利用各組分在固定相和流動第一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日色譜法利用各組分在固定相和流動相之間分配系數(shù)的差異得到分離，再逐個進行分析是分離、分析同時進行的一類分析方法第二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日高效液相色譜法（HPLC）氣相色譜法（GC）

薄層色譜法（TLC）

常用的色譜法第三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日1.分配系數(shù)（K）

各組分在固定相和流動相之間達到平衡時的濃度之比第四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.容量因子（k）（質(zhì)量分配系數(shù)）

各組分在固定相和流動相之間達到平衡時的質(zhì)量之比k第五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日kA≠kB是分離的先決條件容量因子（k）（質(zhì)量分配系數(shù)）

不僅與被測組分、固定相、流動相及溫度有關，還與兩相體積有關。容量因子比分配系數(shù)更易測定。第六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日3.色譜過程方程

保留時間與分配系數(shù)的關系第七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日第一節(jié)薄層色譜法薄層色譜法（TLC法）將固定相涂布在玻璃、塑料或金屬板上形成薄層，在此薄層上進行色譜分離的方法簡便、快速、靈敏、高選擇性、顯色方便第八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日1.吸附薄層色譜的分離原理點在薄層板上的樣品不斷地被吸附劑吸附和被展開劑溶解而解吸，并隨展開劑向前移動，從而產(chǎn)生差速遷移得到分離一、基本原理第九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.比移值Rf

最佳范圍0.3～0.5可用范圍0.2～0.8第十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日×Oll0第十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日3.分離度（分辨率）（R）薄層板上兩相鄰斑點中心距離與兩斑點平均寬度的比值色譜圖上兩色譜峰頂尖距離與兩色譜峰的峰寬和之比第十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日二、操作方法1.吸附劑活化105~110℃加熱30′硅膠活性強弱與含水量有關，水分越高活性越低，吸附力越小硅膠H、硅膠HF254硅膠G、硅膠GF254（一）吸附劑和展開劑的選擇（1）硅膠第十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.氧化鋁

酸性、中性和堿性活性與含水量有關3.聚酰胺

表面有酰胺基，可與酚、羧酸、氨基酸等形成氫鍵第十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.展開劑極性較強組分活性低的薄層板極性較強的展開劑極性較弱組分活性高的薄層板極性較弱的展開劑第十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（二）薄層板的制備（三）點樣與展開（四）斑點的定位普通板日光下（直接或顯色）紫外燈下（熒光）熒光板熒光淬滅第十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日三、應用（一）鑒別對照品法比較供試品與對照品的Rf值及顏色是否一致

第十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（二）檢查供試品→供試品溶液

雜質(zhì)對照品→對照品溶液

1.雜質(zhì)對照品法第十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日供試品對照品第十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日優(yōu)點：同一物質(zhì)，同一Rf值比較，準確度高、直觀性強缺點：需要雜質(zhì)對照品

第二十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2、高低濃度對比法

以供試品溶液的稀溶液作為對照液A、供試品所顯雜質(zhì)斑點與對照液主斑點比較，不得更深B、規(guī)定供試品雜質(zhì)斑點的個數(shù)第二十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日供試品對照品第二十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日缺點：不同物質(zhì)，不同Rf值的比較，準確度差、直觀性差優(yōu)點：以供試品的稀溶液作為對照液，不需要雜質(zhì)對照品，簡單、價廉，還可配成幾種限量的對照溶液第二十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日01：79.以硅膠為固定相的薄層色譜按作用機制屬于A.吸附色譜B.離子交換色譜C.膠束色譜D.分子排阻色譜E.親合色譜第二十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例1、TLC法中，各分離組分的Rf值最佳范圍是A、0.2～0.8B、0.3～0.5C、0.3～0.8D、0.5～0.8E、0.2～0.3第二十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日第二節(jié)氣相色譜法和高效液相色譜法

一、氣相色譜法（GC法）以氣體為流動相的色譜法第二十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（一）基本原理各組分在固定相與載氣之間由于分配系數(shù)不同而按不同順序被帶出，分配系數(shù)小的組分先流出，分配系數(shù)大的后流出第二十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日優(yōu)點靈敏度高、樣品用量少分離效能高，分離速度快缺點受樣品蒸氣壓的限制不適于難氣化和熱穩(wěn)定性差的藥物第二十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日1.基本概念第二十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日峰高峰面積峰位（保留值）用于定性峰寬用于衡量柱效用于定量第三十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日保留值可用時間或體積表示（1）保留時間（tR）（2）死時間（t0）（3）調(diào)整保留時間（t′R）（4）相對保留值（r）t′R1/t′R2第三十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日色譜區(qū)域?qū)挾龋?）標準差（σ）0.607h的W/2（2）半峰寬（Wh/2）（3）峰寬（W）第三十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.塔板理論基本假設色譜柱中有無數(shù)塔板，樣品在每個塔板內(nèi)的氣、液兩相進行分配第三十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日理論塔板數(shù)塔板數(shù)越多，塔板高度越小，柱效越高第三十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日3.速率理論VanDeemter方程塔板高度渦流擴散縱向擴散載氣速度傳質(zhì)阻抗第三十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（二）氣相色譜法分類填充柱色譜法（粗）毛細管柱色譜法（細）分離機制吸附色譜分配色譜氣–固色譜法（吸附柱）氣–液色譜法（分配柱）第三十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（三）常用固定液與載體1.固定液鯊魚烷、SE-30、OV-17、聚乙二醇第三十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.載體硅藻土型載體（紅色、白色）

3.毛細管色譜柱開管型毛細管柱（WCOT、SCOT）填充型毛細管柱√第三十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（四）氣相色譜儀氣源進樣及氣化系統(tǒng)色譜柱和柱溫箱檢測器熱導檢測器氫火焰離子化檢測器電子捕獲檢測器第三十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日ChP（2000）對氣相色譜儀的一般要求

色譜柱填充柱或毛細管柱（空心柱)固定液高沸點液體載氣氮氣檢測器氫火焰離子化檢測器（FID）

檢測溫度高于柱溫一般250~350℃第四十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日96：128、在氣相色譜法中，與含量成正比的是色譜峰的A、保留體積B、保留時間C、相對保留值D、峰高E、峰面積第四十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日00：75.在色譜分離中，組分達到平衡時，在固定相中的質(zhì)量為Ws，濃度為Cs，在流動相中的質(zhì)量為Wm，濃度為Cm，則此組分的容量因子為A、Cs/CmB、Cm/WsC、Ws/WmD、Wm/WsE、Ws·Cs/Wm·Cm第四十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例1、氣相色譜法可測定的藥物為A、沸點低于450℃B、沸點低于550℃C、沸點在450℃以上D、無機藥物E、熱不穩(wěn)定藥物第四十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例2、氣相色譜儀組成部分應有A、氣路系統(tǒng)B、進樣系統(tǒng)C、分離系統(tǒng)D、檢測系統(tǒng)E、記錄系統(tǒng)第四十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日二、高效液相色譜法（HPLC法）以液體為流動相的色譜法（一）HPLC的速率理論第四十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日與氣相色譜法的差別

GC法高溫（ChP50~265℃）

縱向擴散項大（B/u）HPLC法室溫傳質(zhì)阻抗項大（Cu）第四十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日1.液-固吸附色譜法

固定相常用硅膠

流動相烷烴+極性調(diào)整劑（二）各類HPLC法第四十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.液-液分配色譜法

固定相目前大多是用化學方法將固定液鍵合在載體（硅膠）上所形成，即化學鍵合相第四十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（1）正相色譜法流動相極性＜固定相極性

分析親脂性的極性及中等極性的分子型藥物

極性弱的組分先流出色譜柱第四十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（2）反相色譜法（RP-HPLC）流動相極性＞固定相極性

分析非極性、中等極性藥物極性強的組分先流出色譜柱

固定相ODS（C18）辛烷基（C8）

流動相甲醇-水，乙腈-水第五十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（3）反相離子對色譜法（PIC）如樣品在極性流動相中可解離為離子，若將離子對試劑加入流動相，與被分析離子生成中性離子，即可增大樣品在非極性固定相中的溶解度第五十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（4）離子抑制色譜法（ISC）測定弱酸、弱堿類藥物時，通過調(diào)整流動相pH值，抑制樣品的解離，以增大樣品在非極性固定相中的溶解度

適用于弱酸（3.0≤pKa≤7.0）弱堿（7.0≤pKb≤8.0）

第五十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（三）常用固定相1.硅膠用于吸附色譜2.化學鍵合相非極性ODS（十八烷基鍵合相）極性氨基、氰基鍵合相3.鍵合型離子交換劑第五十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（四）高效液相色譜儀高壓輸液泵

色譜柱柱管+固定相進樣閥六通閥（有定量環(huán)）檢測器紫外吸收檢測器熒光檢測器

差示折光檢測器電化學檢測器第五十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日中國藥典規(guī)定正文各品種項下的HPLC條件不得任意改變固定相種類、流動相組分、檢測器類型可適當改變色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速和比例、柱溫、進樣量、靈敏度第五十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日三、系統(tǒng)適用性試驗

ChP每次檢測前，應對儀器進適用性試驗，應達到規(guī)定要求

理論板數(shù)（n）分離度（R）重復性（RSD）拖尾因子（T）第五十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（一）理論板數(shù)（n）如測得n低于規(guī)定，應改變柱長或載體性能、重填色譜柱等以求達到第五十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（二）分離度（R）除另有規(guī)定外，R≥1.5第五十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日第五十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（三）重復性（RSD）1×53×3RSD≤2.0%第六十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（四）拖尾因子（T）除另有規(guī)定外，T應0.95~1.05第六十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日四、GC和HPLC在藥品檢驗中的應用1.鑒別在相同的色譜條件下，分別取供試品溶液和對照品溶液進樣，記錄色譜圖，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液一致第六十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日2.雜質(zhì)檢查

內(nèi)標法（加校正因子）外標法主成分自身對照法（加校正因子）主成分自身對照法（無校正因子）面積歸一化法第六十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（1）內(nèi)標法+校正因子內(nèi)標+雜質(zhì)對照品→計算校正因子

內(nèi)標+樣品→計算雜質(zhì)含量

優(yōu)點準確第六十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日內(nèi)標物+雜質(zhì)對照品→校正因子內(nèi)標物+樣品→雜質(zhì)含量第六十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（2）外標法供試品→供試品溶液

雜質(zhì)對照品→對照品溶液缺點不易控制進樣量宜用定量環(huán)第六十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日第六十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（3）加校正因子的主成分自身對照法待測成份對照品+雜質(zhì)對照品→計算校正因子

供試品→供試品溶液

供試品的稀釋液→對照品溶液第六十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計算各雜質(zhì)含量優(yōu)點準確度高第六十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（4）不加校正因子主成分自身對照法供試品→供試品溶液

供試品的稀釋液→對照品溶液測定供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積，與對照溶液主成分峰面積比較，控制雜質(zhì)的量第七十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日缺點檢測波長處，各雜質(zhì)和藥物的吸收強度可能有差異，準確度差

優(yōu)點不需雜質(zhì)對照品，可同時控制各個雜質(zhì)及其總量限度

第七十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日（5）面積歸一化法

取一定量供試品溶液進樣，測定各雜質(zhì)的峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算各雜質(zhì)峰面積占總峰面積的百分率，應符合規(guī)定。第七十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日第七十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日優(yōu)點不需雜質(zhì)對照品，簡便易行缺點檢測波長處，各雜質(zhì)和藥物的吸收強度可能有差異，控制雜質(zhì)峰面積百分率不一定就是雜質(zhì)限量，準確度差

第七十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日3.在含量測定中的應用（1）外標法（2）內(nèi)標法第七十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日96：75、測得兩色譜峰的保留時間tR1=6.5min，tR2=8.3min，峰寬W1=1.0min，W2=1.4min，則兩峰分離度R為A、0.22B、1.2C、2.5D、0.75E、1.5第七十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日99：135、HPLC法與GC法用于藥物復方制劑的分析時，其系統(tǒng)適用性試驗系指A、測定拖尾因子B、測定回收率C、測定保留體積D、測定分離度E、測定柱的理論板數(shù)第七十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日99m:[91-95]相關方法為A、紫外分光光度法B、紅外分光光度法C、氣相色譜法D、高效液相色譜法E、熒光分光光度法91、由第一電子激發(fā)態(tài)的最低能級躍遷回基態(tài)的各個不同振動能級92、低能級的價電子吸收一定的能量后，躍遷到較高能級93、使用氫火焰離子化檢測器94、分子中振動和轉(zhuǎn)動能級的躍遷95、可以忽略流動相中的縱向擴散項EACBD第七十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日00：132、中國藥典（2000年版）規(guī)定系統(tǒng)適用性試驗應包括A、色譜柱的理論塔板數(shù)B、分離度C、重復性D、中間精密度E、拖尾因子第七十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日00：133.中國藥典（2000年版）正文各品種項下規(guī)定的HPLC條件中，不得任意改變的是

A.固定相種類B.固定相牌號C.流動相組成D.混合流動相各組分的比例E.檢測器類型第八十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日01：80.用HPLC測得兩組分的保留時間分別為8.0和10.0min，峰寬分別為2.8和3.2mm，記錄紙速為5.0mm/min，則兩峰的分離度為

A.3.4B.3.3C.4.0D.0.7E.6.8第八十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日01：[121-125]以下情況所適用的方法A.高效液相色譜法B.氣相色譜法C.兩者均可D.兩者均不可121.可用于測定藥物的含量122.以氣體為流動相123.以液體為流動相124.使用氫火焰離子化檢測器125.不適用于熱不穩(wěn)定化合物的分析CBABB第八十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日01：140.色譜系統(tǒng)適用性試驗的項目有A、拖尾因子B、理論板數(shù)C、檢測限D(zhuǎn)、定量限E、分離度第八十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例1、色譜法定量測定的方法有A、面積歸一化法B、主成分自身對照法C、內(nèi)標法D、外標法E、反相法第八十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例2、色譜系統(tǒng)適用性試驗一般包括A、測試色譜柱理論塔板數(shù)（n）B、測量峰高C、測試分離度（R）D、測試拖尾因子（T）E、測定保留體積第八十五頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例3、色譜系統(tǒng)適用性試驗要求分離度A、應大于1.5B、應小于1.5C、應大于2.5D、應小于2.5E、應大于3.0第八十六頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例4、中國藥典（2000年版）規(guī)定，除另有規(guī)定外，色譜系統(tǒng)適用性試驗中的拖尾因子（T）應在A、0.50～6.5B、6.5～7.5C、7.50～8.50D、8.50～9.50E、0.95～1.05第八十七頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例5、色譜法鑒別被分離物各組分時，應該用A、峰高B、峰寬C、保留值D、分配系數(shù)E、塔板數(shù)第八十八頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例6、衡量色譜系統(tǒng)好壞的參數(shù)是A、分散度B、Rf值C、分離度D、保留時間E、斑點面積第八十九頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例7、衡量色譜峰是否正常的參數(shù)應是A、校正因子B、峰寬C、峰高D、拖尾因子E、拖尾峰第九十頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例8、RP-HPLC固定相與流動相極性關系是A、兩者極性相同B、前者極性大于后者C、后者極性大于前者D、兩者是同一液體E、兩者均為惰性第九十一頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例9、色譜峰高（或面積）可用于A、鑒別B、計算保留值C、含量測定D、測試被分離物的療效E、判定被分離物組成第九十二頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例10.HPLC檢查藥物中雜質(zhì)的方法有A．面積歸一化法B．加校正因子的主成分自身對照法C．不加校正因子的主成分自身對照法D．外標法E．內(nèi)標法加校正因子測定法第九十三頁，共一百零四頁，2022年，8月28日例11~15A、VisB、IRC、UVD、pHE、HPLC

14、紅外分光光度法15、可見分光光度法13、高效液相色譜法14、紫外分光光度法15、溶液酸堿度表示法BAECD第九十四頁，共一百零四頁，2022年，8月28日第三節(jié)