白激酶Wee1/Mik1。催化Thr14和Tyr15脫磷酸化的是蛋白磷酸酶CDC25。26.DNA損傷又稱(chēng)基因突變：是DNA復(fù)制過(guò)程中發(fā)生的DNA核苷酸序列的改變，從分子水平看是DNA分子堿基順序或數(shù)目的改變。突變的形式包括：替換、插入、缺失、重排。27.DNAAT-TA；缺失和插入引起的三聯(lián)體密碼的閱讀方式改變，造成蛋白質(zhì)氨基酸種類(lèi)、排列順序發(fā)生改變。(地中海貧血)（三）重排：指DNA分子內(nèi)發(fā)生較大片段的交換，也稱(chēng)重組。移位的DNA片突變的意義：產(chǎn)生新基因，出現(xiàn)新性狀，為生物進(jìn)化提供了最原始、最根本的的材料，是進(jìn)化的分子基礎(chǔ)28.DNA損傷的修復(fù)：指針對(duì)已發(fā)生的缺陷而進(jìn)行的補(bǔ)救機(jī)制。DNA1.光修復(fù)、2.鏈斷裂的直接重接、3.堿基的直接插入、4.轉(zhuǎn)甲基作用切除修復(fù)(excissionrepair)：在DNA內(nèi)切酶、外切酶、DNA聚合酶、DNA連接DNA板，合成一段正確配對(duì)的堿基序列來(lái)修補(bǔ)缺口。DNA損傷最普遍的修復(fù)形式。DNA。重組修復(fù)：當(dāng)DNA損傷較大、較嚴(yán)重，無(wú)法及時(shí)修復(fù)或缺乏切除修復(fù)酶系統(tǒng)，可跳躍損傷部位復(fù)制，子鏈形成缺口，復(fù)制結(jié)束后，在重組基因rec編碼的酶（Rec聚合酶、DNA連接酶等的作用下，將無(wú)損母鏈的DNA片段移到子鏈缺口，進(jìn)行重組修復(fù)。發(fā)生在復(fù)制后，故又稱(chēng)“復(fù)制后修復(fù)”DNA損傷重組修復(fù)的過(guò)程及特點(diǎn)：傷部位，子鏈對(duì)應(yīng)位點(diǎn)留下空缺；無(wú)損母鏈復(fù)制成完整雙鏈。蛋白)，RecA與空缺區(qū)結(jié)合，并催化子鏈空缺與無(wú)損母鏈相應(yīng)片段重組交換(RecBCD蛋白);有缺子鏈與無(wú)損母鏈重組，空缺轉(zhuǎn)移到無(wú)損母鏈，有缺子鏈完整，損傷母鏈仍然保留。DNA聚合酶和連接酶的催化下，重新修復(fù)缺口;DNA鏈的損傷并未除去，隨著復(fù)制的繼續(xù)，損傷ＤＮＡ鏈將在群體中逐步“稀釋”。修復(fù)發(fā)生在復(fù)制后，對(duì)象是子代DNA.SOS修復(fù)：DNA嚴(yán)重?fù)p傷難以復(fù)制或DNA復(fù)制系統(tǒng)受抑制的緊急情況下，為了保證DNA式。SOS反應(yīng)廣泛存在于原核生物和真核生物。細(xì)胞能存活，但變保留錯(cuò)誤較多，會(huì)引起廣泛、長(zhǎng)期的突變。自然界也因此而變得生物種類(lèi)繁多。29.受體：是細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)可以特異地識(shí)別與結(jié)合化學(xué)信號(hào)物質(zhì)（配體）并能激發(fā)靶細(xì)胞產(chǎn)生特異生物效應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)分子。G蛋白：廣義的G蛋白是指所有能與GTP或GDP結(jié)合的蛋白質(zhì)。細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中扮演重要角色的GG內(nèi)側(cè)，由三個(gè)亞基組成，一般稱(chēng)為經(jīng)典G蛋白或大G蛋白。G蛋白（存在于不同的細(xì)胞部位的小分子量G蛋白，也稱(chēng)為“小G蛋白”，是單亞基蛋白。Ras是第一個(gè)）被發(fā)現(xiàn)的小G蛋白。SH2結(jié)構(gòu)域：100βαSH2性。SH3結(jié)構(gòu)域：由55-75個(gè)氨基酸殘基組成,形成一個(gè)扭曲β桶狀結(jié)構(gòu)。SH3結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)構(gòu)成的模體序列相關(guān)。30.1.簡(jiǎn)述細(xì)胞膜受體的類(lèi)型及其特征：2.舉例說(shuō)明cAMP對(duì)肌細(xì)胞中糖原分解合成的調(diào)節(jié)作用腎上腺素分泌，與膜受體結(jié)合，通過(guò)G蛋白偶聯(lián)激活腺苷酸環(huán)化酶催化ATP生成cAMP↑，cAMP通過(guò)激活PKA（依賴(lài)cAMP的蛋白激酶）行使功能，PKA*3.試述RTK－Ras－MAPK信號(hào)傳遞途徑。該途徑的信號(hào)分子：生長(zhǎng)因子類(lèi)EGF、PDGF、IGF、FGF、VGEF等RTK：受體酪氨酸激酶（與配體結(jié)合及受體二聚化/寡聚化使酶激活）Ras蛋白：Ras蛋白是細(xì)胞內(nèi)的一種小分子單體GTPase和G蛋白三聚體一樣，非活化狀態(tài)時(shí)結(jié)合GDP，在外源信號(hào)的作用下釋放GDP，結(jié)合蛋白亦具有GTPase活性，將GTP水解成GDP，Ras蛋白本身又回到非活化狀態(tài)。但Ras蛋白水解GTP的速度比G至少慢100倍。sα傳遞途徑中具有作用。31.抑癌基因（tumorsuppressor是一類(lèi)在正常情況下對(duì)細(xì)胞增殖有負(fù)調(diào)控作用，而在兩個(gè)等位基因都缺失或失活時(shí)可促進(jìn)腫瘤形成的基因。常見(jiàn)的有p53、Rb、VHL、APC32.p53的功能抑制cyclinA抑制DNA聚合酶與DNA復(fù)制起始復(fù)合物的結(jié)合激活抑制細(xì)胞分裂的基因抑制癌基因?qū)?xì)胞的轉(zhuǎn)化。33.基因診斷:采用分子生物學(xué)的技術(shù)方法來(lái)分析受檢者的某一特定基因的結(jié)構(gòu)(DNA水平)或功能(RNA水平)是否異常，以此來(lái)對(duì)相應(yīng)的疾病進(jìn)行診斷。是病因的診斷。34.PCR擴(kuò)增、擴(kuò)增的DNA與比較。35.PCR-SSCP（診斷有無(wú)突變）：聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(singlestrandconformationpolymorphism)的簡(jiǎn)稱(chēng)，原理是將經(jīng)擴(kuò)增的DNA片段經(jīng)過(guò)變性處理形成單鏈，由于序列不同，單鏈構(gòu)象就有差異在中性聚丙烯酰胺凝膠中電泳的遷移率不同有無(wú)突變。廣泛應(yīng)用于檢測(cè)各種病原體基因的。并不能鑒別所有的突變。36.PCR-southernblot或Dotblot技術(shù)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或尼無(wú)特定的擴(kuò)增片段及相對(duì)含量，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于癌基因、遺傳特異基因、病原體特異基因等方面的研究及檢測(cè)。37.核酸分子雜交：按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，將不同來(lái)源的序列互補(bǔ)單鏈的DNA/DNA，RNA/RNA，互補(bǔ)配對(duì)成雙鏈雜交分子，這一過(guò)程叫核酸分子雜交。38.原位雜交：用核苷酸探針對(duì)特殊的核苷酸順序在其原位進(jìn)行(insituhybridization)雜交,叫原位雜交?？捎糜贒NA、RNA定位研究。39.DNA印跡技術(shù)(Southernblotting)：Southern印跡雜交常用于探測(cè)DNA的限制性?xún)?nèi)切酶圖譜。通過(guò)檢測(cè)某個(gè)體特定基因及旁側(cè)區(qū)域限制性?xún)?nèi)切酶圖譜的變化，可判斷是否發(fā)生了明顯的DNA突變。b)缺乏校正活性(3’-5’外切酶活性)，相對(duì)容易錯(cuò)誤摻入c)合成速度:1200bp/mind)在新鏈3’-端額外加上一個(gè)Ab）E.Coli細(xì)胞轉(zhuǎn)化:CaCl2法制備感受態(tài)細(xì)菌a)真核細(xì)胞轉(zhuǎn)化:b)micro-injection(微注射)(細(xì)胞核大)45.Expression表達(dá)的載體。46.Plasmid：質(zhì)粒，指一種小環(huán)狀DNA分子，存在與細(xì)胞染色體外，能夠自主復(fù)制產(chǎn)生特定的功能。47.生，長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸，沒(méi)有編碼蛋白的能力。相同。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)，提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA.反應(yīng)體系：SYBRPremixExTaKaRaExTaq,dNTPmixture,Mg2+,SYBRGreenI等。2.Selectionandconstructionofvectors（載體的選擇和構(gòu)建）3.LigationoftargetDNAandvector（載體與目的基因結(jié)合）提取質(zhì)粒，限制酶切割質(zhì)粒，用限制酶從其他組織切割目的基因暴露粘性末端。載體與目的基因結(jié)合得到重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒導(dǎo)入E.coli中4.Transformationoftargetgeneintoreceptorcell（目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞）Introduction:transformationcells)infection(E.coli)transfection(Tumor5.Screeningforrecombinantplasmids（重組質(zhì)粒的篩選）6.Expressingaclonedgene（克隆基因的表達(dá)）53.內(nèi)含子：真核生物細(xì)胞DNA中的間插序列。含調(diào)控序列，參與基因表達(dá)。54.外顯子：為蛋白質(zhì)氨基酸編碼的DNA序列。55.基因組：一個(gè)細(xì)胞或者生物體所攜帶的一套完整的單倍體序列，包括全套基因和間隔序列。56.真核細(xì)胞基因組的特征DNA貝、與染色質(zhì)的構(gòu)象著絲點(diǎn)的形成有關(guān)、參與表達(dá)調(diào)控，染色質(zhì)DNA的“區(qū)間57.微衛(wèi)星(microsatellite)：1bp~6bp，重復(fù)次數(shù)不超過(guò)60次，片段長(zhǎng)度小于35058.操縱子(operon)：由功能相關(guān)的一組結(jié)構(gòu)基因(st