梅毒的實驗室診療梅毒的實驗室診療第1頁一、概述-梅毒病原體（一）、名詞由梅毒螺旋體感染引發(fā)一個慢性全身性性傳輸疾病是我國衛(wèi)生部要求8種重點防治性病之一《中華人民共和國傳染病防治法》要求乙類傳染病世界衛(wèi)生組織列為世界上最常見50種傳染病之一

梅毒螺旋體（Treponemapallidum，TP）是梅毒病原體，因其透明，不易著色，故又稱蒼白螺旋體

梅毒的實驗室診療第2頁（二）、生物學特征小而纖細螺旋狀微生物長5～20μm，粗細<0.2μm有6～12個規(guī)則螺旋基礎結構為一原生質圓柱體，為兩層膜所圍繞行動遲緩而有規(guī)律

-圍繞其長軸旋轉中前后移動

-伸縮其圈間之距離而移動

-全身彎曲如蛇行

梅毒的實驗室診療第3頁（三）、繁殖繁殖方式與其生活環(huán)境相關多年來電子顯微鏡觀察，在培養(yǎng)條件下或在體內適宜環(huán)境中為橫斷分裂，分裂時將軀干分裂成長短兩段分裂增代時間為30—33小時當條件不利時，以分芽子繁殖生活發(fā)育周期:顆粒期、球形體期及螺旋體期，與所致疾病周期、隱伏發(fā)作及慢性病程相關

梅毒的實驗室診療第4頁（四）、培養(yǎng)普通不能人工培養(yǎng)Nichols株（有毒株）能接種在家兔睪丸中或眼前房內繁殖，能保持毒力Reiter株能生長繁殖，已喪失致病力Nichols株和Reiter株已廣泛用作各種梅毒血清學診療抗原梅毒的實驗室診療第5頁(五）、生存條件厭氧寄生物，在人體內可長久生存，體外不易生存干燥、肥皂水及普通消毒劑如1：1000苯酚、新潔爾滅、稀酒精均可于短時間將其殺死在血液中4℃經3日可死亡，故在血庫冰箱冷藏3日以上血液就無傳染性溫度影響：41-42℃時可生活1-2小時，在48℃僅半小時即失去感染力，100℃馬上死亡。對嚴寒抵抗力大，在0℃時，可生活48小時，如將梅毒病損標本置于冰箱內，經1周仍可致病。在低溫（-78℃）保留數年，仍可保持其形態(tài)、活動及毒性在封存生理鹽水稀釋組織液中可生活10小時左右在潮濕器具或濕毛巾中，亦可生存數小時在干燥環(huán)境中可見快速死亡。梅毒的實驗室診療第6頁（六）、宿主梅毒螺旋體只感染人類人是梅毒唯一傳染源梅毒的實驗室診療第7頁（七）、毒力因子當前未證實含有內毒素或外毒素粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子

梅毒的實驗室診療第8頁（八）、致病性因為其表面有賴以生存莢膜樣粘多糖，因為粘多糖是宿主組織和血管支架主要基質成份，粘多糖被梅毒螺旋體分解后，組織受到損傷破壞，從而引發(fā)血管塌陷，血供受阻，造成管腔閉合性動脈內膜炎，動脈周圍炎及壞死，潰瘍等病變梅毒的實驗室診療第9頁（九）、抗原1．表面特異性抗原：刺激機體產生特異凝集抗體及密螺旋體制動或溶解抗體，后者加補體可溶解螺旋體2．螺旋體內類屬抗原：可產生補體結合抗體，與非病原性螺旋體有交叉反應3，螺旋體與宿主組織磷脂形成復合抗原：當螺旋體侵入組織后，組織中磷脂可粘附在螺旋體上，形成復合抗原，此種復合抗原可刺激機體產生抗磷脂本身免疫抗體，稱為反應素（Aegagin），可與牛心肌或其它正常動物心肌提取類脂質抗原起沉淀反應（康氏試驗）或補體結合反應（華氏試驗）梅毒的實驗室診療第10頁(十）、免疫以細胞免疫為主，體液免疫只有一定輔助防御作用當螺旋體從體內去除后可再感染，而且仍可出現一期梅毒癥狀此病周期性潛伏與再發(fā)原因可能與體內產生免疫力相關梅毒的實驗室診療第11頁二、檢測方法-病原體檢驗梅毒螺旋體檢驗是診療早期梅毒最正確方法。診療一期梅毒、二期梅毒時，可取患者滲出液或淋巴結穿刺術得到組織液，在暗視野顯微鏡下觀察螺旋體特征性形態(tài)和運動方式.病原學檢驗主要方法有暗視顯微鏡檢驗、鍍銀染色法和直接熒光法梅毒的實驗室診療第12頁暗視野顯微鏡檢驗、鍍銀染色和熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體等檢驗方法，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且含有快速、方便、易操作特點。暗視野顯微鏡檢驗已被世界衛(wèi)生組織指定為性病試驗室必備項目之一。螺旋體檢驗是診療早期現癥梅毒最正確方法，對于患者早期診療、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分主要意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒可能性，梅毒的實驗室診療第13頁梅毒的實驗室診療第14頁暗視野顯微鏡檢驗梅毒的實驗室診療第15頁鍍銀染色梅毒的實驗室診療第16頁

檢測方法-血清學檢測

依據檢測所用抗原不一樣，臨床血清試驗分為兩大類：1.非梅毒螺旋體抗原血清試驗2.梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒的實驗室診療第17頁

檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗性病研究試驗室試驗（VDRL）不加熱血清反應素試驗（USR）血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR、TRUST）梅毒的實驗室診療第18頁檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗全部非梅毒螺旋體血清試驗抗原基礎成份都一樣,其基礎成份是心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體結合形成復合物凝集成網狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法敏感性和特異性都基礎相同梅毒的實驗室診療第19頁檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗RPR試驗特點：在USR試劑成份基礎上加入黑色碳顆粒作為沉淀指示物用白色硬紙片替換玻片血清不需要滅活不需要顯微鏡觀察結果可作定量試驗有現成試劑盒攜帶方便操作簡單價格廉價試驗結果可長久保留

梅毒的實驗室診療第20頁檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗甲苯胺紅試驗(TRUST)特點：其原理和成份與RPR試驗相同用紅色甲苯胺紅替換了碳顆粒其余特點均與RPR相同梅毒的實驗室診療第21頁非梅毒螺旋體血清試驗原理示意圖梅毒的實驗室診療第22頁RPR結果梅毒的實驗室診療第23頁TRUST結果梅毒的實驗室診療第24頁檢測方法非梅毒螺旋體血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性很好。適合用于大量人群篩查。早期梅毒硬下疳出現1周-2周后，血清可呈陽性。經治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染指征。梅毒的實驗室診療第25頁檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗特點前帶現象

指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度抗體時出現弱陽性、不經典或陰性反應結果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現了陽性結果，該現象稱為前帶現象。梅毒的實驗室診療第26頁梅毒的實驗室診療第27頁梅毒的實驗室診療第28頁檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗

采取梅毒螺旋體作抗原，是特異性抗原體反應。梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TP-PA）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）、梅毒螺旋體抗體酶聯免疫試驗（ELSA-TP）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB-Test）梅毒的實驗室診療第29頁檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗

TPPATPPA試驗原理與TPHA試驗基礎相同。TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替換TPHA試驗中致敏羊紅細胞，此致敏顆粒與人血清中抗梅毒螺旋體抗體結合，產生可見凝集反應，含有較高敏感性。明膠粒子為洋紅色，在操作部步上也較為方便，出結果較快。檢測IgM或IgG抗體梅毒的實驗室診療第30頁檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗FTA-ABSFTA-ABS試驗是檢測梅毒“金標準”試驗。其原理是將有完整形態(tài)梅毒螺旋體作為抗原，加上經吸收劑（用Reiter螺旋體制備而成）吸收過梅毒患者血清形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（FTIC）標識抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結合，形成熒光抗原抗體復合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋果綠色熒光，即為陽性反應。梅毒的實驗室診療第31頁+SheepredcellT.pallidum+SensitisedcellSensitisedcellSpecificAntibodyHemagglutinationTPPA/TPHA梅毒的實驗室診療第32頁檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗梅毒螺旋體抗體酶聯免疫試驗（ELSA-TP抗原采取超聲破碎螺旋體抗原或重組抗原檢測IgM或IgG敏感性和特異性與其它試劑基礎一致應作深入評價梅毒的實驗室診療第33頁梅毒診療方法比較

RPR、TRUST、USR、VDRLTPHA、FTA-ABS間接EIA、雙抗原夾心EIA

牛心磷脂完整病原體純化抗原梅毒非特異性抗原梅毒特異性抗原梅毒特異性抗原特異性中特異性高特異性高敏感性低敏感性中敏感性高肉眼判讀結果肉眼判讀結果機器判讀結果自動化程度低自動化程度低自動化程度高單獨適用血液篩查單獨不適用血液篩查單獨適用血液篩查適用少批量樣本檢測適用少批量樣本檢測適用大批量樣本檢測價格低價格高價格中

注：反應素存在生物學真陽性反應、生物學假陽性反應、人工假陽性反應。梅毒的實驗室診療第34頁

梅毒各期血清學檢驗陽性率（%）試驗一期梅毒二期梅毒三期梅毒RPR8510075FTA-ABS8610097TPHA77100100

梅毒的實驗室診療第35頁

年梅毒試劑評定

參比試劑：1.美國BD企業(yè)生產“梅毒快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗診療試劑盒(RPR試劑盒)(批號：8095883)”

2.日本富士株式會社生產“梅毒螺旋體抗體診療試劑(凝集法)(TPPA試劑盒)(批號：VN80807)”

3.抗梅毒螺旋體抗體(IgG)檢測試劑盒(免疫印漬法)(16人份/盒)（批號：D081009A1）梅毒的實驗室診療第36頁非梅毒螺旋體抗原血清學檢測用試劑敏感性和特異性

試劑名稱生產廠家生產批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒快速血漿反應素環(huán)狀上?？迫A生物技術有限企業(yè)062097.293.4卡片試驗診療試劑盒(RPR)梅毒甲苯胺紅不加熱血清上海榮盛生物技術有限企業(yè)050195.495.1試驗診療試劑盒(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清蘭州生物制品研究所020192.296.2試驗診療試劑盒(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清英科新創(chuàng)(廈門)科技有限企業(yè)06760297.293.4試驗診療試劑(TRUST)梅毒甲苯胺紅不加熱血清鄭州安圖綠科生物工程有限企業(yè)050987.194.4試驗診療試劑盒(TRUST)梅毒的實驗室診療第37頁梅毒螺旋體血清學檢測用試劑(ELISA法)敏感性和特異性

試劑名稱生產廠家生產批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒螺旋體抗體診療試劑珠海麗珠試劑有限企業(yè)061899.699.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診療試劑英科新創(chuàng)(廈門)科技有限企業(yè)07750699.698.3(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診療試劑北京華大吉比愛生物技術有限企業(yè)091299.697.1(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診療試劑北京萬泰生物藥業(yè)有限N060699.299.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)梅毒螺旋體抗體診療試劑北京當代高達生物技術0600398.999.6(雙抗夾心法)(ELISA-TP)有限責任企業(yè)梅毒螺旋體抗體診療試劑北京金豪制藥股份有限企業(yè)0707698.998.3(雙抗夾心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診療試劑上?？迫A生物技術有限企業(yè)071497.793.8(雙抗夾心法)(ELISA-TP)

梅毒的實驗室診療第38頁梅毒螺旋體血清學檢測用試劑(快速)敏感性和特異性

試劑名稱生產廠家生產批號敏感性(%)特異性(%)

梅毒螺旋體抗體診療北京萬泰生物藥業(yè)有限企業(yè)0080398.196.3試紙盒(膠體金法)梅毒螺旋體抗體檢測英科新創(chuàng)(廈門)科技有限企業(yè)02712270295.893.8試紙條(膠體金)梅毒螺旋體抗體膠體韓國SD企業(yè)02503591.699.2金診療試劑梅毒螺旋體抗體膠體艾康生物技術(杭州)有限企業(yè)1021687.8100金診療試劑

梅毒的實驗室診療第39頁檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標本確實證試驗。梅毒患者經過抗梅治療后，ELSA、TPPA試驗仍可陽性，故TPPA試驗陽性不能作為療效觀察指標。ELSA、TPPA陽性不能區(qū)分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診療。梅毒的實驗室診療第40頁非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果解釋示意圖早期晚期一期二期早期潛伏晚期潛伏三期

治療前治療后

陽性陰性梅毒的實驗室診療第41頁梅毒螺旋體抗原血清學試驗結果解釋示意圖早期一期二期早期潛伏晚期晚期潛伏三期

治療前治療后陽性陰性梅毒的實驗室診療第42頁梅毒血清學試驗結果臨床意義總匯USRELISA意義RPRTPPAVDRLFTA-ABS__排除梅毒一期梅毒早期