【目的】

試驗三細(xì)菌的分布與消毒滅菌菌操作對于微生物學(xué)及醫(yī)學(xué)實踐的重要性。為正常菌群。③生疏外界因素對細(xì)菌的影響，學(xué)習(xí)常用的消毒滅菌方法。④了解不同細(xì)菌對外界因素具有不同的抵抗力。一、細(xì)菌的分布檢查〔一〕空氣中的細(xì)菌檢查【材料】一般瓊脂平板培育基。【方法】5～30min37℃18～24【結(jié)果】〔填表10-1〕平板培育基外表或多或少有菌落生長?！捕车孛嫠械募?xì)菌檢查【材料】地面水(河水、井水或池水)、高層瓊脂培育基、1ml無菌吸管、滅菌培育皿?！痉椒ā?ml動，使水與瓊脂充分混勻，靜凝。③37℃24【結(jié)果】〔填表10-1〕〔三〕衣服、票證、頭發(fā)、手指皮膚上的細(xì)菌檢查【材料】一般瓊脂平板培育基?！痉椒ā咳∫话闫桨逡粋€，用蠟筆在平板反面玻璃上劃成四等分，并貼上標(biāo)簽(圖37℃24【結(jié)果】填表培育基外表涂抹處有菌落生長。 衣服票證頭發(fā)、手指皮膚上的細(xì)菌檢查〔四〕正常人體咽喉部的細(xì)菌檢查【材料】血液瓊脂平板培育基、滅菌棉拭、接種環(huán)、酒精燈?！痉椒ā總?cè)，然后改用滅菌接種環(huán)作分別劃線接種。蓋上皿蓋，37℃24〔或者承受咳喋法〕?！窘Y(jié)果】〔填表10-1〕的不完全溶血環(huán)。此為咽喉部的正常菌群—甲型鏈球菌?！参濉吃囼灲Y(jié)果觀看(填表)檢查材料細(xì)菌生長狀況菌落個數(shù)試驗體會

細(xì)菌分布的試驗結(jié)果空氣 水 衣角 票證 頭發(fā) 手指 咽喉部二、消毒滅菌試驗〔一〕煮沸與高壓滅菌法【原理】DNA菌強(qiáng)，所以只有承受高壓蒸氣滅菌法才能將芽胞徹底殺滅?！静牧稀凯傊桨鍍蓧K、肉湯管兩支、大腸埃希菌和枯草芽胞桿菌肉湯培育物?！痉椒ā竣偃…傊桨鍍蓧K，用記號筆分別在二平板底部玻面上，注明大腸埃希菌100℃10min121℃20min。100℃l0min121℃20min，用毛再用接種環(huán)于二支肉湯管的任何一管中取一環(huán)菌液接種于大腸埃希菌平板的對l0min121℃20min(1520min24生長狀況?！窘Y(jié)果觀看】〔填表10-2〕表10-2 煮沸和高壓滅菌試驗結(jié)果細(xì)菌名稱枯草芽胞桿菌大腸埃希菌結(jié)果分析

100℃10分鐘 121℃20分鐘 未加熱(對照)〔二〕紫外線殺菌法【原理】DNADNA制，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。用，應(yīng)留意防護(hù)?！静牧稀看竽c埃希菌培育物、瓊脂平板、接種環(huán)、酒精燈、紫外線燈?！痉椒ā糠N。分鐘。37℃24【結(jié)果觀看】〔填空〕平板上用黑紙遮蓋局部 菌生長，未遮蓋局部 這說明紫外線具有 作用，但力弱。1、皮膚消毒試驗【原理】15～3095％的乙醇消毒效果反不如2.5％的碘酒可使菌體酶蛋白中的硫氫基(-SH)性，導(dǎo)致機(jī)能障礙而死亡。【材料】一般瓊脂平板一個、2.5％碘酒、75％乙醇?！痉椒ā恳掖枷臼种负笤俑魍?7℃24【結(jié)果】〔填表〕皮膚消毒試驗結(jié)果37℃37℃24h結(jié)果解釋消毒前手指皮膚消毒后手指皮膚比照(不接種)2【原理】能外用。不同細(xì)菌對不同的化學(xué)消毒劑具有不同的敏感性?！静牧稀颗嘤?、大腸埃希菌培育液、瓊脂平板、無齒小鑷子?！痉椒ā?方法與藥敏試驗相像)三、抗生素的抗菌試驗(藥敏試驗，紙片法)【原理】抗生素主要是指某些微生物(大多數(shù)為放線菌和真菌、極少數(shù)為細(xì)菌)在生長生殖過程中產(chǎn)生的一種合成代謝產(chǎn)物。此種有機(jī)化合物具有抗生物作的抗菌試驗(藥敏試驗)是指在體外測定藥物抑制或殺死細(xì)菌力氣的試驗?！静牧稀竣俳瘘S色葡萄球菌、大腸埃希菌、瓊脂平板培育基。環(huán)?！痉椒ā炕?qū)⑵桨宓撞恳韵灩P劃為六等分，分別在靠近邊緣處注明青、鏈、氯、慶大等字樣〕。②以滅菌接種環(huán)挑取菌液，在培育基外表作密集劃線接種。15mm，并分別作好標(biāo)記。90mm)(mm)，抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限。判定其敏感度?！窘Y(jié)果觀看記錄】填表。藥物敏感試驗結(jié)果推斷參考標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑抑菌圈直徑〔mm〕抗菌藥物耐藥中度敏感敏感青霉素鏈霉素其它抗生素＜10＜10＜1010～1210～1410～15≥13≥15≥16表示常規(guī)劑量的藥物在體內(nèi)所到達(dá)的濃度不能抑制或殺滅待測菌。藥物敏感試驗(紙片集中法)結(jié)果大腸埃希菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌抗生素抑菌圈直徑(cm)敏感度抑菌圈直徑(cm)敏感度青霉素紅霉素慶大霉素先鋒霉素先鋒霉素氯霉素四、口腔內(nèi)微生物檢查〔口腔專業(yè)〕【方法】①滴一滴墨汁于干凈玻片的一端；②用牙簽取齒間牙垢少許在墨汁中涂勻；③用玻片推成推片，枯燥后油鏡觀看、繪圖?！窘Y(jié)果】〔繪圖〕 口腔內(nèi)微生物可見黑色背景中有著色發(fā)亮的細(xì)菌、螺旋體等微生物。五、常用消毒滅菌器及無菌室介紹(一)高壓蒸氣滅菌器【構(gòu)造】高壓蒸氣滅菌器是雙層的金屬圓筒，蓋旁附有螺旋，借以緊閉蓋門，使蒸氣10-5。器內(nèi)裝有帶孔的金屬擱板，用以放置欲滅菌物品?！居梅ā?0蒸氣壓力與溫度的關(guān)系千帕斯卡千克/平方厘米磅/平方吋溫度(kPa)(kg/cm2)(lb/in.2)(℃)34.470.355108.855.200.608113.068.940.7010115.6103.501.0515121.3137.801.5020126.2【留意事項】放氣減壓，以免瓶內(nèi)液體沖出外溢。等。(二)干熱滅菌器(干烤箱)【構(gòu)造】箱壁為雙層，兩層間襯以石棉板隔熱，底部裝有電熱線圈，箱壁有溫度調(diào)整箱內(nèi)溫度漸漸上升，可保持恒溫?！居梅ā吭?，調(diào)整溫度(160～170℃)和時間(2【留意事項】180℃，以免燒焦棉塞及包裝紙。起玻璃器皿裂開。③干烤滅菌主要應(yīng)用于玻璃、陶瓷制品、凡士林、液體石蠟等物品。(三)流通蒸氣滅菌器其構(gòu)造原理同一般的蒸鍋，底層盛水，器內(nèi)有一至二層的帶孔隔板，以放置待滅菌的物品。加熱水后沸騰產(chǎn)生蒸氣。在一般大氣壓下，蒸氣溫度只能到達(dá)100℃，維持此溫度30100℃蒸3037℃孵箱培育過夜，使未死亡的芽胞發(fā)育成生殖體。如此連續(xù)滅菌三次可達(dá)滅菌目的。本法用于一些不耐高溫的培育基之滅菌。(四)濾菌器濾菌器是用以除去細(xì)菌的器具，它含有微細(xì)小孔，只允許液體及氣體通過，藥液、酶制劑等。常用的濾器有蔡氏濾器和玻璃濾器。(五)煮沸消毒器100℃5min刀、注射器)等的消毒。(六)紫外線燈31～2(七)無菌室及無菌工作臺的工作原理及使用的操作均應(yīng)在紫外線消毒后的無菌室或超凈工作臺內(nèi)進(jìn)展。一些不能經(jīng)受高75％0.1％的十二烷基磺酸鈉(SDS)浸泡消毒。1、無菌室 無菌室或稱干凈室，是在試驗室內(nèi)部安裝的與外界隔離的用于30～60min；操作完畢后應(yīng)擦拭臺面，并再經(jīng)紫外線殺菌燈照耀處理，隨時保持室內(nèi)的無菌狀態(tài)?？膳c更衣間為同一間，其間設(shè)吹風(fēng)機(jī)、恒溫培育箱和小型低速離心機(jī)等。2.5m保紫外線的消毒作用。2、無菌工作臺 無菌工作臺又稱超凈工作臺，系在接種罩的根底上設(shè)計出生物顆粒帶走，從而形成無塵無菌的工作環(huán)境。0.32～0.48m/s2～33臺的干凈度(≤3.5顆/L)和平板法測定其平均菌落數(shù)(≤0.5個/皿時)。當(dāng)加大風(fēng)機(jī)輸入電壓已不能使凈化工作區(qū)平均風(fēng)速到達(dá)規(guī)定參數(shù)時，應(yīng)更換高效過濾器。六、醫(yī)院感染的微生物學(xué)監(jiān)測〔醫(yī)院見習(xí)〕(一)壓力蒸氣滅菌效果的監(jiān)測目前應(yīng)用的壓力蒸氣滅菌器有兩種：一種是一般的下排氣式壓力蒸氣滅菌20min。對于壓力蒸氣滅菌效果的檢查包括：1、操作步驟檢查 遵守操作規(guī)程，儀表的檢查(壓力表、留點(diǎn)溫度計、溫度記錄、定時器等)；2、化學(xué)指標(biāo)檢查 120℃121～123℃熔解。3、生物指標(biāo)的監(jiān)測 為直接檢查滅菌效果，通常應(yīng)用嗜熱脂肪芽胞桿菌飽和蒸汽中存活時間≥3～9min，殺滅時間為＜55℃48h且培育基變?yōu)辄S色則說明有菌生長，滅菌不徹底，需查找緣由并重滅菌。(二)紫外線殺菌效果的監(jiān)測3米高處，照耀1～2100uW/cm2，使用中燈70uW/cm2照耀強(qiáng)度，監(jiān)測應(yīng)每半年一次。生物監(jiān)測必要時進(jìn)展，經(jīng)90.00％105～6／片。(三)消毒劑的使用監(jiān)測1、消毒劑鑒定試驗 包括消毒劑定性試驗和消毒劑定量消毒試驗。2、消毒劑使用過程中污染菌的監(jiān)測以及常用消毒劑的中和劑。(四)微生物污染監(jiān)測1、物體外表細(xì)菌污染監(jiān)測 采樣方法為應(yīng)用大小為5cm×5cm的正方形無108/cm3。計算公式如下：平均平板菌落數(shù)×稀釋倍采樣面積平均平板菌落數(shù)×稀釋倍采樣面積2、空氣中細(xì)菌監(jiān)測 室內(nèi)空氣中微生物的發(fā)生源主要為人和動物。人可不呼吸道、消化道、皮膚、毛發(fā)等排出微生物進(jìn)入空氣中。一般狀況下，人體排菌量每分鐘不超過1000個，但患者的排泄物和分泌物，如飛沫、痰液等含有大量的病原菌可嚴(yán)峻污染空氣和物體外表當(dāng)人們在進(jìn)展各種工作時也會污，如醫(yī)療操作、醫(yī)療用品和衛(wèi)生用品生產(chǎn)、微生物試驗、穿衣、鋪床等都可使微生物進(jìn)入空氣中。種消毒措施使用前后的采樣及分析，以評價消毒效果。依據(jù)采樣原理可將采樣方法分為沉降、固體撞擊、液體沖擊和過濾4空氣中的氣溶膠粒子是沉降法中最簡便的方法?！静牧稀糠謩e培育基：養(yǎng)分瓊脂平板、血瓊脂平板等?！痉椒ā竣俨蓸臃椒ú蓸訒r間：選擇消毒處理后與操作前期進(jìn)展。采樣高度：與地面垂直高度為80～150cm處。布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積≤30m2時，可設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點(diǎn)；內(nèi)和外部位，lm30m255lm。平皿暴露采樣：將培育基平皿翻開，暴露5分鐘(亦可5～30分鐘)后，蓋好37℃24～48皿上的菌落數(shù)，按奧氏公式，將所得菌落數(shù)計算成浮游菌數(shù)，依據(jù)公式測算，5100cm210L下：100 5 100 50000NCFU