維生素K3安全性評價(jià)維生素K的安全性評價(jià)第1頁化學(xué)藥品刺激性、過敏性和溶血性概述化學(xué)藥品制劑經(jīng)眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關(guān)節(jié)腔、皮膚、直腸、陰道、靜脈、動脈、肌肉、皮下、靜脈旁和鞘內(nèi)等非口服路徑給藥，對用藥局部產(chǎn)生毒性（如刺激性和過敏性等）和/或?qū)θ懋a(chǎn)生毒性（如過敏性和溶血性等）。它是臨床前安全性評價(jià)組成部分。藥品活性成份及其代謝物、輔料、相關(guān)物質(zhì)及理化性質(zhì)（如pH值、滲透壓等）都有可能引發(fā)刺激性和/或過敏性和/或溶血性發(fā)生，而嚴(yán)重毒性能夠影響用藥安全有效性，所以藥品在臨床應(yīng)用前應(yīng)研究其制劑在給藥部位使用后引發(fā)局部和/或全身毒性，以提醒臨床應(yīng)用時(shí)可能出現(xiàn)毒性反應(yīng)、毒性靶器官、安全范圍、臨床研究監(jiān)測指標(biāo)并為臨床解毒或解救辦法提供參考，保障臨床用藥安全有效。維生素K的安全性評價(jià)第2頁試驗(yàn)項(xiàng)目1.刺激性（皮膚刺激性試驗(yàn)；眼刺激性試驗(yàn)；注射給藥部位刺激性試驗(yàn)：血管刺激性試驗(yàn)、肌肉刺激性試驗(yàn)。）2.過敏性3.溶血性試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵照隨機(jī)、對照、重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)用藥品應(yīng)與用于人體制劑一致觀察部位應(yīng)選擇給藥部位，同時(shí)考慮選擇周圍組織或可能暴露于受試藥品部位。維生素K的安全性評價(jià)第3頁刺激性試驗(yàn)刺激性是指非口服藥品制劑給藥后對給藥部位產(chǎn)生可逆性炎癥改變，若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性組織損傷則稱為腐蝕性。【試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)】觀察動物局部接觸受試物后所產(chǎn)生刺激反應(yīng)，提醒藥品臨床應(yīng)用后給藥部位可能出現(xiàn)炎癥反應(yīng)、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。維生素K的安全性評價(jià)第4頁刺激性試驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)考慮問題⒈試驗(yàn)動物選擇依據(jù)觀察指標(biāo)和擬采取試驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦x擇試驗(yàn)動物，普通每個(gè)試驗(yàn)選擇一個(gè)動物進(jìn)行評價(jià)。⒉給藥頻率與期限給藥頻率和期限應(yīng)依據(jù)確定臨床應(yīng)用情況來決定。重復(fù)給藥試驗(yàn)，普通天天給藥一次，給藥期限最長不超出4周。偶然給藥受試物可用單次給藥方法進(jìn)行試驗(yàn)。⒊可逆性觀察為明確毒性反應(yīng)恢復(fù)情況，提議進(jìn)行停藥后恢復(fù)期觀察。局部毒性反應(yīng)可逆性評價(jià)應(yīng)包含局部及相關(guān)部位反應(yīng)。維生素K的安全性評價(jià)第5頁刺激性試驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)考慮問題⒋受試物受試物應(yīng)與用于人體制劑一致。⒌對照組以溶媒和/或賦形劑作為陰性對照。必要時(shí)采取陽性對照或已上市制劑。⒍劑量劑量設(shè)計(jì)主要應(yīng)該考慮受試物濃度和總劑量。普通采取與臨床制劑相同濃度，設(shè)一個(gè)劑量組，能夠經(jīng)過改變給藥頻率進(jìn)行劑量調(diào)整，但皮膚給藥刺激性研究經(jīng)過增加涂敷厚度或加大涂布面積來提升給藥劑量是不適當(dāng)。必要時(shí)應(yīng)該進(jìn)行不一樣濃度刺激性試驗(yàn)。維生素K的安全性評價(jià)第6頁刺激性試驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)考慮問題⒎給藥方式7.1給藥方案應(yīng)盡可能與臨床用藥方案一致。7.2給藥路徑和給藥部位應(yīng)與臨床用藥一致。7.3設(shè)計(jì)給藥容積，給藥速率和給藥頻率時(shí)，應(yīng)考慮所選取動物模型給藥部位解剖和生理特點(diǎn)。⒏只要相互之間不影響且全身耐受性許可，則可在同一動物身上進(jìn)行不一樣給藥路徑刺激性試驗(yàn)研究，并可在對側(cè)進(jìn)行對照試驗(yàn)。維生素K的安全性評價(jià)第7頁刺激性試驗(yàn)皮膚刺激性試驗(yàn)

皮膚刺激性是指動物經(jīng)皮膚給予受試物后在皮膚上產(chǎn)生可逆性炎癥改變，若產(chǎn)生了不可逆性組織損傷則為皮膚腐蝕性。

目標(biāo)觀察動物皮膚接觸受試物后所產(chǎn)生刺激反應(yīng)，提醒藥品臨床應(yīng)用后皮膚可能出現(xiàn)炎癥、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。

維生素K的安全性評價(jià)第8頁皮膚刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法試驗(yàn)動物：首選家兔，動物數(shù)4－8只，雌、雄各半。應(yīng)設(shè)賦形劑對照，采取同體左右側(cè)本身對比法。試驗(yàn)前24小時(shí)對給藥區(qū)（通常在背部）進(jìn)行脫毛處理（可剪、剃或用適宜脫毛劑）。去毛范圍左、右各3cm×3cm。給藥前應(yīng)檢驗(yàn)去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷皮膚不宜進(jìn)行試驗(yàn)。但若需考查破損皮膚刺激性，則可在用藥部位用砂紙磨或劃“井”字并以滲血為度。維生素K的安全性評價(jià)第9頁皮膚刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法受試物給予：取受試物0.5ml直接涂布于一側(cè)已去毛皮膚上，然后用二層紗布（2.5cm×2.5cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定；另一側(cè)涂布賦型劑做對照。貼敷時(shí)間最少4小時(shí)。貼敷結(jié)束后，除去受試物并用溫水或無刺激性溶劑清潔給藥部位。屢次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)應(yīng)連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時(shí)間相同，貼敷期限普通不超出4周。維生素K的安全性評價(jià)第10頁皮膚刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法動物觀察：在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應(yīng)。單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)，在去除藥品后30-60分鐘，24、48和72小時(shí)肉眼觀察并統(tǒng)計(jì)涂敷部位有沒有紅斑和水腫等情況。對出現(xiàn)中度及以上皮膚刺激性動物應(yīng)在觀察期結(jié)束時(shí)對給藥局部進(jìn)行病理組織學(xué)檢驗(yàn)。維生素K的安全性評價(jià)第11頁刺激性試驗(yàn)眼刺激性試驗(yàn)眼刺激性是指動物經(jīng)眼給予受試物后在眼前部表面產(chǎn)生可逆性組織改變，若產(chǎn)生了不可逆性組織損傷則為腐蝕性。

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目標(biāo)觀察動物經(jīng)眼給予受試物后所產(chǎn)生刺激性反應(yīng)，提醒藥品臨床應(yīng)用后眼可能出現(xiàn)炎癥、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。

維生素K的安全性評價(jià)第12頁眼刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法試驗(yàn)動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應(yīng)設(shè)置生理鹽水對照組，可采取同體左右側(cè)本身對比法。試驗(yàn)前24小時(shí)內(nèi)對每只動物雙眼進(jìn)行檢驗(yàn)（包含使用熒光素鈉檢驗(yàn)）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺點(diǎn)和結(jié)膜損傷動物不能用于試驗(yàn)。

維生素K的安全性評價(jià)第13頁眼刺激性試驗(yàn)給藥方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g受試物，然后輕合眼瞼約10s。普通不需沖洗眼睛。用藥周期應(yīng)依據(jù)藥品擬用于臨床情況來決定，屢次給藥普通不超出4周。

維生素K的安全性評價(jià)第14頁眼刺激性試驗(yàn)眼部觀察：單次給藥眼刺激試驗(yàn)，在給藥后1、24、48和72小時(shí)對眼部進(jìn)行檢驗(yàn)；屢次給藥眼刺激試驗(yàn)，天天給藥前以及最終一次給藥后1、24、48和72小時(shí)對眼部進(jìn)行檢驗(yàn)。假如在72小時(shí)未見任何刺激癥狀，試驗(yàn)則可結(jié)束。如存在持久性損傷，有必要延長觀察期限。但普通不超出21天。

維生素K的安全性評價(jià)第15頁溶血性試驗(yàn)溶血性是指藥品制劑引發(fā)血管外或血管內(nèi)溶血和紅細(xì)胞凝聚等反應(yīng)。溶血性反應(yīng)包含免疫性溶血與非免疫性溶血。免疫性溶血是藥品經(jīng)過免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗體而引發(fā)溶血，為Ⅱ型和Ⅲ型過敏反應(yīng)；非免疫性溶血包含藥品為誘發(fā)原因造成氧化性溶血和藥品制劑引發(fā)血液穩(wěn)態(tài)改變而出現(xiàn)溶血和紅細(xì)胞凝聚等。

維生素K的安全性評價(jià)第16頁注射給藥部位刺激性試驗(yàn)

注射給藥部位刺激性是指動物經(jīng)注射給予受試物后在注射部位產(chǎn)生可逆性組織改變，若產(chǎn)生了不可逆性組織損傷則為腐蝕性。目標(biāo)觀察動物注射受試物后所產(chǎn)生刺激性反應(yīng)，提醒藥品臨床應(yīng)用后注射部位可能出現(xiàn)炎癥、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。維生素K的安全性評價(jià)第17頁注射給藥部位刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法

1.試驗(yàn)動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應(yīng)設(shè)生理鹽水對照，可采取同體左右側(cè)本身對比法。用藥部位依據(jù)藥品給藥路徑確定，可選取耳緣靜脈，耳中心動脈（其它動物可選取前、后肢靜脈及股動脈等），股和背部肌肉，側(cè)胸壁皮下組織，靜脈旁組織等。2.給藥方法：按臨床使用情況給予受試物，給藥容積和速率應(yīng)依據(jù)動物情況進(jìn)行對應(yīng)調(diào)整。給藥期限應(yīng)依據(jù)藥品擬用于臨床情況來決定，屢次給藥普通不超出7天。維生素K的安全性評價(jià)第18頁注射給藥部位刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法3.動物觀察：單次給藥刺激性試驗(yàn)，在給藥后48-96小時(shí)對動物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察；屢次給藥刺激性試驗(yàn)，天天給藥前以及最終一次給藥后48-96小時(shí)對動物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察。觀察期結(jié)束時(shí)應(yīng)對部分動物進(jìn)行給藥部位組織病理學(xué)檢驗(yàn)。留下動物依據(jù)受試物特點(diǎn)和刺激性反應(yīng)情況，繼續(xù)觀察14－21天再進(jìn)行病理組織學(xué)檢驗(yàn)，以了解刺激性反應(yīng)可逆程度。4.結(jié)果評價(jià)：依據(jù)肉眼觀察和病理檢驗(yàn)結(jié)果，對受試物使用安全性進(jìn)行評價(jià)。

維生素K的安全性評價(jià)第19頁試驗(yàn)材料器材：注射器1ml5支。藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。動物：2.0～2.2kg家兔4只，雌雄各半。

家兔股四頭肌法

維生素K的安全性評價(jià)第20頁方法與步驟取家兔4只,每只家兔一側(cè)股四頭肌內(nèi)注射維生素K3注射液1ml，另一側(cè)注射同體積生理鹽水。注射后觀察注射部位肌肉有沒有充血、水腫等反應(yīng),注射后48h后用空氣栓塞法處死動物，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉刺激反應(yīng)，按肌肉刺激反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算對應(yīng)反應(yīng)級，并進(jìn)行局部組織病理學(xué)檢驗(yàn)，提供病理照片。維生素K的安全性評價(jià)第21頁試驗(yàn)結(jié)果與討論維生素K的安全性評價(jià)第22頁試驗(yàn)結(jié)果與討論【結(jié)果與討論】依據(jù)肉眼觀察和組織病理學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。維生素K的安全性評價(jià)第23頁試驗(yàn)材料器材：注射器1ml5支。藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。動物：2.0～2.2kg家兔4只，雌雄各半。

家兔耳殼法

是注射劑刺激性初試一個(gè)方法。因家兔耳殼較薄，將藥品注射于耳殼皮下后，其刺激性反應(yīng)易于在透光檢驗(yàn)中發(fā)覺，而不需處死動物，試驗(yàn)成本相對較低。維生素K的安全性評價(jià)第24頁方法與步驟取家兔4只，每只家兔一側(cè)耳緣靜脈內(nèi)注射維生素K3注射液1ml，另一側(cè)注射同體積生理鹽水。注射48～96h后觀察注射部位肌肉有沒有充血、水腫等反應(yīng),觀察結(jié)束后用空氣栓塞法處死動物，進(jìn)行給藥部位組織病理學(xué)檢驗(yàn)，并提供病理照片。【結(jié)果與討論】依據(jù)肉眼觀察和組織病理學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。維生素K的安全性評價(jià)第25頁溶血性試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)考查藥品是否能夠引發(fā)血管外或血管內(nèi)溶血和紅細(xì)胞凝聚等反應(yīng)。凡是注射劑和可能引發(fā)免疫性溶血或非免疫性溶血反應(yīng)其它藥品制劑均應(yīng)進(jìn)行溶血性試驗(yàn)。維生素K的安全性評價(jià)第26頁溶血性試驗(yàn)溶血性試驗(yàn)方法1、常規(guī)體外試管法(肉眼觀察法)1.1血細(xì)胞懸液配制

取兔血(或羊血)數(shù)毫升,放入含玻璃珠三角燒瓶中振搖10分鐘,或用玻璃棒攪動血液,除去纖維蛋白原,使成脫纖血液.加入0.9%氯化鈉溶液約10倍量,搖勻,1000-1500r/min離心15分鐘,除去上清液,沉淀紅細(xì)胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌2-3次,至上清液不顯紅色為止.將所得紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%混懸液,供試驗(yàn)用.維生素K的安全性評價(jià)第27頁溶血性試驗(yàn)溶血性試驗(yàn)方法1、常規(guī)體外試管法(肉眼觀察法)1.2受試物制備

除另有要求外,臨床用于非血管內(nèi)路徑給藥注射劑,以各藥品使用說明書要求臨床使用濃度,用0.9%氯化鈉溶液1∶3稀釋后作為供試品溶液;用于血管內(nèi)給藥注射劑以使用說明書要求臨床使用濃度作為供試品溶液。維生素K的安全性評價(jià)第28頁溶血性試驗(yàn)溶血性試驗(yàn)方法1、常規(guī)體外試管法(肉眼觀察法)1.3試驗(yàn)方法

取潔凈試管7只,進(jìn)行編號,1-5號管為供試品管,6號管為陰性對照管,7號管為陽性對照管.按下表所表示依次加入2%紅細(xì)胞懸液、0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水,混勻后,馬上置37℃±0.5℃恒溫箱中進(jìn)行溫育,開始每隔15分鐘觀察1次,1小時(shí)后,每隔1小時(shí)觀察1次,普通觀察3小時(shí).

按以下次序加入各種溶液

維生素K的安全性評價(jià)第29頁溶血性試驗(yàn)結(jié)果觀察

若試驗(yàn)中溶液呈澄明紅色,管底無細(xì)胞殘留或有少許紅細(xì)胞殘留,表明有溶血發(fā)生;如紅細(xì)胞全部下沉,上清液體無色澄明,表明無溶血發(fā)生.若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀,振搖后不分散,表明有紅細(xì)胞凝聚發(fā)生.如有紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象,可按下法深入判定是真凝聚還是假凝聚.若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散,或?qū)⒛畚锓旁谳d玻片上,在蓋玻片邊緣滴加2滴0.9%氯化鈉溶液,置顯微鏡下觀察,凝聚紅細(xì)胞能被沖散者為假凝聚,若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚.維生素K的安全性評價(jià)第30頁溶血性試驗(yàn)維生素K的安全性評價(jià)第31頁溶血性試驗(yàn)結(jié)果觀察

分光光度法：肉眼觀察結(jié)束后，將各管溶液置入離心機(jī)1500rpm離心15min，取上清液，在紫外可見分光光度計(jì)545nm波優(yōu)點(diǎn)，以蒸餾水為空白，測試各管吸光度值。用下式計(jì)算各試驗(yàn)管溶血率（%）。溶血率（%）=（ODt-ODnc）/（ODpc-ODnc）×100%式中：ODt：試驗(yàn)管吸光度ODnc：陰性對照管吸光度ODpc：陽性對照管吸光度觀察指標(biāo)及時(shí)間：觀察加入2%兔紅細(xì)胞懸浮液15min，30min，45min和1h，2h，3h后溶血或凝聚情況；紫外