關(guān)于羊肚菌的篩選鑒定及菌種改良第1頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五什么是羊肚菌？Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.Clickheretoaddyourtext.羊肚菌(Morchella)，又名草笠竹，為羊肚菌屬真菌統(tǒng)稱,是一種珍貴的食用菌和藥用菌。羊肚菌于1818年被發(fā)現(xiàn)。主要包括黑色羊肚菌和黃色羊肚菌兩類。國內(nèi)外一直視其為高檔宴席上的佳肴,同時羊肚菌子實(shí)體還可入藥,具有益腸胃、消化助食、化痰理氣、補(bǔ)腎、提神之功能。第2頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的形態(tài)、種類與分布羊肚菌的形態(tài)羊肚菌菌蓋呈不規(guī)則圓形或長圓形,菌蓋長8.2～10.5cm，直徑2.0~2.8cm;菌蓋與菌柄離生，菌蓋中空，菌柄柱狀，菌柄稍膨大，中空，白色，菌柄長度3.7~4.0cm，直徑1.0~1.3cm。子囊棒狀，無色，每個子囊內(nèi)有8個子囊孢子，縱向或重疊排列，大小為162~200μm×16.2~20.0μm;側(cè)絲棒狀，頂端膨大，大小為80.01

~112.5μm×7.5~10.0μm;子囊孢子橢圓形，無色，大小為10~16μm×7.5~12.5μm第3頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的形態(tài)、種類與分布羊肚菌的種類與分布第4頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的篩選1標(biāo)本采集2標(biāo)本材料的預(yù)處理3富集培養(yǎng)5高產(chǎn)菌株的篩選4純種分離第5頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的篩選標(biāo)本采集

在雨后取新長出的羊肚菌盛入清潔的牛皮紙袋或

塑料袋中，扎好，標(biāo)記，記錄采樣時間、地點(diǎn)、

環(huán)境條件等，以備查考。標(biāo)本預(yù)處理將羊肚菌菌冠粉碎第6頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的篩選富集培養(yǎng)將雨后羊肚菌旁的表土至于富集培養(yǎng)基中富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)基土豆200g葡萄糖2.0%蛋白胨0.2%KH2PO40.15%

MgSO40.05%瓊脂1.5%純種分離采用劃線分離法、稀釋分離法等純化方法獲取單菌落。第7頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的篩選高產(chǎn)菌株的篩選這一步是采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶的容量進(jìn)行小型發(fā)酵試驗(yàn)，獲得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種。還要對菌種進(jìn)行發(fā)酵性能測定。第8頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的鑒定羊肚菌菌種的鑒定方法主要有兩種,一種是依據(jù)生理生化特征,或者對菌種進(jìn)行栽培試驗(yàn),等待生長出子實(shí)體后,對子實(shí)體的形態(tài)特征來進(jìn)行鑒定,從而得出菌種的分類,這是經(jīng)典的分類和鑒定方法。另一種是近些年來隨著生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展而出現(xiàn)的分子鑒定方法,這種方法可以對各個發(fā)育時期的個體、各個組織器官甚至細(xì)胞作檢測,而不是單純的根據(jù)食用菌的外表形態(tài)特征來進(jìn)行分類鑒定,因而可以直接對菌種做出鑒定第9頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的鑒定經(jīng)典鑒定方法肚菌菌絲分為基內(nèi)菌絲和表面菌絲。表面菌絲有明顯主干，生長初期為白色或淡黃色，有光澤，輻射生長，隨后菌絲出現(xiàn)兩類分枝，一類形成次級主干，形態(tài)與一級主干類似；一類分枝較短，并有部分菌絲伸入培養(yǎng)基內(nèi)形成基內(nèi)菌絲。后期，菌絲顏色逐漸加深，呈淺褐色或褐色。光學(xué)顯微鏡下，幼齡菌絲細(xì)而長，有隔，呈竹節(jié)狀，分枝少。成熟菌絲粗，棕色，壁厚呈黑棕色，節(jié)間距較短，分枝較多，頂端膨大呈棒狀，大多分枝呈銳角，少數(shù)呈直角。基內(nèi)菌絲無主干，分枝多，間隔短，菌絲粗大。第10頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的鑒定分子標(biāo)記鑒定方法基因組DNA提取方法以鮮子實(shí)體為材料，利用Biospin真菌基因組DNA提取試劑盒提取DNA。ITS序列分析采用真菌通用引物ITS4和ITS5。測序?qū)TS-PCＲ產(chǎn)物進(jìn)行純化，純化后的PCＲ擴(kuò)增產(chǎn)物和引物直接測序.第11頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的菌種改良菌種活化

斜面種子培養(yǎng)基斜面采用PDA培養(yǎng)基,在無菌室中

斜面接種，25℃培養(yǎng)。PDA培養(yǎng)基土豆200g葡萄糖20g

瓊脂15～20g

水1000mLpH值自然第12頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的菌種改良固體培養(yǎng)基的篩選培養(yǎng)基:①半合成培養(yǎng)基:PDA綜合培養(yǎng)基

②天然培養(yǎng)基采用玉米粉瓊脂培養(yǎng)基;黃

豆粉瓊脂培養(yǎng)基;山芋粉瓊脂培養(yǎng)基。各培養(yǎng)基115℃滅菌20分鐘。接種后,恒溫25,觀察菌絲生長速度,采用菌絲長滿試管的天數(shù);菌核生長采用定性方法。第13頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的菌種改良種瓶制備將斜面菌種切成黃豆粒大小的小塊接種2~3塊到液體種子培養(yǎng)基中,300ml三角瓶裝液量120ml,置于旋轉(zhuǎn)式搖床上,轉(zhuǎn)速150rpm,25℃培養(yǎng)3~4天。羊肚菌液體種子培養(yǎng)基

土豆10%

蔗糖3%

蛋白陳0.1%

酵母膏0.5%

KH2PO40.05%

MgSO40.05%第14頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的益處1.增強(qiáng)免疫作用：含有羊肚菌多糖，可促進(jìn)淋巴細(xì)胞增值2.預(yù)防心腦血管疾病：含有多糖，降低膽固醇濃度，穩(wěn)定血壓，預(yù)防動脈粥樣硬化。3.預(yù)防胃腸道疾?。汉锌股睾椭舅犷愇镔|(zhì)，保護(hù)腸胃、消化助食。4.抗疲勞作用第15頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五羊肚菌的益處5.抗癌作用：羊肚菌多糖，并且羊肚菌含豐富的硒是人體紅細(xì)胞谷胱甘肽過氧化酶的組成成分，可運(yùn)輸大量氧分子來抑制惡性腫瘤，使癌細(xì)胞失活；另方面能加強(qiáng)維生素E的抗氧化作用。6.羊肚菌含抑制腫瘤的多糖，抗菌、抗病毒的活