涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-3細(xì)胞株ALDH1~+細(xì)胞的生物學(xué)功能的研究與探討涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-3細(xì)胞株ALDH1~+細(xì)胞的生物學(xué)功能的研究與探討

摘要：涎腺腺樣囊性癌是頭頸部最常見的一種惡性腫瘤，其預(yù)后較差。本研究旨在探討涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-3細(xì)胞株ALDH1~+細(xì)胞的生物學(xué)功能。通過(guò)對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、耐藥性、干性等生物學(xué)功能的研究，鑒定出ALDH1~+細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖、侵襲、遷移能力和良好的耐藥性，同時(shí)具有一定的干性。研究結(jié)果表明，ALDH1~+細(xì)胞可能是涎腺腺樣囊性癌的干細(xì)胞，與該癌癥的發(fā)生、發(fā)展、耐藥性等密切相關(guān)。本研究可為涎腺腺樣囊性癌的臨床治療提供新的思路和方法。

關(guān)鍵詞：涎腺腺樣囊性癌，ACC-3細(xì)胞株，ALDH1~+細(xì)胞，生物學(xué)功能，干細(xì)胞

Abstract:Adenoidcysticcarcinomaofsalivaryglandisthemostcommonmalignanttumorinheadandneck,withpoorprognosis.TheaimofthisstudyistoexplorethebiologicalfunctionofALDH1~+cellsinACC-3cellsofadenoidcysticcarcinomaofsalivarygland.Bystudyingthebiologicalfunctionsofcellproliferation,invasion,migration,drugresistance,andstemness,ALDH1~+cellswerefoundtohavestrongerabilitiesofproliferation,invasion,migration,andbetterdrugresistance,aswellasacertaindegreeofstemness.TheresultsofthisstudyindicatethatALDH1~+cellsmaybethestemcellsofadenoidcysticcarcinomaofsalivarygland,whicharecloselyrelatedtotheoccurrence,developmentanddrugresistanceofthiscancer.Thisstudyprovidesnewideasandmethodsfortheclinicaltreatmentofadenoidcysticcarcinomaofsalivarygland.

Keywords:Adenoidcysticcarcinomaofsalivarygland,ACC-3cellline,ALDH1~+cells,biologicalfunctions,stemcells

一、引言

涎腺腺樣囊性癌是一種慢性進(jìn)展性腫瘤，常常對(duì)化療和放療不敏感。大多數(shù)患者的腫瘤會(huì)復(fù)發(fā)甚至轉(zhuǎn)移，對(duì)其預(yù)后帶來(lái)嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。干細(xì)胞在癌癥中的作用一直備受關(guān)注。干細(xì)胞能夠自我更新，并且具有形成多種細(xì)胞類型的潛力。越來(lái)越多的研究表明，癌癥干細(xì)胞可能是導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和治療失敗的關(guān)鍵因素。ALDH1是一種僅在干細(xì)胞中表達(dá)的酶，是識(shí)別和分離出癌癥干細(xì)胞的標(biāo)志之一。本研究旨在探討涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-3細(xì)胞株ALDH1~+細(xì)胞的生物學(xué)功能，探索其在該癌癥發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中的作用。

二、材料與方法

1.細(xì)胞培養(yǎng)

選取涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞株ACC-3，以DMEM培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入10%胎牛血清（FBS）。細(xì)胞以37°C和5%CO2的條件下培養(yǎng)。

2.流式細(xì)胞術(shù)分離ALDH1~+細(xì)胞

采用ALDEFLUOR試劑盒檢測(cè)ALDH酶的活性，并使用流式細(xì)胞術(shù)分離ALDH1~+細(xì)胞。

3.MTT實(shí)驗(yàn)

采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，測(cè)定細(xì)胞增殖曲線。MTT法的步驟如下：取1×104個(gè)細(xì)胞/wells放入96孔板中，于24h后注入不同濃度的化合物溶液，24h后將MTT染色溶液加入孔中，于1h后除去溶液并加入相應(yīng)的溶解液，用ELISA讀板器測(cè)定吸光度。

4.Scratch實(shí)驗(yàn)

采用刮痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力，將細(xì)胞培養(yǎng)在6孔板上，通過(guò)手動(dòng)添加200ul精確吸管對(duì)細(xì)胞層進(jìn)行刮痕處理。

5.Transwell實(shí)驗(yàn)

Transwell小室儀是通用的檢測(cè)細(xì)胞侵襲力的儀器，使用前將系統(tǒng)消毒，加入需要檢測(cè)的細(xì)胞，將上皿放置數(shù)字轉(zhuǎn)動(dòng)裝置中，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，將上皿的上面兩層材料取出，分別離心5min，棄上清液，加入100μLMTT液，孵育4h，取出上層材料在石墨儀上測(cè)定OD值。

6.Westernblotting分析

采用Westernblotting方法檢測(cè)干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4、SOX2和Nanog在不同細(xì)胞中的表達(dá)水平。

7.Q-PCR分析

采用Q-PCR方法檢測(cè)干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4、SOX2和Nanog在不同細(xì)胞中的表達(dá)水平。

8.球體形成實(shí)驗(yàn)

采用球體形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的干性。將細(xì)胞以一定濃度種植于含有培養(yǎng)因子的培養(yǎng)基中，7-10天后，球體數(shù)量計(jì)算。

三、結(jié)果

1.ALDH1~+細(xì)胞在ACC-3細(xì)胞中比例較低，但具有較強(qiáng)的增殖能力

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分離ALDH1~+萎縮，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在ACC-3細(xì)胞中，ALDH1~+細(xì)胞的比例較低。ALDH1~+細(xì)胞的增殖能力強(qiáng)于ALDH1~-細(xì)胞。

2.ALDH1~+細(xì)胞的遷移和侵襲力顯著強(qiáng)于ALDH1~-細(xì)胞

刮傷實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，ALDH1~+細(xì)胞的遷移速度明顯快于ALDH1~-細(xì)胞；ALDH1~+細(xì)胞的侵襲能力也明顯強(qiáng)于ALDH1~-細(xì)胞。

3.ALDH1~+細(xì)胞具有更強(qiáng)的抗藥性

MTT法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ALDH1~+細(xì)胞對(duì)藥物的耐藥性受到多種化療藥物干擾，但比ALDH1~-細(xì)胞更具耐藥性。

4.ALDH1~+細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4、SOX2和Nanog，表現(xiàn)出干細(xì)胞特性

Westernblot和Q-PCR的結(jié)果表明，ALDH1~+細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)志物Oct4、SOX2和Nanog較高，表現(xiàn)出干細(xì)胞特性。同時(shí)，球體形成實(shí)驗(yàn)顯示，ALDH1~+細(xì)胞有更強(qiáng)的干性。

四、討論

本研究通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分離ALDH1~+細(xì)胞，對(duì)比分析了ALDH1~+細(xì)胞和ALDH1~-細(xì)胞的生物學(xué)特性，發(fā)現(xiàn)ALDH1~+細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖、侵襲、遷移能力和良好的耐藥性，同時(shí)表現(xiàn)出一定的干性。這些結(jié)果表明，ALDH1~+細(xì)胞可能是涎腺腺樣囊性癌的干細(xì)胞，與該癌癥的發(fā)生、發(fā)展、耐藥性等密切相關(guān)。

ALDH1在癌癥干細(xì)胞中具有重要作用，因此其可能成為癌癥的治療靶點(diǎn)。通過(guò)分離和檢測(cè)ALDH1~+細(xì)胞，可以更加準(zhǔn)確地識(shí)別涎腺腺樣囊性癌干細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行治療。同時(shí)，針對(duì)ALDH1酶的藥物也可能成為治療該癌癥的新策略。

本研究也有一定的局限性。首先，我們只是選擇了ACC-3細(xì)胞株進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，因此需要更多涎腺腺樣囊性癌的細(xì)胞株來(lái)做進(jìn)一步的研究。其次，我們未能探討ALDH1~+細(xì)胞的分子機(jī)制和作用機(jī)理，需要更深入的研究。

五、結(jié)論

本研究表明，ALDH1~+細(xì)胞可能是涎腺腺樣囊性癌的干細(xì)胞，并具有更強(qiáng)的增殖、遷移、侵襲能力和良好的藥物耐受性。這一結(jié)論將為涎腺腺樣囊性癌的臨床治療提供新的思路和方法，也為癌癥干細(xì)胞的研究提供了新的可能需要引起注意的是，由于涎腺腺樣囊性癌的病因、發(fā)展和治療機(jī)制仍然不清楚，因此對(duì)于該癌癥的干細(xì)胞和治療靶點(diǎn)的研究還需要進(jìn)一步的深入。此外，研究中所使用的ALDH1作為標(biāo)記物也存在一定的局限性，因?yàn)樵撁覆⒎撬邪┌Y干細(xì)胞都會(huì)表達(dá)。因此，在后續(xù)的研究中應(yīng)該探尋其他途徑來(lái)鑒定涎腺腺樣囊性癌的干細(xì)胞，并進(jìn)一步分析其生物學(xué)特性及作用機(jī)制。

總的來(lái)說(shuō)，本研究的發(fā)現(xiàn)為涎腺腺樣囊性癌的治療提供了新的思路和方法，也為癌癥干細(xì)胞的研究提供了新的可能。希望通過(guò)后續(xù)的研究，能夠深入探究涎腺腺樣囊性癌的病因和治療機(jī)制，并為癌癥的早期診斷和治療帶來(lái)實(shí)際的幫助此外，值得注意的是，當(dāng)涎腺腺樣囊性癌已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，采用單一化療和放療已經(jīng)難以取得理想的治療效果。因此，盡早發(fā)現(xiàn)癌癥并進(jìn)行徹底的切除是治療涎腺腺樣囊性癌最有效的方法之一。但是，由于該癌癥具有侵襲性和淋巴轉(zhuǎn)移性較強(qiáng)的特點(diǎn)，手術(shù)治療的難度也較大。因此，在治療方案的制定中應(yīng)該綜合考慮患者的個(gè)體差異和病情的嚴(yán)重程度，以達(dá)到最優(yōu)的治療效果。

此外，隨著分子醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的生物標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)與癌癥的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。因此，探究涎腺腺樣囊性癌的特異性生物標(biāo)志物，對(duì)于早期診斷、治療效果評(píng)價(jià)和預(yù)后判斷都有重要意義。例如，目前已有研究表明，運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白（Myosinlightchainkinase，MLCK）可能是涎腺腺樣囊性癌的特異性生物標(biāo)志物，進(jìn)一步研究其作用機(jī)制和應(yīng)用前景，將有助于更精確地診斷、治療和監(jiān)測(cè)該癌癥。

綜上所述，涎腺腺樣囊性癌作為一種罕見的癌癥類型，在病因、發(fā)展和治療機(jī)制方面仍存在諸多未知領(lǐng)域。針對(duì)該癌癥的干細(xì)胞和特異性生物標(biāo)志物的研究，將有助于揭示其發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制，為治療和預(yù)后判斷提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，在制定治療方案時(shí)，也應(yīng)該根據(jù)病情的不同，綜合考慮多種治療手段，以實(shí)現(xiàn)更好的治療效果此外，在患者的康復(fù)期間，營(yíng)養(yǎng)支持也是非常重要的環(huán)節(jié)。由于癌癥治療常常會(huì)影響患者的食欲和身體機(jī)能，因此需要專業(yè)的營(yíng)養(yǎng)師進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)方案的制定，保證患者攝入足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，維持身體的免疫力和健康狀態(tài)。

此外，必須不斷加強(qiáng)公眾對(duì)涎腺腺樣囊性癌的認(rèn)識(shí)和了解。目前，該癌癥的發(fā)病率并不高，但是它的侵襲性和淋巴轉(zhuǎn)移性較強(qiáng)，易于被忽視和誤診。因此，關(guān)于涎腺腺樣囊性癌的癥狀、治療方法和預(yù)防措施等信息需要廣泛宣傳到公眾，提高人們對(duì)該癌癥的認(rèn)識(shí)和警惕性，有助于早期發(fā)現(xiàn)和治療該疾病。

最后，強(qiáng)調(diào)科學(xué)家們?cè)谙严傧贅幽倚园┭芯款I(lǐng)域的重要性。雖然該疾病的發(fā)病率較低，但是它的侵襲性和淋巴轉(zhuǎn)移性較強(qiáng)，有著較高的臨床危害性。因此，需要科學(xué)家們的不懈努力和積極