開(kāi)題報(bào)告

2010-6-1九江早餐豆?jié){中12種異黃酮含量的初步研究

姓名：楊波

劉賢德指導(dǎo)老師：

王春娥主要內(nèi)容一、引言二、材料方法三、研究進(jìn)程四、可預(yù)期的結(jié)果五、創(chuàng)新點(diǎn)六、需要克服的困難七、參考文獻(xiàn)

最近美國(guó)營(yíng)養(yǎng)和食品學(xué)會(huì)調(diào)查了美國(guó)和日本人的食譜，發(fā)現(xiàn)豆類食品中的三羥基異黃酮是日本人癌癥發(fā)病率低的主要原因之一。尤其是乳腺癌和前列腺癌，美國(guó)人的發(fā)病率是日本人的4倍。由于大豆異黃酮作為植物雌激素具有抑制和協(xié)同的雙向調(diào)節(jié)作用，對(duì)改善女性體內(nèi)的雌激素平衡、減輕婦女更年期不適癥、預(yù)防癌癥、防止脂質(zhì)過(guò)氧化、預(yù)防糖尿病、保護(hù)心血管和防止骨質(zhì)疏松等方面具有重要生理活性。在激素替代治療、激素依賴性腫瘤以及其他腫瘤的防治方面有著廣闊的應(yīng)用前景,有很高的保健價(jià)值。

正是由于大豆異黃酮許多的生理功效，國(guó)內(nèi)已經(jīng)將大豆異黃酮作為保健品、食品、特別是醫(yī)藥中間體，被用作食品添加劑、保健食品和藥物組分。同時(shí)隨著異黃酮的生理活性得到人們普遍認(rèn)可，開(kāi)展大豆異黃酮研究就具有了重要的理論和實(shí)際意義，而其中測(cè)定保健品、大豆豆制品和大豆籽粒中大豆異黃酮的含量則成為研究熱點(diǎn)之一。張艷舫等（1）利用高效液相色譜法對(duì)市場(chǎng)上銷售的5種國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口大豆異黃酮保健食品中12種大豆異黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果是產(chǎn)品1中為(6.93±0.22)mg/g膠囊,每粒的質(zhì)量為0.5g,說(shuō)明(3.47±0.11)mg/粒。產(chǎn)品2中為(38.60±0.41)mg總異黃酮/g膠囊,每粒的質(zhì)量為0.5g,即(19.30±0.21)mg/粒。產(chǎn)品3中為(82.79±0.85)mg/g膠囊,每粒的質(zhì)量為0.5g,說(shuō)明(41.4±0.43)mg/g膠囊。產(chǎn)品4中為(81.72±1.94)mg/g,每片的質(zhì)量為0.6g,說(shuō)明(49.0±1.16)mg/粒。產(chǎn)品5中未檢出任何一種大豆異黃酮。楊威等（12）利用反相高效液相色譜法分別測(cè)定了成都牧甫、ArcherDarielsMidlandCo.、成都欣宇、廣漢生物、杭州德愛(ài)、四川德陽(yáng)保健品原料中大豆苷含量分別為。

153mg/g、193mg/g、151mg/g、150mg/g、142mg/g、150mg/g，染料木苷含量分別為267mg/g、221mg/g、230mg/g、258mg/g、230mg/g、230mg/g，大豆素含量分別為11.6mg/g、0.30mg/g、2.2mg/g、13.7mg/g、8.00mg/g、8.60mg/g，染料木素含量分別為21.6mg/g、24.0mg/g、22.4mg/g、23.0mg/g、21.7mg/g、22.4mg/g.魏鋒等（7）利用HPLC-DAD-MS聯(lián)用技術(shù)，以染料木素為對(duì)照,同時(shí)測(cè)定北京的市售大豆異黃酮類中藥和保健食品中大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素和染料木素6種成分的含量。結(jié)果顯示大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素、染料木素在樣品1中含量分別為0.05%、0.05%、0.04%、1.67%、0.93%、0.25%，樣品2中含量分別為0.06%、0.04%、

0.07%、1.49%、0.87%、

0.20%，樣品3中含量分別為0.07%、0.09%、0.04%、1.59%、0.94%、0.21%，樣品4中含量分別為0.74%、0.04%、3.69%、0.32%、0.15%、5.70%，

徐淑玲等（3）利用紫外分光光度法對(duì)來(lái)自周口糧油公司的大豆、大豆粕(CP:43%)、大豆粕(CP:48%)來(lái)自廣聯(lián)飼料公司的大豆粉、膨化大豆以及來(lái)自吉安的贛中南小黑豆等不同豆類飼料原料中的大豆異黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果得出,不同豆類飼料原料中大豆異黃酮含量不同,大豆中大豆異黃酮含量為2004.63±92.98(μg/g),大豆粕(CP:43%)中大豆異黃酮含量為2201.73±36.82(μg/g),大豆粕(CP:48%)中大豆異黃酮含量為2265.54±60.07(μg/g),大豆粉中大豆異黃酮為2333.55±60.00(μg/g),膨化大豆中大豆異黃酮含量為2264.75±24.61(μg/g),贛中南小黑豆中大豆異黃酮含量為2239.44±24.8(μg/g)。張靜等（5）利用高效液相色譜法對(duì)淡豆豉、黃大豆及黑大豆中染料木苷、大豆苷元、染料木素三種成分的含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示每g淡豆豉中染料木苷、大豆苷元、染料木素的含量為分別為1076.8μg、310.48μg、141.93μg，

每g黃大豆中三種異黃酮含量為580.23μg、27.43μg、14.99μg，每g黑大豆中三種異黃酮含量為603.42μg、13.48μg、5.26μg。史桂玲（6）等利用紫外分光光度法對(duì)不同豆制品中大豆異黃酮總含量進(jìn)行測(cè)定并比較，這些豆制品包括豆水、豆腐、豆粕、豆芽、大豆、豆豉、豆?jié){、豆渣。測(cè)定結(jié)果顯示每2.5g樣品中含有的異黃酮總量分別為33.06、29.61mg、36.68mg、33.65mg、18.61mg、16.31mg、16.75mg、1.47mg。馬方勵(lì)（8）等利用反相高效液相色譜法測(cè)定4種醬油制品中黃豆苷元與染料木素這兩種異黃酮苷元的含量，樣品醬油由李錦記有限公司提供，結(jié)果顯示黃豆苷元含量分別為0.0244%、0.0195%、0.006%、0.0045%，染料木素含量0.0288%、0.227%、0065%、0.0043%。井樂(lè)剛（10）等采用高效液相色譜法檢測(cè)、分析大豆乳清提取物中的染料木苷和大豆苷的含量。用Nova—PakC18色譜柱分析大豆乳清提取物，流動(dòng)相為甲醇一0.4％磷酸水溶液(30：70，v／v)，流速0.7ml／min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm。試驗(yàn)結(jié)果表明，大豆乳清提取物中的大豆異黃酮含量為72.5％，其組成以染料木苷和大豆苷為主，二者比例接近1：1.

何莉萍等（11）利用高效液相色譜法對(duì)浸泡后的大豆、浸泡豆子水、豆腐渣、熟豆?jié){、豆腐、黃漿水中游離大豆異黃酮總量占原料豆中游離大豆異黃酮總量的百分比進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果分別為：93.8%，0.50%，30.0%，66.9%，34.2%和20.3%。返回目前，國(guó)內(nèi)對(duì)大豆異黃酮含量的檢測(cè)也主要集中對(duì)大豆籽粒，大豆制品及相關(guān)保健食品等方面。而其中在類似與檢測(cè)豆?jié){中全部12種大豆異黃酮含量的研究相對(duì)較少，而江西九江地區(qū)在這一方面更是一個(gè)空白區(qū)域，因此本次課題選擇對(duì)九江早餐豆?jié){中12種大豆異黃酮含量的檢測(cè)方面進(jìn)行初步的研究。

2.材料與方法

2.1供試材料

本次研究的樣品豆?jié){將在九江市內(nèi)的潯陽(yáng)區(qū)、廬山區(qū)及所管轄的湖口縣這三個(gè)地區(qū)進(jìn)行取樣，每個(gè)地區(qū)分別取三批樣品，三批樣品都取自三個(gè)區(qū)域內(nèi)的不同地點(diǎn)，同時(shí)所取的樣品豆?jié){盡可能是不同的品牌，每次取樣的量大約為500mL。2.2主要儀器與試劑

Agilent1200型高效液相色譜系統(tǒng)(包括四元泵、在線真空脫氣機(jī)、DAD檢測(cè)器、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器,ZorbaxSB-C18柱(5μm,4.6mmx15cm)、

1.5mL色譜自動(dòng)進(jìn)樣小瓶、Milli-Q超純水系統(tǒng)、離心機(jī)、KQ-300DB型數(shù)控超聲波清洗器、多頭控溫?cái)嚢杵鳌⒎治鎏炱健⒂袡C(jī)相針式濾器(13mm×0.45μm)、移液器。

甲醇、乙酸、超純水。標(biāo)準(zhǔn)品:7,4’﹣二羥基異黃酮,7,4’﹣二羥基異黃酮﹣7﹣葡萄糖苷,6"﹣O﹣乙酰基﹣7,4'﹣二羥基異黃酮-葡萄糖苷;6"﹣O﹣丙?；?,4'﹣二羥基異黃酮一糖苷,5,7,4'-三羥基異黃酮、5,7,4’-三羥基異黃酮一7一葡萄糖苷,6"﹣O﹣乙?；?,7,4'一三羥基異黃酮-葡萄糖苷，6"﹣O﹣丙?；?,7,4'﹣三羥基異黃酮﹣葡萄糖苷,7,4'﹣二羥基﹣6﹣甲氧基異黃酮;7,4'-二羥基﹣6﹣甲氧基異黃酮-7-葡萄糖苷,6"﹣O﹣乙?；?，4'﹣二羥基﹣6﹣甲氧基異黃酮﹣葡萄糖苷,6"﹣O﹣丙?；?,4’﹣二羥基﹣6﹣甲氧基異黃酮﹣葡萄糖苷。

2.3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液與混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制:以少量甲醇分別將上述12個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶解，轉(zhuǎn)置于12個(gè)10mL容量瓶，甲醇定容，-20℃保存?zhèn)溆??；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液的配制:取12種單標(biāo)儲(chǔ)備液各1mL于25mL容量瓶，以甲醇定容，-20℃保存?zhèn)溆谩?.6統(tǒng)計(jì)分析

采用軟件SAS9.0，參考《試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法》(蓋鈞銳，2000)與《SAS統(tǒng)計(jì)分析及應(yīng)用》(黃燕和吳平，2006)，根據(jù)不同的試驗(yàn)設(shè)計(jì)按Summary,CORR與GLM程序進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3.研究進(jìn)程

5月

-9月

檢索、閱讀相關(guān)文獻(xiàn)，熟悉實(shí)驗(yàn)方法、并設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。9月

-10月

到指定的取樣點(diǎn)進(jìn)行取樣以及對(duì)樣品進(jìn)行相關(guān)的測(cè)定。11月

–2月

整理數(shù)據(jù)，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果最后撰寫畢業(yè)論文。

4.可預(yù)期的結(jié)果可以測(cè)定得到九江地區(qū)不同批次早餐豆?jié){中幾種大豆異黃酮的含量。

6.需要克服的困難（1）在取樣的地點(diǎn)的選取上，所選取的取樣點(diǎn)能否真正代表整個(gè)九江地區(qū)，地點(diǎn)選擇的過(guò)于集中無(wú)法代表整個(gè)九江地區(qū)，分散開(kāi)多點(diǎn)取樣的話雖然能夠解決這個(gè)問(wèn)題，但是卻會(huì)增加本次研究的成本，如何根據(jù)自身所現(xiàn)有的條件合理科學(xué)的選擇取樣點(diǎn)是首先要解決的問(wèn)題。（2）在大部分豆制類加工品中豆?jié){中異黃酮含量相對(duì)含量是比較低的，要準(zhǔn)確的檢測(cè)出豆?jié){中12種大豆異黃酮的含量，在方法上就必須有所改善，如何在色譜條件、檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相、柱溫、流速、進(jìn)樣量等各個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化使其更快更準(zhǔn)確的檢測(cè)出豆?jié){中異黃酮的含量同樣也是一個(gè)難題。（3）在材料的提取方面由于其他各種原因，提取條件很難做到完全穩(wěn)定。7.參考文獻(xiàn)

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