v1.0可編寫可改正無菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)/NO：草擬人：審查人：同意人：頒發(fā)部門Issuedby替代文件

StandardOperatingProcedureofSterile版本號(hào)/Version：Examination頁(yè)碼/Page草擬日期：審查日期：同意日期：履行日期EffectedDate復(fù)審日期ReplacedforReviewDate散發(fā)部門Distributedto武漢仝干生物科技有限企業(yè)1v1.0可編寫可改正WuhanTogoBiotechnologyCo.,Ltd無菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)/NO：StandardOperatingProcedureof版本號(hào)/Version：SterileExamination頁(yè)碼/Page：1、目的成立無菌檢測(cè)的基本操作，為無菌檢測(cè)人員供給正確的操作規(guī)程。經(jīng)過無菌查驗(yàn)后，保證產(chǎn)品可以達(dá)到無菌的要求。2、合用范圍合用于我企業(yè)進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)量查驗(yàn)的技術(shù)人員。3、內(nèi)容簡(jiǎn)述：無菌檢測(cè)系用于檢查細(xì)胞能否無菌的一種方法。檢查項(xiàng)目包含需氧菌、厭氧菌及真菌檢查。若供試品切合該項(xiàng)檢查方法的相關(guān)規(guī)定，僅表示在該查驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。環(huán)境要求：該項(xiàng)檢查應(yīng)在環(huán)境干凈度萬(wàn)級(jí)背景下的局部百級(jí)的單向流地區(qū)內(nèi)或隔絕系統(tǒng)中進(jìn)行。其過程一定嚴(yán)格恪守?zé)o菌操作，平時(shí)查驗(yàn)需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。人員要求：無菌檢測(cè)人員應(yīng)具備微生物及查驗(yàn)專業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過無菌查驗(yàn)培訓(xùn)。4、無菌查驗(yàn)前的準(zhǔn)備用具滅菌、消毒試驗(yàn)過程中與供試品接觸的全部用具一定采納靠譜方法滅菌，可置高壓滅菌鍋內(nèi)121℃蒸汽滅菌30分鐘后使用（依據(jù)滅菌成效考證決定滅菌參數(shù)）。所有的滅菌物件不該超出2周即用畢，不然應(yīng)從頭滅菌。凡查驗(yàn)中使用的器械無2v1.0可編寫可改正法滅菌辦理的，使用前一定經(jīng)消毒辦理，如無菌查驗(yàn)室的電子天平，工作臺(tái)面等，可采納消毒劑浸泡或擦抹。用具的滅菌、消毒后一定做好表記，注明滅菌、消毒時(shí)間和使用有效期。人員、物料進(jìn)入無菌查驗(yàn)室開啟紫外燈或臭氧發(fā)生器進(jìn)行空間滅菌辦理，消毒時(shí)間不得少于30分鐘。人員進(jìn)入無菌查驗(yàn)室需在一更區(qū)脫去一般區(qū)工作鞋，換無菌查驗(yàn)室工作鞋，并在二更區(qū)穿著無菌服、口罩和手套，口罩掩住口鼻，帽子包裹全部頭發(fā)。進(jìn)入無菌查驗(yàn)室的全部培育基、供試品等需將外包裝在傳達(dá)窗拆掉后，查察全部進(jìn)入無菌查驗(yàn)室的用具上的滅菌、消毒表記，能否在有效期內(nèi)，切合要求的于傳達(dá)窗進(jìn)行表面紫外消毒，傳入無菌查驗(yàn)室。5、無菌查驗(yàn)室操作要求1）人員進(jìn)入后，第一進(jìn)一步消毒擦抹工作臺(tái)面。2）全過程一定嚴(yán)格履行無菌操作，防備微生物污染。3）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放，防止損壞，以防培育物擴(kuò)散。4）全部操作均應(yīng)在近火焰區(qū)進(jìn)行，且不得有大幅度或快速動(dòng)作，免得攪動(dòng)空氣中的灰塵微粒。5）使用金屬接種用具時(shí)，用前、用后均需灼燒滅菌。6）在接種培育物時(shí)，動(dòng)作應(yīng)輕、準(zhǔn)，防備培育物濺出，產(chǎn)生汽溶膠，造成污染。7）操作過程中全部的帶菌物件，用后均應(yīng)作消毒、滅菌辦理。可在查驗(yàn)過程中隨用隨時(shí)放入消毒液缸內(nèi)浸泡或消毒桶內(nèi)，或在查驗(yàn)達(dá)成后經(jīng)傳達(dá)窗傳至一般區(qū)，立刻用壓力蒸汽滅菌鍋121℃滅菌30分鐘。6、培育基制備需氧菌、厭氧菌培育基（硫乙醇酸鹽流體培育基）的制備所用試劑：酪胨（胰酶水解）葡萄糖31/5，否剛v1.0可編寫可改正L-胱氨酸硫乙醇酸鈉（或硫乙醇酸）（）酵母浸出粉氯化鈉新配制的%刃天青溶液瓊脂水1000ml制備：除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混淆，微溫溶解，調(diào)理pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)理pH為±。硫乙醇酸鹽流體培育基氧化層的顏色要求：在供試品接種前，培育基氧化層的高度不得超出培育基深度的需經(jīng)100℃水浴加熱到粉紅色消逝（不超出20分鐘）快速冷卻，只限加熱一次，并應(yīng)防備被污染。霉菌培育基（改進(jìn)馬丁培育基）的制備所用試劑：胨酵母浸出粉葡萄糖磷酸二氫鉀硫酸鎂水1000ml制備：除葡萄糖外，取上述成分混和，微溫溶解，調(diào)理pH值約為，煮沸，加葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)理pH為±。4v1.0可編寫可改正還可使用按處方生產(chǎn)的切合規(guī)定的脫水培育基，依據(jù)使用說明書配制。培育基配制后應(yīng)趕快滅菌，防止微生物生殖。一般采納高壓蒸汽121℃滅菌30分鐘。制備好的培育基應(yīng)在2～25℃保留，在3周內(nèi)使用。培育基的無菌性檢查每批配制的培育基均應(yīng)進(jìn)行無菌性檢查（可與產(chǎn)品無菌查驗(yàn)同步進(jìn)行）。檢查時(shí)，每批培育基隨機(jī)取許多于5支（瓶）培育14天，應(yīng)無菌生長(zhǎng)。7、稀釋液、沖刷液的制備%蛋白胨水溶液：取蛋白胨，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝后置入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121℃滅菌30分鐘后，于4℃保留備用。氯化鈉-蛋白胨緩沖液：取磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、蛋白胨，加水1000ml。微溫溶解，濾清，分裝后置入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121℃滅菌30分鐘后，于4℃保留備用。浸提介質(zhì)：9g/L無菌氯化鈉溶液。8、比較菌液制備無菌查驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超出5代。取金黃色葡萄球菌的普通瓊脂斜面培育物，接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培育基內(nèi)，在30～35℃培育18～24h后備用，同時(shí)制備%氯化鈉溶液加入6支小試管內(nèi)，每支試管內(nèi)加的%氯化鈉溶液，在高壓滅菌鍋內(nèi)經(jīng)121℃滅菌30分鐘備用。將已配好的金黃色葡萄球菌培育菌液取加入第一支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:10的菌液；取第一支試管內(nèi)菌液加入第二支小試管內(nèi)，稀釋成濃度1:100的菌液，同法稀釋成濃度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。采納平皿計(jì)數(shù)法測(cè)定活菌數(shù)。9、無菌查驗(yàn)培育溫度硫乙醇酸鹽流體培育基，置30～35℃培育。5v1.0可編寫可改正改進(jìn)馬丁培育基，置23～28℃培育。、無菌查驗(yàn)滅菌前、后菌片應(yīng)按菌片說明書規(guī)定條件保留。接種開啟單向?qū)恿?，分別將滅菌后的菌片成對(duì)放入已滅菌的硫乙醇酸鹽流體培育基中，同時(shí)以金黃色葡萄球菌作陽(yáng)性比較，以未接種的硫乙醇酸鹽流體培育基和未接種的改進(jìn)馬丁培育基作為陰性比較。培育陽(yáng)性比較管于30~35℃細(xì)菌培育箱培育48~72小時(shí)，其他硫乙醇酸鹽流體培育鑒于30~35℃細(xì)菌培