生化藥物制造工藝核酸藥物第1頁/共20頁依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和組成分類：分四類核酸堿基及其衍生物1核苷及其衍生物2核苷酸及其衍生物3多核苷酸4第2頁/共20頁第3頁/共20頁第4頁/共20頁依據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及臨床應(yīng)用情況分類具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)如：肌苷、ATP、GTP、CTP、UTP、CoⅠ等來源：提取或發(fā)酵特點(diǎn)：毒副作用小自然結(jié)構(gòu)堿基、核苷、核酸類結(jié)構(gòu)的類似物如：巰嘌呤、阿糖胞苷、聚肌胞等來源：以核酸類物質(zhì)為前體通過“化學(xué)法”或“酶法”進(jìn)行半合成特點(diǎn)：毒性較大第5頁/共20頁RNA的生產(chǎn)工業(yè)用RNA的提取RNA制備具有生物活性RNA的制備.第6頁/共20頁1、工業(yè)用RNA的提取稀堿法酵母等1％NaOH裂解胞壁溶液HCL中和加熱破壞酶冷卻到10OC離心RNA溶液調(diào)pH2-2.5（接近RNApl）離心RNA沉淀濃鹽法酵母等10％NaCL90OC提取離心上清液調(diào)pH2-2.5離心RNA沉淀第7頁/共20頁2、具有生物活性RNA的制備第8頁/共20頁從核糖核蛋白中分離RNA(1)乙醇沉淀法：核糖核蛋白溶于NaHCO3水相用含辛醇的氯仿去蛋白乙醇RNA沉淀(2)鹽酸胍法：核糖核蛋白2～4鹽酸胍38OC溶解冷卻至0OC離心RNA沉淀第9頁/共20頁

DNA生產(chǎn)方法

1.工業(yè)用DNA的提取第10頁/共20頁第11頁/共20頁核苷酸的制備水解法發(fā)酵法半合成法直接提取法.第12頁/共20頁酶水解:DNA或RNA為原料制備5′－核苷酸常用的酶：橘青霉產(chǎn)生的5′－磷酸二酯酶橘青霉培養(yǎng)液壓濾酶液【酶解】除菌體DNA溶液酶解液加熱、調(diào)pH9.0過濾DNA降解液【離子交換】吸附于氯型陰離子樹脂分部洗脫脫氧核苷酸(dCMP、dAMP、dTMP、dGMP)RNA降解進(jìn)一步分離戊糖核苷酸第13頁/共20頁堿水解：可制備3’和2’－核苷酸第14頁/共20頁發(fā)酵法生產(chǎn)核苷酸產(chǎn)氨短桿菌發(fā)酵生產(chǎn)肌苷酸（IMP）：腺嘌呤營養(yǎng)缺陷型嘌呤核苷酸生物合成途徑和代謝調(diào)控

R5PPRPPPRPP轉(zhuǎn)酰胺酶PRAIMP分解腺嘌呤阻遏GMPAMPADPATP反饋抑制SAMPAMPADPATPXMPGMPGDPGTP鳥嘌呤PPGMPATPPRPPGTP次黃嘌呤鳥嘌呤GMP第15頁/共20頁IMP積累的主要途徑（前提）◆保證IMP合成路線暢通：保證關(guān)鍵酶PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶的活力---解除腺嘌呤及衍生物的組遏和反饋抑制◆阻斷IMP的去路：阻斷SAMP合成阻斷IMP的分解篩選獲得缺乏SAMP合成酶的腺嘌呤缺陷菌株，提供亞適量的腺嘌呤?！羰狗e累的IMP滲透到細(xì)胞外：增大細(xì)胞膜通透性選育Mn2+不敏感的變異株第16頁/共20頁發(fā)酵法生產(chǎn)核苷第17頁/共20頁枯草芽孢桿菌嘌呤核苷酸合成途徑SAMPAMPIMPGMPXMP345678黃嘌呤缺陷型（II）鳥嘌呤缺陷型（經(jīng)誘變?nèi)笔?號酶）（III）鳥嘌呤缺陷型（經(jīng)誘變?nèi)笔?號酶）腺嘌呤缺陷型（經(jīng)誘變?nèi)笔?號或7號酶）AICARSAICARPRAPRPP21（一）（一）（一）（一）1：PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶2、7：SAMP裂解酶3：IMP脫氫酶4：XMP氨化酶5：GMP還原酶6：SAMP合成酶8：AMP脫氫酶當(dāng)培養(yǎng)基中提供限量腺嘌呤時Ⅰ積累IMP肌苷Ⅰ＋Ⅱ積累IMP肌苷Ⅲ積累XMP

黃苷

枯草桿菌的磷酸單酯酶活力很強(qiáng)