核酸的生物合成第九章核酸的生物合成

一、知識要點

在細胞分裂過程中通過DNA的復制把遺傳信息由親代傳遞給子代，在子代的個體發(fā)育過程中遺傳信息由DNA傳遞到RNA，最后翻譯成特異的蛋白質；在RNA病毒中RNA具有自我復制的能力，并同時作為mRNA，指導病毒蛋白質的生物合成；在致癌RNA病毒中，RNA還以逆轉錄的方式將遺傳信息傳遞給DNA分子。這種遺傳信息的流向稱為中心法則。復制是指以原來DNA分子為模板，合成出相同DNA分子的過程；轉錄是在DNA（或RNA）分子上合成出與其核苷酸順序相對應的RNA（或DNA）的過程；翻譯是在以rRNA和蛋白質組成的核糖核蛋白體上，以mRNA為模板，根據(jù)每三個相鄰核苷酸決定一種氨基酸的三聯(lián)體密碼規(guī)則，由tRNA運送氨基酸，合成出具有特定氨基酸順序的蛋白質肽鏈的過程。（一）DNA的生物合成在DNA復制時，親代DNA的雙螺旋先行解旋和分開，然后以每條鏈為模板，按照堿基配對原則，在這兩條鏈上各形成一條互補鏈，這樣從親代DNA的分子可以精確地復制成2個子代DNA分子。每個子代DNA分子中，有一條鏈是從親代DNA來的，另一條則是新形成的，這叫做半保留復制。通過14N和15N標記大腸桿菌實驗證實了半保留復制。1．復制的起始點與方向DNA分子復制時，在親代分子一個特定區(qū)域內雙鏈打開，隨之以兩股鏈為模板復制生成兩個子代DNA雙鏈分子。開始時復制起始點呈現(xiàn)一叉形（或Y形），稱之為復制叉。DNA復制要從DNA分子的特定部位開始，此特定部位稱為復制起始點（originofreplication），可以用ori表示。在原核生物中復制起始點常位于染色體的一個特定部位，即只有一個起始點。真核生物的染色體是在幾個特定部位上進行DNA復制的，有幾個復制起始點的。酵母基因組與真核生物基因組相同，具有多個復制起始點。復制的方向可以有三種不同的機制。其一是從兩個起始點開始，各以相反的單一方向生長出一條新鏈，形成兩個復制叉。其二是從一個起始點開始，以同一方向生長出兩條鏈，形成一個復制叉。其三是從一個起始點開始，沿兩個相反的方向各生長出兩條鏈，形成兩個復制叉。2．DNA聚合反應有關的酶及相關蛋白因子DNA的合成是以四種三磷酸脫氧核糖核苷為底物的聚合反應，該過程除了需要酶的催化之外，還需要適量的DNA為模板，RNA（或DNA）為引物和鎂離子的參與。催化這個反應的酶也有多種：DNA聚合酶、RNA引物合成酶（即引發(fā)酶）、DNA連接酶、拓撲異構酶、解螺旋酶及多種蛋白質因子參與。3．DNA的復制過程DNA的復制按一定的規(guī)律進行，雙螺旋的DNA是邊解開邊合成新鏈的。復制從特定位點開始，可以單向或雙向進行，但是以雙向復制為主。由于DNA雙鏈的合成延伸均為5′→3′的方向，因此復制是以半不連續(xù)的方式進行，即其中一條鏈相對地連續(xù)合成，稱之為領頭鏈，另一條鏈的合成是不連續(xù)的，稱為隨后鏈。在DNA復制叉上進行的基本活動包括雙鏈的解開；RNA引物的合成；DNA鏈的延長；切除RNA引物，填補缺口，連接相鄰的DNA片段。（二）逆向轉錄核酸的生物合成全文共8頁，當前為第1頁。在逆轉錄酶作用下，以RNA為模板，按照RNA中的核苷酸順序合成DNA，這與通常轉錄過程中遺傳信息流從DNA到RNA的方向相反，故稱為逆向轉錄。逆轉錄酶需要以RNA（或DNA）為模板，以四種dNTP為原料，要求短鏈RNA（或DNA）作為引物，此外還需要適當濃度的二價陽離子Mg2+和Mn2+，沿5′→3′方向合成DNA，形成RNA-DNA雜交分子（或DNA雙鏈分子）。逆轉錄酶是一種多功能酶，它除了具有以RNA為模板的DNA聚合酶和以DNA為模板的DNA聚合酶活性外還兼有RNaseH、DNA內切酶、DNA拓撲異構酶、DNA解鏈酶和tRNA結合的活性。核酸的生物合成全文共8頁，當前為第1頁。幾乎所有真核生物的mRNA分子的3′末端都有一段多聚腺苷酸。當加入寡聚dT作引物時，mRNA就可以成為逆轉錄酶的模板，在體外合成與其互補的DNA，稱為cDNA。（三）DNA突變DNA突變是指DNA的堿基順序發(fā)生突然而永久性地變化，從而影響DNA的復制，并使DNA的轉錄和翻譯也跟著改變，表現(xiàn)出異常的遺傳特征。DNA的突變可以有幾種形式：（1）一個或幾個堿基對被置換；（2）插入一個或幾個堿基對；（3）一個或多個堿基對缺失。置換和插入的變化是可逆的，缺失則是不可逆的。最常見的突變形式是堿基對的置換。嘌呤堿之間或嘧啶堿之間的置換稱為轉換，嘌呤和嘧啶之間的置換稱為顛換。突變有自發(fā)突變和誘發(fā)突變。在DNA的合成中，自發(fā)突變的機率很低，大約每109個堿基對發(fā)生一次突變；各種RNA腫瘤病毒具有很高的自發(fā)突變頻率。誘發(fā)突變可以由物理因素或化學因素引起，物理因素如電離輻射和紫外光等均可以誘發(fā)突變?；瘜W因素的誘變，如脫氨劑和烷化試劑均可誘發(fā)突變。亞硝酸為強脫氨劑，可使腺嘌呤轉變?yōu)榇吸S嘌呤，鳥嘌呤轉變?yōu)辄S嘌呤，胞嘧啶轉變?yōu)槟蜞奏?，而導致堿基配對錯誤。烷化劑如硫酸二甲酯（DMS）可使鳥嘌呤的N7位氮原子甲基化，使之成為帶一個正電荷的季銨基團，減弱N9位上的N-糖苷鍵，至使脫氧核糖苷鍵不穩(wěn)定，發(fā)生水解而丟失嘌呤堿，以后可被其它堿基取代，或引起DNA的鏈斷裂。（四）DNA損傷與修復某些物理化學因子，如紫外線、電離輻射和化學誘變劑等，都能引起生物突變和致死。因為它們均能作用于DNA，造成其結構和功能的破壞。但細胞內具有一系列起修復作用的酶系統(tǒng)，可以除去DNA上的損傷，恢復DNA的正常雙螺旋結構。目前已經(jīng)知道有四種修復系統(tǒng)：光復活，切除修復，重組修復和誘導修復。后三種機制不需要光照，因此又稱為暗修復。1．光復活光復活的機制是可見光（最有效波長為400nm左右）激活了光復活酶，它能分解由于紫外線照射而形成的嘧啶二聚體。光復活作用是一種高度專一的修復方式。2．切除修復又稱為復制前修復。所謂切除修復，即是在一系列酶的作用下，將DNA分子中受損傷部分切除掉，并以完整的那一條鏈為模板，合成出切去的部分，然后使DNA恢復正常結構的過程。這是比較普遍的一種修復機制，它對多種損傷均能起修復作用。參與切除修復的酶主要有：特異的核酸內切酶、外切酶、聚合酶和連接酶。3．重組修復遺傳信息有缺損的子代DNA分子可通過遺傳重組而加以彌補，即從完整的母鏈上將相應核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的序列來補上母鏈的空缺。此過程稱為重組修復，因為發(fā)生在復制之后，又稱為復制后修復。參與重組修復的酶系統(tǒng)包括與重組有關的主要酶類以及修復合成的酶類。重組基因recA編碼的蛋白質，具有交換DNA鏈的活力。recA蛋白被認為在DNA重組和重組修復中均起著關鍵的作用。recB和recC基因分別編碼核酸外切酶V的兩個亞基，該酶亦為重組和重組修復所必需。修復合成時需要DNA聚合酶和連接酶。4．誘導修復許多能造成DNA損傷或抑制復制的處理均能引起一系列復雜的誘導效應，稱為應急反應（SOSresponse）。SOS反應包括誘導出現(xiàn)的DNA損傷修復效應、誘變效應、細胞分裂的抑制以及溶原性細菌釋放噬菌體等等。（五）RNA的生物合成核酸的生物合成全文共8頁，當前為第2頁。以DNA的一條鏈為模板在RNA聚合酶催化下，以四種核糖核苷磷酸為底物按照堿基配對原則，形成3′→5′磷酸二酯鍵，合成一條與DNA鏈的一定區(qū)段互補的RNA鏈的過程稱為轉錄。RNA的轉錄起始于DNA模板的一個特定位點，并在另一位點處終止。在生物體內，DNA的二條鏈中僅有一條鏈可作為轉錄的模板，這稱為轉錄的不對稱性。用作模板的鏈稱為反義鏈，另一條鏈稱為有義鏈，因為有義鏈的脫氧核苷酸序列正好與轉錄出的RNA的核苷酸序列相同（只是T與U的區(qū)別），所以也稱編碼鏈。但各個基因的有義鏈不一定位于同一條DNA鏈。RNA的合成沿5′→3′方向進行（DNA模板鏈方向為3′→5′），5′未端為核糖核苷三磷酸，即5′位保留PPP。核酸的生物合成全文共8頁，當前為第2頁。在真核生物細胞里，轉錄是在細胞核內進行的。合成的RNA包括mRNA、rRNA和tRNA的前體。rRNA的合成發(fā)生在核仁內，而合成mRNA和tRNA的酶則定位在核質中。另外葉綠體和線粒體也進行轉錄。原核細胞中轉錄酶類存在于細胞液中。1．RNA聚合酶原核細胞大腸桿菌的RNA聚合酶研究的較深入。這個酶的全酶由5種亞基（α2ββ′δω）組成，還含有2個Zn原子。在RNA合成起始之后，δ因子便與全酶分離。不含δ因子的酶仍有催化活性，稱為核心酶。δ亞基具有與啟動子結合的功能，β亞基催化效率很低，而且可以利用別的DNA的任何部位作模板合成RNA。加入δ因子后，則具有了選擇起始部位的作用，δ因子可能與核心酶結合，改變其構象，從而使它能特異地識別DNA模板鏈上的起始信號。真核細胞的細胞核內有RNA聚合酶I、II和III，通常由4～6種亞基組成，并含有Zn2+。RNA聚合酶I存在于核仁中，主要催化rRNA前體的轉錄。RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ存在于核質中，分別催化mRNA前體和小分子量RNA的轉錄。此外線粒體和葉綠體也含有RNA聚合酶，其特性類似原核細胞的RNA聚合酶。2．RNA的轉錄過程RNA轉錄過程為起始位點的識別、起始、延伸、終止。起始位點的識別：RNA聚合酶先與DNA模板上的特殊啟動子部位結合，σ因子起著識別DNA分子上的起始信號的作用。在σ亞基作用下幫助全酶迅速找到啟動子，并與之結合生成較松弛的封閉型啟動子復合物。這時酶與DNA外部結合，識別部位大約在啟動子的-35位點處。接著是DNA構象改變活化，得到開放型的啟動子復合物，此時酶與啟動子緊密結合，在-10位點處解開DNA雙鏈，識別其中的模板鏈。由于該部位富含A-T堿基對，故有利于DNA解鏈。開放型復合物一旦形成，DNA就繼續(xù)解鏈，酶移動到起始位點。3．起始：在起始位點的全酶結合第一個核苷三磷酸。第一個核苷三磷酸常是GTP或ATP。形成的啟動子、全酶和核苷三磷酸復合物稱為三元起始復合物，第一個核苷酸摻入的位置稱為轉錄起始點。這時σ亞基被釋放脫離核心酶。4．延伸：從起始到延伸的轉變過程，包括σ因子由締合向解離的轉變。DNA分子和酶分子發(fā)生構象的變化，核心酶與DNA的結合松弛，核心酶可沿模板移動，并按模板序列選擇下一個核苷酸，將核苷三磷酸加到生長的RNA鏈的3′-OH端，催化形成磷酸二酯鍵。轉錄延伸方向是沿DNA模板鏈的3′→5′方向按堿基酸對原則生成5′→3′的RNA產(chǎn)物。RNA鏈延伸時，RNA聚合酶繼續(xù)解開一段DNA雙鏈，長度約17個堿基對，使模板鏈暴露出來。新合成的RNA鏈與模板形成RNA-DNA的雜交區(qū)，當新生的RNA鏈離開模板DNA后，兩條DNA鏈則重新形成雙股螺旋結構。4．終止在DNA分子上有終止轉錄的特殊堿基順序稱為終止子（terminators），它具有使RNA聚合酶停止合成RNA和釋放RNA鏈的作用。這些終止信號有的能被RNA聚合酶自身識別，而有的則需要有ρ因子的幫助。ρ因子是一個四聚體蛋白質，它能與RNA聚合酶結合但不是酶的組分。它的作用是阻RNA聚合酶向前移動，于是轉錄終止，并釋放出已轉錄完成的RNA鏈。對于不依賴于ρ因子的終止子序列的分析，發(fā)現(xiàn)有兩個明顯的特征：即在DNA上有一個15～20個核苷酸的二重對稱區(qū)，位于RNA鏈結束之前，形成富含G-C的發(fā)夾結構。接著有一串大約6個A的堿基序列它們轉錄的RNA鏈的末端為一連串的U。寡聚U可能提供信號使RNA聚合酶脫離模板。在真核細胞內，RNA的合成要比原核細胞中的復雜得多。（六）轉錄后加工在轉錄中新合成的RNA往往是較大的前體分子，需要經(jīng)過進一步的加工修飾，才轉變?yōu)榫哂猩飳W活性的、成熟的RNA分子，這一過程稱為轉錄后加工。主要包括剪接、剪切和化學修飾。核酸的生物合成全文共8頁，當前為第3頁。1．mRNA的加工在原核生物中轉錄翻譯相隨進行，多基因的mRNA生成后，絕大部分直接作為模板去翻譯各個基因所編碼的蛋白質，不再需要加工。但真核生物里轉錄和翻譯的時間和空間都不相同，mRNA的合成是在細胞核內，而蛋白質的翻譯是在胞質中進行，而且許多真核生物的基因是不連續(xù)的。不連續(xù)基因中的插入序列，稱為內含子；被內含子隔開的基因序列稱為外顯子。一個基因的外顯子和內含子都轉錄在一條很大的原初轉錄本RNA分子中,故稱為核內不均一RNA（hnRNA）。它們首先降解為分子較小的RNA，再經(jīng)其它修飾轉化為mRNA。真核細胞mRNA的加工包括：（1）hnRNA被剪接，除去由內含子轉錄來的序列，將外顯子的轉錄序列連接起來。（2）在3′末端連接上一段約有20～200個腺苷酸的多聚腺苷酸（polyA）的“尾巴”結構。不同mRNA的長度有很大差異。（3）在5′末端連接上一個“帽子”結構m7GpppmNP。（4）在內部少數(shù)腺苷酸的腺嘌呤6位氨基發(fā)生甲基化（m6A）.核酸的生物合成全文共8頁，當前為第3頁。2．tRNA的加工原核生物的tRNA基因的轉錄單元大多數(shù)是多基因的。不但相同或不同的tRNA的幾個基因可轉錄在一條RNA中，有的tRNA還與rRNA組成轉錄單元，因此tRNA前體的加工過程包括剪切、剪接，在3′-末端添加CCAOH、以及核苷酸修飾轉化為成熟的tRNA。tRNA中含有許多稀有堿基，所有這些堿基均是在轉錄后由四種常見堿基經(jīng)修飾酶催化，發(fā)生脫氨、甲基化、羥基化等化學修飾而生成的。3．rRNA的加工原核細胞首先生成的是30S前體rRNA，經(jīng)核糖核酸酶作用，逐步裂解為16S、23S和5S的rRNA，其裂解過程可歸納如下： 17.5S→16SrRNA 30S 25S→23SrRNA 小碎片→5SrRNA原核生物16SrRNA和23SrRNA含有較多的甲基化修飾成分，特別是2-甲基核糖。一般5SrRNA中無修飾成分。在真核細胞中rRNA的轉錄后加工與原核細胞類似，但更為復雜。rRNA在核仁中合成，生成一個更大35～45S前體rRNA。前體分裂而轉變?yōu)?8S、18S和5.8S的rRNA分子。真核生物5SrRNA前體是由獨立于上述三種rRNA之外的基因轉錄的。真核生物rRNA中與含有較多的甲基化成分。有關RNA剪接、剪切機制的研究不僅發(fā)現(xiàn)了RNA分子本身具有催化功能，這種具有剪接功能的RNA催化劑命名為核酶。目前已發(fā)現(xiàn)的具有催化功能的RNA有磷酸二酯酶（核糖核酸酶）、磷酸單酯酶、核苷酸轉移酶、磷酸轉移酶、RNA限制性內切酶、tRNA5′端成熟酶、α-1,4-葡聚糖分支酶和肽基轉移酶等。目前研究表明核酶催化rRNA、tRNA、mRNA的剪接機理是不相同的。RNA內含子有四種類型，即Ⅰ型自我拼接內含子、Ⅱ型自我拼接內含子、核mRNA內含子和核tRNA內含子。（七）RNA的復制大多數(shù)生物的遺傳信息貯藏的DNA中，遺傳信息按中心法則由DNA轉錄成RNA，再由RNA翻譯成蛋白質的。對RNA病毒的研究表明，某些RNA病毒是以RNA作模板復制出病毒RNA分子。Qβ噬菌體RNA的復制可分為兩個階段：（1）當Qβ噬菌體侵染大腸桿菌細胞后，其單鏈RNA充當mRNA，利用宿主細胞中的核糖體合成噬菌體外殼蛋白質和復制酶β亞基；（2）當復制酶的β亞基和宿主細胞原有的α、γ、δ亞基自動裝配成RNA復制酶以后，就進行RNA復制。以侵染的噬菌體RNA作模板，通過RNA復制酶合成互補的RNA鏈。常把具有mRNA功能的鏈稱為正鏈，與它互補的鏈稱為負鏈。在噬菌體特異的復制酶裝配好后不久酶就吸附到正鏈RNA的3′末端，以它為模板合成出負鏈，至合成結束，然后負鏈從正鏈模板上釋放出來。同一個酶又吸附到負鏈RNA的3′末端，合成出病毒正鏈RNA，正鏈RNA與外殼蛋白裝配成噬菌體顆粒，所以正鏈和負鏈的合成方向都是由5′→3′。（八）基因工程的操作技術1．目的基因體外操作DNA的主要步驟之一是提取載體DNA和所需要的外源目的基因。在細胞中DNA并非以游離態(tài)分子存在，而是和RNA及蛋白質結合在一起形成復合體。DNA純化的基本步驟是：（1）從破壞的細胞壁和膜里釋放出可溶性的DNA；（2）通過變性或蛋白質分解，使DNA和蛋白質的復合體解離；（3）將DNA從其它大分子中分離出來；（4）DNA濃度和純度的光學測定。核酸的生物合成全文共8頁，當前為第4頁。2．載體核酸的生物合成全文共8頁，當前為第4頁。外源DNA片段（目的基因）要進入受體細胞，必須有一個適當?shù)倪\載工具將帶入細胞內，并載著外源DNA一起進行復制與表達，這種運載工具稱為載體。載體必須具備下列條件：（1）在受體細胞中，載體可以獨立地進行復制。所以載體本身必須是一個復制單位，稱復制子（replicon），具有復制起點。而且插入外源DNA后不會影響載體本身復制的能力。（2）易于鑒定、篩選。也就是說，容易將帶有外源DNA的重組體與不帶外源DNA的載體區(qū)別開來。（3）易于引入受體細胞。常用的載體主要有以下幾類：細菌和酵母的質粒，λ噬菌體和M13以及病毒。 3．連接外源DNA與載體DNA之間可以通過多種方式相連接，主要有以下幾種(1)粘性末端連接；(2)平頭末端連接；(3)接頭連接等。 4．轉化任何外源DNA重組到載體上，然后轉入受體細胞中復制繁殖，這一過程稱為DNA的克隆。外源DNA進入受體細胞并使它獲得新遺傳特性的過程稱為轉化。轉化作用是將外源DNA引入細胞的過程。 5．篩選由于細胞轉化的頻率較低，所以從大量的宿主細胞中篩選出帶有重組體的細胞并不是很容易的，當前，在實驗室中，常用的篩選手段有以下幾種：(1)插入失活；(2)菌落原位雜交；(3)免疫學方法．此外，對重組體轉化的鑒定還可以采用表現(xiàn)型的鑒定；對重組質粒純化并重新轉化；限制性酶切圖譜的繪制；重組質粒上的基因定位等更深入的方法。

二、習題

（一）名詞解釋1．半保留復制（semiconservativereplication）2．不對稱轉錄（asymmetrictrancription）3．逆轉錄（reversetranscription）4．岡崎片段（Okazakifragment）5．復制叉（replicationfork）6．領頭鏈（leadingstrand）7．隨后鏈（laggingstrand）8．有意義鏈（sensestrand）9．光復活（photoreactivation）10．重組修復（recombinationrepair）11．內含子（intron）12．外顯子（exon）13．基因載體（genonicvector）14．質粒（plasmid）

（二）填空題1．DNA復制是定點雙向進行的，股的合成是，并且合成方向和復制叉移動方向相同；股的合成是的，合成方向與復制叉移動的方向相反。每個岡崎片段是借助于連在它的末端上的一小段而合成的；所有岡崎片段鏈的增長都是按方向進行。2．DNA連接酶催化的連接反應需要能量，大腸桿菌由供能，動物細胞由供能。3．大腸桿菌RNA聚合酶全酶由組成；核心酶的組成是。參與識別起始信號的是因子。4．基因有兩條鏈，作為模板指導轉錄的那條鏈稱鏈。5．以RNA為模板合成DNA稱，由酶催化。6．DNA或UpGpCpA分別經(jīng)0.3NKOHR、NaseT1和牛胰RNaseI處理所得結果：DNA:0.3NKOH：；RNaseT1：；RNaseI：;核酸的生物合成全文共8頁，當前為第5頁。UpGpCpA：0.3NKOH：；RNaseT1：；RNaseI：。核酸的生物合成全文共8頁，當前為第5頁。7．基因突變形式分為：，，和四類。8．亞硝酸是一個非常有效的誘變劑，因為它可直接作用于DNA，使堿基中基氧化成基，造成堿基對的。9．所有岡崎片段的延伸都是按方向進行的。10．前導鏈的合成是的，其合成方向與復制叉移動方向；隨后鏈的合成是的，其合成方向與復制叉移動方向。11．引物酶與轉錄中的RNA聚合酶之間的差別在于它對不敏感，并可以作為底物。12．DNA聚合酶I的催化功能有、、、和。13．DNA回旋酶又叫，它的功能是。14．細菌的環(huán)狀DNA通常在一個開始復制，而真核生物染色體中的線形DNA可以在起始復制。15．大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ的活性使之具有功能，極大地提高了DNA復制的保真度。16．大腸桿菌中已發(fā)現(xiàn)種DNA聚合酶，其中負責DNA復制，負責DNA損傷修復。17．DNA切除修復需要的酶有、、和。18．在DNA復制中，可防止單鏈模板重新締合和核酸酶的攻擊。19．DNA合成時，先由引物酶合成，再由在其3端合成DNA鏈，然后由切除引物并填補空隙，最后由連接成完整的鏈。20．原核細胞中各種RNA是催化生成的，而真核細胞核基因的轉錄分別由種RNA聚合酶催化，其中rRNA基因由轉錄，hnRNA基因由轉錄，各類小分子量RAN則是的產(chǎn)物。21．一個轉錄單位一般應包括序列、序列和順序。22．真核細胞中編碼蛋白質的基因多為。編碼的序列還保留在成熟mRNA中的是，編碼的序列在前體分子轉錄后加工中被切除的是。在基因中被分隔，而在成熟的mRNA序列被拼接起來。23．染色質中的蛋白和蛋白對轉錄均有調節(jié)作用，其中的調節(jié)作用具有組織特異性。

（三）選擇題1．DNA按半保留方式復制。如果一個完全放射標記的雙鏈DNA分子，放在不含有放射標記物的溶液中，進行兩輪復制，所產(chǎn)生的四個DNA分子的放射活性將會怎樣：A．半數(shù)分子沒有放射性B．所有分子均有放射性C．半數(shù)分子的兩條鏈均有放射性D．一個分子的兩條鏈均有放射性E．四個分子均無放射性2．參加DNA復制的酶類包括：（1）DNA聚合酶Ⅲ；（2）解鏈酶；（3）DNA聚合酶Ⅰ；（4）RNA聚合酶（引物酶）；（5）DNA連接酶。其作用順序是：A．（4）、（3）、（1）、（2）、（5）B．（2）、（3）、（4）、（1）、（5）C．（4）、（2）、（1）、（5）、（3）D．（4）、（2）、（1）、（3）、（5）E．（2）、（4）、（1）、（3）、（5）3．如果15N標記的大腸桿菌轉入14N培養(yǎng)基中生長了三代，其各種狀況的DNA分子比例應是下列哪一項：純15N15N－14N純14N－DNA雜種DNA－DNAA．1/81/86/8B．1/807/8C．01/87/8D．02/86/8E．04/84/8核酸的生物合成全文共8頁，當前為第6頁。4．下列關于DNA復制特點的敘述哪一項錯誤的：核酸的生物合成全文共8頁，當前為第6頁。A．RNA與DNA鏈共價相連B．新生DNA鏈沿5→3方向合成C．DNA鏈的合成是不連續(xù)的D．復制總是定點雙向進行的E．DNA在一條母鏈上沿5→3方向合成，而在另一條母鏈上則沿3→5方向合成5．DNA復制時，5—TpApGpAp－3序列產(chǎn)生的互補結構是下列哪一種：A．5—TpCpTpAp－3B．5—ApTpCpTp－3C．5—UpCpUpAp－3D．5—GpCpGpAp－3E．3—TpCpTpAp－56．下列關于DNA聚合酶I的敘述哪一項是正確的：A．它起DNA修復酶的作用但不參加DNA復制過程B．它催化dNTP聚合時需要模板和引物C．在DNA復制時把岡崎片段連接成完整的隨從鏈D．它催化產(chǎn)生的岡崎片段與RNA引物鏈相連E．有些細菌突變體其正常生長不需要它7．下列關于真核細胞DNA聚合酶活性的敘述哪一項是正確的：A．它僅有一種B它不具有核酸酶活性C．它的底物是二磷酸脫氧核苷D它不需要引物E．它按3-5方向合成新生鏈8．從正在進行DNA復制的細胞分離出的短鏈核酸——岡崎片段，具有下列哪項特性：A．它們是雙鏈的B．它們是一組短的單鏈DNA片段C．它們是DNA—RNA雜化雙鏈D．它們被核酸酶活性切除E．它們產(chǎn)生于親代DNA鏈的糖-磷酸骨架的缺口處9．切除修復可以糾正下列哪一項引起的DNA損傷：A．堿基缺失B．堿基插入C．堿基甲基化D．胸腺嘧啶二聚體形成E．堿基烷基化10．大腸桿菌DNA連接酶需要下列哪一種輔助因子？A．FAD作為電子受體B．NADP+作為磷酸供體C．NAD+形成活性腺苷酰酶D．NAD+作為電子受體E．以上都不是11．下列關于RNA和DNA聚合酶的敘述哪一項是正確的：A．RNA聚合酶用二磷酸核苷合成多核苷酸鏈B．RNA聚合酶需要引物，并在延長鏈的5端加接堿基C．DNA聚合酶可在鏈的兩端加接核苷酸D．DNA僅能以RNA為模板合成DNAE．3端加接核苷