關(guān)于實(shí)驗(yàn)一光學(xué)顯微鏡微量吸管及改良牛鮑計(jì)數(shù)板使用第1頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三

一、光學(xué)顯微鏡使用與維護(hù)第2頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三【目的】

掌握顯微鏡的操作規(guī)程；了解光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)及原理；了解顯微鏡的保養(yǎng)方法。第3頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（一）顯微鏡的結(jié)構(gòu)

光學(xué)顯微鏡（以下簡稱為顯微鏡），是用來觀察肉眼看不見的微小生物結(jié)構(gòu)的。雖然電子顯微鏡已經(jīng)問世，但是，在目前一般的科學(xué)研究和教學(xué)中，顯微鏡仍然是重要的、較為精密的生物觀察儀器。為了正確操作、妥善保管和維護(hù)顯微鏡，使之延長使用年限，作為生物學(xué)工作者，必須了解顯微鏡的結(jié)構(gòu)和功能。第4頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三機(jī)械部分

1．鏡筒是一個(gè)金屬長筒，筒口上端安裝目鏡鏡頭，下端裝有鏡頭轉(zhuǎn)換器和物鏡鏡頭。

2．鏡頭轉(zhuǎn)換器是安裝在鏡簡下端的一個(gè)旋轉(zhuǎn)圓盤。鏡頭轉(zhuǎn)換器上有3--5個(gè)孔，分別裝有低倍或高倍物鏡鏡頭。

3．粗準(zhǔn)焦螺旋位于鏡臂的下方，可以轉(zhuǎn)動(dòng)，以便使載物臺(tái)能上下移動(dòng)，從而調(diào)節(jié)焦距。

4．細(xì)準(zhǔn)焦螺旋位于粗準(zhǔn)焦螺旋外方，它的移動(dòng)范圍較粗準(zhǔn)焦螺旋小，可以細(xì)調(diào)焦距。

5．鏡座位于鏡臂下方，用以穩(wěn)固和支持鏡身。

第5頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三5．鏡座位于鏡臂下方，用以穩(wěn)固和支持鏡身。

6.鏡臂上接鏡筒，下連載物臺(tái)，呈弓曲形。為顯微鏡上的手握之處。

7．載物臺(tái)是放置玻片的平臺(tái)。其中央具有通光孔，載物臺(tái)上有金屬夾片夾，是用來卡住載玻片的夾子，轉(zhuǎn)動(dòng)左、右移動(dòng)尺螺旋還可使切片在載物臺(tái)上移動(dòng)。第6頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三

光學(xué)部分

1．目鏡是插在鏡筒頂部的鏡頭，是由一組透鏡組成的，它可以使物鏡成倍地分辨、放大物像，例如5×、10×、15×和20×。

2．物鏡安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器的孔上，也是由一組透鏡組成的，能夠把物體清晰地放大。物鏡上刻有放大倍數(shù)，例如（4、10、25、40、100×）等。顯微鏡的放大倍數(shù)是目鏡倍數(shù)乘以物鏡的倍數(shù)。

3．底光源位于底座上，開關(guān)位于底座側(cè)方。光線的強(qiáng)度可以調(diào)節(jié)。

第7頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三

4．在鏡柱前有一個(gè)聚光器調(diào)節(jié)螺旋，它可以使聚光器升降，用以調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱，下降時(shí)明亮度降低，上升時(shí)明亮度加強(qiáng)。

5．虹彩光圈又稱可變光闌，由多數(shù)金屬片組成，在較高級(jí)顯微鏡上具有此裝置。使用時(shí)移動(dòng)其把柄，可控制聚光器透鏡的通光范圍，用以調(diào)節(jié)光的強(qiáng)度。虹彩光圈下常附有金屬圈，其上裝有濾

光片，可調(diào)節(jié)光源的色調(diào)。

第8頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三第9頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三一、使用方法

1．觀察前的準(zhǔn)備（1）置顯微鏡于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊沿約為一寸左右。鏡檢者姿勢要端正，一般用左眼觀察，右眼便于繪圖或記錄，兩眼必須同時(shí)睜開，以減少疲勞，亦可練習(xí)左右眼均能觀察。（2）顯微鏡是光學(xué)精密儀器，在使用時(shí)要特別小心，使用前要熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)和性能，檢查各總零件是否完好無損。鏡身有無灰塵，鏡頭是否清潔，做好必要的清潔和調(diào)整工作。（3）調(diào)節(jié)光源對(duì)光時(shí)應(yīng)避免直射光源，因直射光源影響物像的清晰，損壞光源裝置和鏡頭，并刺激眼睛。晴天可直接用窗外的散射光，如明暗天氣，可用8－30W日光燈或顯微鏡燈照明第10頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三調(diào)節(jié)光源及光照的一般步驟：將低倍物鏡旋至鏡筒下方，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)輪，使鏡頭和載物臺(tái)距離約為0.5cm左右。上升聚光器，使與載物臺(tái)表面同樣高。否則使用油鏡時(shí)光線較暗。左眼看目鏡，調(diào)節(jié)反光鏡鏡面角度（反光鏡有凹平兩面，光線較強(qiáng)自然光源，宜用平面鏡；光線較弱的天然光源或人工光源，宜用凹面鏡。）對(duì)光使全視野內(nèi)為均勻的明亮度。凡檢查染色標(biāo)本時(shí)，光線應(yīng)強(qiáng)；檢查未染色標(biāo)本時(shí)，光線不宜太強(qiáng)。可通過擴(kuò)大或縮小光圈、升降聚光器、旋轉(zhuǎn)反光鏡調(diào)節(jié)光線．第11頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三2．低倍鏡觀察。

檢查的標(biāo)本須先用低信鏡觀察，因?yàn)榈捅剁R視野較大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定檢查的位置。（1）先將標(biāo)本玻片置于載物臺(tái)上，并將標(biāo)本部位處于物鏡的正下方，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)輪，下降物鏡或上升載物臺(tái)使物鏡至標(biāo)本0.5cm處。（2）左眼看目鏡，同時(shí)反時(shí)針方向慢慢旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)輪，當(dāng)在視野內(nèi)出現(xiàn)物象后，改用細(xì)調(diào)節(jié)輪，上下微微轉(zhuǎn)動(dòng)，直至視野內(nèi)獲得清晰的物象。然后認(rèn)真觀察標(biāo)本各部位，確定并將需進(jìn)一步要觀察的部位移視野中央，準(zhǔn)備用高倍鏡觀察。第12頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三3．高倍鏡觀察；

將高倍鏡轉(zhuǎn)正至正下方，在轉(zhuǎn)換接物鏡時(shí)，需用眼睛在側(cè)面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。然后由接目鏡觀察，再仔細(xì)調(diào)節(jié)光圈和聚光鏡，使光線的明亮度適宜，同時(shí)再仔細(xì)正反兩方向微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)輪，直至獲得清晰的物象后為止，找到最適宜于觀察的部位。需進(jìn)一步要觀察的部位移視野中央，準(zhǔn)備用油鏡觀察。第13頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三4．油鏡觀察：（1）上升聚光器，全開虹彩光圈（2）用粗調(diào)節(jié)輪提起鏡筒或下降載物臺(tái)，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒正下方。在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。右手順時(shí)針方向慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)輪使鏡筒下降或載物臺(tái)上升，與此同時(shí)，從顯微鏡的側(cè)面觀察使油鏡浸入油中，直到幾乎與標(biāo)本接觸時(shí)為止。注意不要壓到標(biāo)本，以免壓碎玻片，甚至損壞油鏡頭。（3）從接目鏡內(nèi)觀察，進(jìn)一步調(diào)節(jié)光線，使光線明亮，再用粗調(diào)節(jié)輪將鏡筒徐徐上升或?qū)⑤d物臺(tái)徐徐下降，直到視野內(nèi)出現(xiàn)物像為止，然后用細(xì)調(diào)節(jié)輪校正焦距。如油鏡已離開油面而仍未見物象，必須再從側(cè)面觀察，將油鏡降下，重復(fù)操作至物象看清為止。第14頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三５．換片

觀察完一個(gè)標(biāo)本后，如果想要再觀察另一標(biāo)本時(shí)，需先將高倍物鏡（或油竟鏡）轉(zhuǎn)回到低倍物鏡，取出標(biāo)本，按放片的方法換上新片，即可觀察。千萬不可在高倍物鏡（或油竟鏡）下?lián)Q片，以防損壞鏡頭。第15頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三

二、顯微鏡的保養(yǎng)第16頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（1）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再取一張擦鏡紙，滴上少量的二甲苯擦拭，然后再取另一張新擦鏡紙將鏡頭上殘留的二甲苯擦凈。否則粘固透鏡的膠質(zhì)會(huì)被二甲苯溶解，日久鏡片易移位脫落。（2）下降聚光器，打開虹彩光圈，使反光鏡垂直于鏡座，以免積聚灰塵。（3）用綢布將鏡身擦拭干凈（切不可用手擦拭），除去灰塵、油污、水汽，以免生銹長霉。第17頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（4）使顯微鏡的各部件恢復(fù)回原位，下降鏡筒，使物鏡呈“八”字形置于載物臺(tái)上，然后將顯微鏡送回鏡箱中。（5）顯微鏡應(yīng)存放在干燥陰涼的地方，不要放在強(qiáng)烈的日光下暴曬，霉雨季節(jié)應(yīng)在顯微鏡箱內(nèi)放置干燥劑（硅膠），如長時(shí)間不用，則光學(xué)部分應(yīng)卸下放在干燥器中，以免受潮生霉。（6）顯微鏡應(yīng)嚴(yán)禁與揮發(fā)性藥品或腐蝕性藥品放在一起，如碘片、鹽酸、硫酸等藥品。第18頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三

三、注意事項(xiàng)第19頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三

1．拿取顯微鏡必須一只手拿著鏡臂，一只手托著鏡座，并保持鏡身的上下垂直，應(yīng)避免震動(dòng)，輕放臺(tái)上。切不可一只手提起，以防顯微鏡、反光鏡功目鏡墜落。2．使用前應(yīng)將鏡身擦拭一遍、用擦鏡紙將鏡頭擦凈（切不可用手指擦抹）。若遇到鏡臺(tái)或鏡頭上有干香柏油，可用擦鏡紙沾取少量二甲苯將其擦去。3．使用時(shí)如發(fā)現(xiàn)顯微鏡操作不靈活或有損壞，不要擅自拆卸修理，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師處理。第20頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三4．注意保護(hù)鏡頭，切不可壓碎標(biāo)本被片，損壞鏡頭

5．顯微鏡使用完畢，應(yīng)登記顯微鏡使用卡經(jīng)指導(dǎo)教師檢查后放回鏡箱。第21頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三

二、微量吸管使用第22頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（一）目的、原理、實(shí)驗(yàn)用品、標(biāo)本1、目的：掌握微量吸管的實(shí)驗(yàn)方法。2、原理：擠壓乳膠頭使微量吸管產(chǎn)生負(fù)壓而吸取液體。3、實(shí)驗(yàn)用品：一次性微量吸管、帶孔乳膠吸頭、試管、2ml吸管、NS等。4、標(biāo)本：新鮮抗凝血第23頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（二）操作方法1、準(zhǔn)備吸管將帶孔的乳膠吸頭套在微量吸管上，連接處應(yīng)嚴(yán)密不漏氣。2、加稀釋液取試管1支，加生理鹽水2ml.3、持管吸血右手拇指和中指夾住吸管及吸頭交接處，示指蓋住吸頭小孔，三個(gè)指頭輕微用力，排出適量的氣體使管內(nèi)形成較小的負(fù)壓，將管尖插入抗凝血，三個(gè)指頭慢慢松勁，吸取抗凝血到所需刻度后，抬起示指，注意管尖始終不要離開液面，以免吸入氣泡，也不要過度用力將血液吸入乳膠吸頭。第24頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三4、拭凈余血用干棉球順微量吸管口拭凈余血。

5、稀釋血液將微量吸管插入含生理鹽水的試管底部，慢慢排出吸管內(nèi)的血液，再用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次。

6、洗滌吸管依次用蒸餾水洗凈，95%乙醇脫水。乙醚干燥。如為一次性微量吸管，可省略該步驟。第25頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（三）注意事項(xiàng)1、操作步驟3需反復(fù)練習(xí)才能準(zhǔn)確吸取血液到所需量。2、一次吸取血液到所需的量，吸管內(nèi)不能有空節(jié)也不能吸取血液過多，最好不要超過所需刻度的±2mm.3、稀釋血液前一定要拭凈管外余血，釋放血液時(shí)的動(dòng)作不能太劇烈，避免破壞血液成分或不能利用上清液將管內(nèi)血液洗凈。第26頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（四）實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)

微量吸管使用是手工法血細(xì)胞分析的第一步，有很多因素影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精確度，如一次性吸管的質(zhì)量、操作者的技術(shù)熟練程度和責(zé)任心等。第27頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三三、改良牛鮑計(jì)數(shù)板的使用（一）目的：掌握改良牛鮑計(jì)數(shù)板結(jié)構(gòu)及使用方法。（二）原理：一定倍數(shù)稀釋的血液或體液混勻后滴入具有固定體積和精密劃分刻度的改良牛鮑計(jì)數(shù)板中，在顯微鏡下對(duì)所選擇的區(qū)域中的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，在乘以稀釋倍數(shù)，即可換算成單位體積內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。第28頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三（三）、實(shí)驗(yàn)用品1、器材改良牛鮑計(jì)數(shù)板、專用蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、綢布、微量吸管、帶孔乳膠吸頭、刻度吸管、試管。2、試劑紅細(xì)胞稀釋液（四）標(biāo)本：抗凝血第29頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三五、操作1、稀釋血液取試管1支，加紅細(xì)胞稀釋液2ml,加抗凝血10微升，立即混勻，制成紅細(xì)胞懸液。2、準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板用綢布拭凈改良牛鮑計(jì)數(shù)板和專業(yè)蓋玻片，采用推式法從計(jì)數(shù)板下緣向前平推蓋玻片，將其蓋在計(jì)數(shù)池上。3、沖池用完了吸管吸取制備好的再次混勻的紅細(xì)胞懸液，沿蓋玻片與計(jì)數(shù)板之間的縫隙沖入計(jì)數(shù)池。充液量以恰好充滿一側(cè)計(jì)數(shù)池為宜，不可過多、過少或有氣泡，否則需重新操作。第30頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三4、靜置紅細(xì)胞懸液注入計(jì)數(shù)池后，靜置2-3分鐘待細(xì)胞下沉。

5、顯微鏡計(jì)數(shù)首先在低倍鏡下觀察整個(gè)計(jì)數(shù)池的結(jié)構(gòu)，同時(shí)觀察細(xì)胞分布是否均勻，如嚴(yán)重不均應(yīng)重新沖池。根據(jù)計(jì)數(shù)不同的血細(xì)胞選用不同的放大倍數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)遵循一定的路徑進(jìn)行，以免重復(fù)或遺漏。對(duì)壓線細(xì)胞，依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。第31頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三附：牛鮑計(jì)數(shù)板基本結(jié)構(gòu)

血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有四個(gè)槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各刻有一小方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大方格，中央的一大方格作為計(jì)數(shù)用，稱為計(jì)數(shù)區(qū)。計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為16個(gè)中方格（大方格用三線隔開），而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成25個(gè)中方格（中方格之間用雙線分開），而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由400個(gè)小方格組成。計(jì)數(shù)區(qū)邊長為1mm，則計(jì)數(shù)區(qū)的面積為lmm2，每個(gè)小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)區(qū)的高度為0.1mm，所以每個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3，每個(gè)小方格的體積為1/4000mm3。第32頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三1855年發(fā)明計(jì)數(shù)紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法是最可靠和最經(jīng)典計(jì)數(shù)技術(shù)改良Neubauer計(jì)數(shù)板第33頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三第34頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三計(jì)數(shù)池

第35頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三第36頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三Neubauer計(jì)數(shù)盤第37頁，共40頁，2023年，2月20日，星期三