獸用疫苗生產(chǎn)與質(zhì)量控制主要內(nèi)容1.獸用生物制品簡介2.疫苗的定義和分類3.疫苗生產(chǎn)工藝簡介4.疫苗生產(chǎn)質(zhì)量控制5.疫苗研究發(fā)展趨勢一、獸用生物制品簡介獸用生物制品概念獸用生物制品分類2、獸用生物制品分類按生物制品性質(zhì)分類疫苗（vaccine）：接種動物后能產(chǎn)生自動免疫和預(yù)防疾病的一類生物制劑稱為疫苗。類毒素（toxoid）：又稱脫毒毒素，是指細菌生長繁殖過程中產(chǎn)生的外毒素，經(jīng)化學(xué)藥品（如甲醛）處理后成為無毒性但保留免疫原性的生物制劑，接種動物后也能產(chǎn)生自動免疫，產(chǎn)生抗毒素血清。診斷制品（diagnosticpreparation）：利用微生物、寄生蟲及其代謝產(chǎn)物，或動物血清、組織等，根據(jù)免疫學(xué)和分子生物學(xué)原理制備，用于疫病診斷、免疫監(jiān)測和病原鑒定的一類生物制劑?？共⊙澹╝ntiserun）：或高免血清，為含有高效價特異性抗體的血清，能用于治療或緊急預(yù)防相應(yīng)病原體所致的疾病。微生態(tài)制劑（probiotics）：又稱活菌制劑，是用非病原微生物如乳酸桿菌、雙歧桿菌等活菌制劑，口服治療畜禽腸道正常菌群失調(diào)引起的下痢。副免疫制品（paraimmunitypreparation）：這類物質(zhì)能通過刺激機體，提高特異性和非特異性免疫，從而使動物機體對其他抗原物質(zhì)的特異性免疫力更強更持久，如脂多糖、多糖、緩釋微球、細胞因子，免疫刺激復(fù)合物等。液狀制品：濕性制品。一些滅活疫苗如兔病毒性出血癥滅活疫苗，診斷制品如血清、抗原等為液狀制品。多數(shù)既不耐高溫和陽光，又不宜低溫凍結(jié)和反復(fù)凍融，否則其效價會受到影響，只能在低溫冷暗處保存，保存時間較短。干燥制品：液狀制品加入適當(dāng)穩(wěn)定劑或凍干保護劑經(jīng)冷凍真空干燥處理，將96%以上水分除去后剩留疏松海綿狀的物質(zhì)，為干燥制品，生物制品經(jīng)干燥后能較長時間保護活性和抗原效價。佐劑制品：為了增強疫苗制劑誘導(dǎo)動物機體的免疫應(yīng)答反應(yīng)，提高免疫效果，在疫苗制備的過程中加入適量的佐劑，如氫氧化鋁膠、油佐劑等，這類制品稱為佐劑制品。二、疫苗的定義和分類疫苗定義疫苗分類1、疫苗定義由特定細菌、病毒、立克次體、衣原體等微生物及寄生蟲制成的，接種動物后能產(chǎn)生自動免疫和預(yù)防疾病的一類生物制劑均稱為疫苗，制劑的主要成分為微生物或寄生蟲。按疫苗抗原的性質(zhì)和制備工藝分類活疫苗（livevaccine）弱毒活疫苗基因缺失疫苗基因工程活載體疫苗病毒抗體復(fù)合疫苗：特異性高免血清與適當(dāng)比例的相應(yīng)病毒組成，其特點是可以延緩病毒釋放，提高疫苗的安全性和免疫效果?；钜呙缣攸c可在體內(nèi)繁殖系統(tǒng)免疫反應(yīng)和局部免疫反應(yīng)免疫力持久，產(chǎn)量高，成本低有毒力增強和反祖危險抗原干擾現(xiàn)象保存條件苛刻死疫苗（killedvaccine）滅活疫苗：由完整的病毒或細菌經(jīng)滅活劑滅活后制成，即要使病原體充分死亡，喪失感染性或毒性，又要保留其免疫原性。亞單位疫苗：是指將病原體經(jīng)物理或化學(xué)方法處理，除去無效物質(zhì)，提取其有效抗原部分制備的一類疫苗，經(jīng)提取、純化，通過化學(xué)合成，制成不同的亞單位疫苗。死疫苗特點不能在體內(nèi)繁殖有利于制備多價或多聯(lián)疫苗比較安全，不發(fā)生全身性副反應(yīng)，無毒力反祖現(xiàn)象受外界影響小，有利于保存運輸免疫劑量大，需多次免疫，成本高只能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫通常需要用佐劑或攜帶系統(tǒng)來增強其免疫效果基因疫苗（geneticvaccine）：包括DNA疫苗和RNA疫苗，是將編碼某種抗原蛋白的基因置于真核表達元件的控制下，構(gòu)成重組表達質(zhì)粒DNA或RNA，將其直接注入動物體內(nèi)，通過宿主細胞的轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)合成抗原蛋白，從而誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗原蛋白的免疫應(yīng)答。單價疫苗（univalentvaccine）：利用同一種微生物（菌）毒株或同一種微生物中的單個血清型（菌）毒株的增殖培養(yǎng)物制備的疫苗。多價疫苗（polyvalentvaccine）：利用同一種微生物（菌）毒株或同一種微生物中的多個血清型（菌）毒株的增殖培養(yǎng)物制備的疫苗多聯(lián)疫苗（mixedvaccine）：利用不同的微生物增殖培養(yǎng)物，按免疫學(xué)原理和方法組合而成的疫苗。接種動物后能獲得相應(yīng)疾病的免疫保護，一針多防，可減少勞動力和動物應(yīng)激。三、疫苗生產(chǎn)工藝介紹疫苗生產(chǎn)基本條件疫苗生產(chǎn)工藝流程生產(chǎn)中影響疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)疫苗抗原制造技術(shù)介紹疫苗檢驗疫苗保存1、疫苗生產(chǎn)基本條件產(chǎn)品批準文號菌（毒）種疫苗《制造及檢驗規(guī)程》GMP廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備產(chǎn)品批準文號農(nóng)業(yè)部頒發(fā)批準文號GMP證書(具備該疫苗生產(chǎn)線)產(chǎn)品復(fù)核檢驗(具備生產(chǎn)該疫苗的能力)標簽、說明書樣稿審查(符合規(guī)程規(guī)定)省級文號？菌（毒）種分類

菌（毒）種分強毒和弱毒強毒：通常指從得病動物體內(nèi)分離到的致病毒株，只能用于制造滅活疫苗和檢驗用弱毒：通常是采用人工的方法用強毒致弱而成，一般于制造活疫苗菌（毒）種質(zhì)量標準生物學(xué)特性明顯、歷史清楚：形態(tài)、培養(yǎng)特性、生化特性及血清免疫學(xué)特性等明顯，易于鑒別；人工感染動物引起穩(wěn)定一致的臨床癥狀和病理變化特征；原始細菌或病毒株的來源地區(qū)、動物品種流行資料清楚；分離鑒定資料完整；傳代、保藏和生物學(xué)特性檢查方法明確。遺傳學(xué)上相對純一與穩(wěn)定：菌毒種在傳代增殖過程中某些遺傳形狀會發(fā)生改變和分離，如形態(tài)特征、毒力、反應(yīng)原性、免疫原性等方面，因此要求制造生物制品的菌（毒）種的這種改變和分離越小越好，應(yīng)經(jīng)常進行挑選，純化和克隆。弱毒菌（毒）種的選育弱毒菌（毒）種的選育自然弱毒株的分離人工誘變致弱同源動物（如NDVLaSota株）異源動物（HVTFC126株）化學(xué)途徑物理途徑生物途徑亞硝基胍醋酸坨洗衣粉高溫紫外線適應(yīng)非易感動物或細胞雜交減毒疫苗《制造及檢驗規(guī)程》任何一種疫苗都有其《制造及檢驗規(guī)程》，它是國家法定標準。疫苗的生產(chǎn)必須嚴格按《規(guī)程》規(guī)定的方法進行生產(chǎn)和檢驗，若要改變方法，則要提供研究材料證明是可行的，并報農(nóng)業(yè)部評審批準，形成新《規(guī)程》才能進行生產(chǎn)?！兑?guī)程》來源中華人民共和國《獸用生物制品規(guī)程》（常規(guī)疫苗）轉(zhuǎn)讓單位（新獸藥）廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備《GMP》證書是疫苗生產(chǎn)的準入證，疫苗生產(chǎn)必需擁有與生產(chǎn)工藝相符合的生產(chǎn)線

GMP生產(chǎn)車間設(shè)計要求功能區(qū)：抗原制備區(qū)、成品生產(chǎn)區(qū)、洗滌區(qū)、辦公區(qū)。各區(qū)域和功能間以潔凈走廊相連，嚴格按人流物流分開原則進行設(shè)計。潔凈度：按各功能間潔凈度、壓力、壓差要求設(shè)計施工。有10萬級區(qū)、萬級區(qū)和局部百級區(qū)。六大系統(tǒng)：供電、供水、供汽、污水處理、凈化、監(jiān)控。廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備檢驗設(shè)施質(zhì)檢室檢驗動物舍（應(yīng)配備有符合各類實驗動物級別飼養(yǎng)設(shè)施）倉儲設(shè)施原輔材料庫半成品庫成品庫廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備滅菌設(shè)備：高壓蒸氣滅菌柜、干熱箱、鍋爐等；凈化設(shè)備：凈化機組、無菌室、超凈工作臺等；微生物培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備：溫室、孵化器、細胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機、各種罐體、生化培養(yǎng)箱等；乳化設(shè)備：各種罐體、膠體摸、高壓勻漿機等；凍干設(shè)備：凍干機；灌裝設(shè)備：洗烘連動線、自動灌裝加塞聯(lián)動機；包裝設(shè)備：扎蓋機、帖標機；冷藏冷凍設(shè)施設(shè)備：冷庫、冷柜、液氮罐等；污水廢棄物處理設(shè)施設(shè)備：滅菌柜、消毒罐、污水處理站；檢驗儀器設(shè)施設(shè)備：各種顯微鏡、水分測定儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、生物安全柜、動物房等。福州大北農(nóng)公司總體布局圖主廠房大動物房小動物房質(zhì)檢樓鍋爐房污水處理站脾林苗倉儲辦公區(qū)大門生活區(qū)疫苗生產(chǎn)工藝流程

菌（毒）種培養(yǎng)物（培養(yǎng)基、動物、禽胚或細胞等）收獲抗原（培養(yǎng)液、含毒組織、胚液或細胞液等）配苗

分裝凍干成活疫苗或滅活后制成滅活疫苗。細菌疫苗的制造流程蛋白胨、肉浸液等原料培養(yǎng)基配制、滅菌菌種生產(chǎn)用種子培養(yǎng)菌液菌苗原液配苗分裝凍干、扎蓋帖簽活疫苗原料佐劑滅活菌液配苗乳化分裝、扎蓋、帖簽滅活疫苗滅活檢驗配制、滅菌保護劑原料配制、滅菌病毒性細胞疫苗的制造工藝流程健康動物（或胚胎）組織原料細胞懸液生長細胞病毒液配苗分裝凍干、扎蓋帖簽活疫苗基礎(chǔ)種毒生產(chǎn)用種毒原料保護劑配制滅菌細胞培養(yǎng)液傳代細胞滅活病毒液配苗（混勻、乳化）分扎蓋帖簽裝滅活疫苗檢驗原料佐劑配制滅菌滅活檢驗配制培養(yǎng)收獲病毒性組織疫苗的制造工藝流程感染動物或胚胎分裝、扎蓋、貼簽健康動物或SPF雞胚等健康動物或SPF雞胚等動物或SPF雞胚等基礎(chǔ)種毒生產(chǎn)用種毒收獲感染組織或胚液純化配制成含毒懸液配苗分裝凍干活疫苗保護劑原料配制檢驗滅活病毒液配苗、乳化滅活疫苗原料佐劑配制滅活檢驗影響疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)活疫苗生產(chǎn)用菌（毒）種的制備是否優(yōu)良制苗用抗原制備（微生物增殖）是否高效凍干保護劑的選擇和凍干曲線的制定是否合理滅活疫苗生產(chǎn)用菌（毒）種的制備是否優(yōu)良制苗用抗原制備（微生物增殖）是否高效抗原滅活是否徹底乳化工藝是否先進疫苗抗原制造技術(shù)介紹細菌類疫苗抗原增殖技術(shù)（培養(yǎng)基增殖）細菌培養(yǎng)是指細菌在動物體外的人工培養(yǎng)基上以及人工控制的環(huán)境中（通常用培養(yǎng)罐進行培養(yǎng)）生長繁殖的過程。細菌性疫苗都是利用培養(yǎng)基制造的，首先通過分離培養(yǎng)，獲得單個菌落，制備細菌種子，然后逐級培養(yǎng)進行規(guī)?；a(chǎn)。細菌類疫苗抗原增殖技術(shù)（關(guān)鍵控制點）培養(yǎng)基質(zhì)量：培養(yǎng)細菌類疫苗抗原的培養(yǎng)基一般是人工制備的一種液體培養(yǎng)基，它含有培養(yǎng)相應(yīng)細菌所需營養(yǎng)成分，包括水、氮源、碳源、無機源和生長因子等它的好壞直接影響到產(chǎn)菌量和檢驗結(jié)果。生產(chǎn)用菌種菌落挑選符合細菌培養(yǎng)特性活菌含量符合要求純凈無污染代次按規(guī)定控制工藝的穩(wěn)定性培養(yǎng)條件工藝技術(shù)（各種參數(shù)如種子接種量、培養(yǎng)時間、收獲時間等）傳統(tǒng)病毒類疫苗抗原增殖技術(shù)動物增殖禽胚增殖細胞增殖5、疫苗檢驗活疫苗物理性狀（凍干苗）無菌檢驗（純粹檢驗）鑒別檢驗：特異性血清中和檢驗。外源病毒檢驗（病毒類疫苗）：中和法檢驗?；罹嫈?shù)（細菌類疫苗）：平板計數(shù)。病毒含量測定（病毒類疫苗）：EID50、ELD50或TCID50。安全檢驗：動物或雞胚（劑量幾倍至幾十倍）效力檢驗：攻毒保護或微生物含量測定。水份測定（凍干苗）：4%以內(nèi)。真空度測定（凍干苗）：白色、粉色或紫色輝光。滅活疫苗滅活檢驗：半成品檢測：EID50、ELD50或TCID50。物理性狀：外觀、劑型、穩(wěn)定性、粘度檢驗。無菌檢驗：培養(yǎng)基檢測安全檢驗：動物檢驗效力檢驗：攻毒保護或測抗體。滅活劑含量測定：化學(xué)分析6、疫苗保存疫苗對溫度極為敏感，保存不當(dāng)會使效價嚴重受損（尤其是活疫苗）或劑型破壞，并導(dǎo)致疫苗失效，因此應(yīng)嚴格在規(guī)定的條件下保存。7、豬瘟活疫苗產(chǎn)品介紹種類：豬瘟活疫苗根據(jù)抗原制備途徑不同又分為：豬瘟活疫苗（成兔脾淋源）豬瘟活疫苗（乳兔源）豬瘟活疫苗（細胞源）豬瘟活疫苗（牛體源）疫苗研究和發(fā)展歷史背景3.6豬瘟活疫苗產(chǎn)品介紹

—生產(chǎn)和使用對比

疫苗類型使用種毒抗原制備方法質(zhì)量標準生產(chǎn)成本臨床使用豬瘟活疫苗（成兔脾淋源）豬瘟兔化弱毒接種成兔，采集兔體脾淋組織150個RID高非特異免疫強抗原含量高過敏率低豬瘟活疫苗（乳兔源）豬瘟兔化弱毒接種乳兔，采集乳兔肌肉組織150個RID較高無非特異免疫抗原含量較低過敏率高豬瘟活疫苗（細胞源）豬瘟兔化弱毒接種牛睪丸細胞，收貨細胞培養(yǎng)液750個RID（新標準7500RID）低無非特異免疫，抗原含量高，過敏率較高豬瘟活疫苗（牛體源）豬瘟兔化弱毒接種犢牛，采集犢牛脾淋組織150個RID較底非特異免疫強抗原含量高過敏率低豬瘟活疫苗質(zhì)量控制要素菌毒種純凈（細菌和外源性病毒污染）含毒量高于國家標準代次控制在5代以內(nèi)原材料的選擇組織苗家兔的選擇（兔種、年齡、體重、健康狀況等）乳兔的選擇（日齡、體重、健康狀況等）細胞苗細胞的選擇（無污染外原病毒等）豬瘟活疫苗質(zhì)量控制要素生產(chǎn)環(huán)境控制

組織苗動物飼養(yǎng)條件控制接毒后動物反應(yīng)觀察與判斷生產(chǎn)線功能間潔凈級別要求

細胞苗細胞檢測（BVDV等）健康細胞和接毒后細胞的觀察與判斷生產(chǎn)線功能間潔凈級別要求半成品檢測成品檢測四、疫苗生產(chǎn)質(zhì)量控制質(zhì)量控制意義質(zhì)量控制要求質(zhì)量控制保證措施（獸藥GMP管理）疫苗質(zhì)量評價1、質(zhì)量控制意義國家強制要求禽流感事件，人血白蛋白事件企業(yè)自身要求品牌、效益、責(zé)任生物制品特殊性表現(xiàn)在在生產(chǎn)和使用過程中人和動物的安全性（污染、混毒、人畜共患）對環(huán)境的安全性群體性危害

2、質(zhì)量控制要求

安全性：毒副作用、殘留、環(huán)境、人類有效性：有效成分達到要求，療效確切均一性：批間、最小單元間、貯存運輸后等穩(wěn)定性：貯存期穩(wěn)定，有較長的有效期方便性：給藥的方式、途徑經(jīng)濟性：在保證質(zhì)量的前提下，改進生產(chǎn)工藝，提高效力，降低成本3、保證措施——獸藥GMP管理

GMP是英文GoodManufacturingPracticefor

Drugs的縮寫，直譯為“優(yōu)良產(chǎn)品的生產(chǎn)實踐”。我國的《獸藥GMP》是《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的簡稱》。

《獸藥GMP》是在獸藥生產(chǎn)過程中，用科學(xué)、規(guī)范化的條件和方法來保證生產(chǎn)優(yōu)良獸藥的整套科學(xué)體系。它實施的目標就是對獸藥生產(chǎn)的全過程進行質(zhì)量控制，以保證生產(chǎn)的獸藥質(zhì)量是合格優(yōu)良的。3、保證措施——獸藥GMP背景GMP是從藥品生產(chǎn)實踐中取得經(jīng)驗教訓(xùn)的總結(jié)。人類社會經(jīng)歷了12次藥物災(zāi)難，特別是20世紀出現(xiàn)的藥物災(zāi)難“反應(yīng)停”事件后，公眾要求制定嚴格監(jiān)督法律；最早的GMP是由美國坦普爾大學(xué)6名教授編寫制定；1963年美國頒布第一部GMP，美國FDA經(jīng)過實施；1975年WHO正式公布GMP，開始向成員國推薦，并確定為WHO的法規(guī)之一，迄今為止有100多個國家實施了GMP；我國醫(yī)用藥品從1982年開始頒布GMP，農(nóng)業(yè)部于己于1989年頒布并決定實施GMP，規(guī)定至2005年12月31日未取得《GMP合格證》的企業(yè)，不得進行藥品生產(chǎn)。3、保證措施——控制要求生產(chǎn)、管理人員廠房、設(shè)施、設(shè)備原料、包裝材料生產(chǎn)方法檢驗、監(jiān)控售后服務(wù)經(jīng)檢驗合格的經(jīng)過驗證的可靠的完善的經(jīng)驗證合適的訓(xùn)練有素的GMP基本控制要求影響質(zhì)量的因素完善的管理文件3、保證措施——控制要求在GMP管理要求中，3條主線貫穿全過程生產(chǎn)處處防污染：原材料或產(chǎn)品被微生物或外來物攙雜、玷污、混雜、失真、遺漏、任意等造成產(chǎn)品的質(zhì)量問題，生產(chǎn)過程對環(huán)境和人員的安全性：事物件件有驗證：能證明任何程序、生產(chǎn)過程、設(shè)備、物料、活動或系統(tǒng)能導(dǎo)致預(yù)期結(jié)果，有文件證明的行動。凡是須問個為什么？怎么樣？好不好？行不行？----通過驗證----放心使用工作一律守制度：有一項工作或活動就必須有一項制度；有制度就必須執(zhí)行；有執(zhí)行就必須有綜合（分析、檢查）；有綜合就有提高（改進、修