血清堿性磷酸酶活性測定演示文稿現在是1頁\一共有14頁\編輯于星期二優(yōu)選血清堿性磷酸酶活性測定現在是2頁\一共有14頁\編輯于星期二主要內容：⑴實驗目的⑵實驗原理⑶實驗器材與試劑⑷實驗操作⑸計算⑹臨床意義⑺注意事項現在是3頁\一共有14頁\編輯于星期二

酶活力：也稱酶活性，是表示催化某一特定反應的能力?？梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學速度表示。

酶催化反應速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。

底物減少量或生成物增加量酶促反應速度=

單位時間基本概念現在是4頁\一共有14頁\編輯于星期二實驗目的掌握酶活力測定的一般方法掌握血清中ALP活力測定方法與臨床意義現在是5頁\一共有14頁\編輯于星期二思考

如何測定酶活力的大??？

酶活力：酶催化某一化學反應的能力，其衡量的標準是酶促反應速度的大小。

酶促反應的速度：常用單位時間內底物的減少量或產物的生成量來表示。

現在是6頁\一共有14頁\編輯于星期二酶活力測定方法終止測定法（或定時法）：

*本次實驗的方法

通常是酶作用一段時間后，加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等終止酶促反應，測定這段時間內底物的減少量或產物的生成量，計算酶促反應的平均速度。

連續(xù)監(jiān)測法：

連續(xù)監(jiān)測法是指每隔一定時間（2～60s），連續(xù)多次測定酶反應過程中某一反應產物或底物量隨時間變化的數據，求出酶反應初速度，間接計算酶活性濃度的方法。

適用于自動生化分析儀

目前已取代固定時間法而成為臨床實驗室測現在是7頁\一共有14頁\編輯于星期二堿性磷酸酶（ALP）是一組在堿性環(huán)境中水解磷酸酯的酶類。來源：廣泛分布于人體的骨、腎、肝、腸、血清、膽汁等部位，但骨骼、牙齒、腎和肝臟中含量較多。正常人血清中ALP主要來源于肝臟。是一種能夠將對應底物去磷酸化的酶，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。而該脫去磷酸基團的過程稱為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中有最大活力。什么是ALP？現在是8頁\一共有14頁\編輯于星期二實驗原理堿性磷酸酶在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解生成酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與ALP活性成正比。磷酸苯二鈉+H2O

苯酚+磷酸氫二鈉苯酚+4-氨基安替比林

紅色醌亞胺衍生物ALPpH=10鐵氰化鉀現在是9頁\一共有14頁\編輯于星期二試劑與儀器器材：

5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可調式移液器，721E分光光度計，1cm比色皿，37℃恒溫水浴試劑：

1．0.1mol/L碳酸鹽緩沖液(pH10.0)無水碳酸鈉6.36g，碳酸氫鈉3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于800mL蒸餾水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。

2．20mmol/L磷酸苯二鈉溶液先將500ml蒸餾水煮沸，迅速加入磷酸苯二鈉2.18g(磷酸苯二鈉如含2分子結晶水，則應稱取2.54g)，冷卻后加氯仿2ml防腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不應再倒回瓶中）

3．顯色液（鐵氰化鉀的硼酸溶液）稱取鐵氰化鉀2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸餾水400ml中，兩液混合后，加蒸餾水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出現藍綠色即棄去)。

4．酚標準工作液（0.05mg/ml）購買合格的二級標準品?，F在是10頁\一共有14頁\編輯于星期二實驗操作取4支試管，如下操作：立即混勻。用510nm波長（紅色醌物質的最大吸收波長）比色，以蒸餾水調零點，讀取各管吸光度。*保持反應時溫度是均衡的，37°C測定管標準管空白管對照管血清（ml）0.100——————酚標準液——0.100————蒸餾水————0.100——pH10碳酸鹽緩沖液1.001.001.001.00混勻，37℃水浴保溫5min，同時將底物預熱底物液1.001.001.001.00混勻，37℃水浴保護15min鐵氰化鉀溶液3.003.003.003.00血清———————0.100現在是11頁\一共有14頁\編輯于星期二計算公式:參考值:成人：3~13

Kings單位，兒童：5~28Kings單位。ALP活力=（A測定—A對照）（A標準—A空白）X0.05X100（kings單位）現在是12頁\一共有14頁\編輯于星期二臨床意義在臨床上，血清ALP測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標。1.血清ALP活性升高

肝膽疾病：

阻塞性黃疸、急性或慢性黃疸性肝炎、肝癌等；骨骼疾病：由于骨的損傷或疾病使成骨細胞內所含高濃度的ALP釋放進入血液中，引起血清ALP活性增高，如纖維性骨炎、成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉移癌和骨折修復愈合期等。2.血清ALP活性降低:

比較少見，主要見于呆小癥，重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質等?，F在是13頁\一共有14頁\編輯于星期二注意事項酚標準液開后不能久置。底物液不能含有酚，若含酚則顯