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轉(zhuǎn)導(dǎo)

組別:葫蘆小金剛組員:彭杰,覃鵬,李曉雯,王淼淼,鞏喜軍,周立,易晴天轉(zhuǎn)導(dǎo)的概念轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction):由噬菌體將一個(gè)細(xì)胞的基因傳遞給另一細(xì)胞的過程。它是細(xì)菌之間傳遞遺傳物質(zhì)的方式之一。其具體含義是指一個(gè)細(xì)胞的DNA或RNA通過病毒載體的感染轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞中。類別普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo):能傳遞供體細(xì)菌染色體上的任何基因的傳導(dǎo)。局限性轉(zhuǎn)導(dǎo):只能傳遞染色體上原噬菌體特定位點(diǎn)附近少數(shù)基因的傳導(dǎo)。實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)導(dǎo)的基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化一樣,不需要細(xì)胞間的直接接觸。溶源性(lysogeny):λ噬菌體在大腸桿菌體內(nèi)可以呈環(huán)形分子存在于細(xì)胞質(zhì)中,也可通過整合酶的作用而整合到寄主染色體上成為原噬菌體狀態(tài),并與寄主染色體一起復(fù)制并能維持許多代,這種現(xiàn)象稱為λ噬菌體的溶源性。溶源性是一種相當(dāng)穩(wěn)定的遺傳性狀。凡能使細(xì)菌溶源化的噬菌體都稱為溫和噬菌體,以不活動(dòng)的狀態(tài)存在于細(xì)菌細(xì)胞中的溫和噬菌體稱為原噬菌體。原噬菌體在一定條件下可以進(jìn)入營養(yǎng)生長狀態(tài)而復(fù)制繁殖,并最終導(dǎo)致細(xì)胞裂解而釋放出噬菌體。普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)增殖階段轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒的形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子的形成噬菌體侵染供體細(xì)菌的感染階段噬菌體的形成是借助于細(xì)菌細(xì)胞的代謝機(jī)構(gòu),由噬菌體本身的核酸物質(zhì)操縱的。成熟階段轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒:把細(xì)菌染色體片段包裝在噬菌體蛋白質(zhì)外殼內(nèi)而產(chǎn)生的假噬菌體,其中并不包含噬菌體的遺傳物質(zhì)。

根據(jù)噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)的供體細(xì)胞DNA是否整合到受體細(xì)胞染色體上,分為流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)和完全轉(zhuǎn)導(dǎo)。流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)的DNA不整合到受體細(xì)胞的染色體上,雖然不能繼續(xù)復(fù)制,

但仍然表達(dá)基因功能的轉(zhuǎn)導(dǎo)稱為流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)。--酶分子§轉(zhuǎn)導(dǎo)DNAO細(xì)菌染

色體雖無轉(zhuǎn)導(dǎo)基因,但因?yàn)閺哪讣?xì)胞中獲得了一定量的基因產(chǎn)物可維持細(xì)胞分裂幾次只有一個(gè)子細(xì)胞具有轉(zhuǎn)導(dǎo)基因完全轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)的DNA整合到受體細(xì)胞染色體上,并能產(chǎn)生穩(wěn)定的轉(zhuǎn)導(dǎo)子的轉(zhuǎn)導(dǎo)稱為完全轉(zhuǎn)導(dǎo)。在同一次轉(zhuǎn)導(dǎo)中,流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞往往多于完全轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞。轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒有時(shí)可以將染色體上距離十分接近的幾個(gè)基因同時(shí)轉(zhuǎn)導(dǎo)到受體細(xì)胞。這種現(xiàn)象稱為共傳導(dǎo)。如果進(jìn)入受體的外源DNA被受體細(xì)胞降解,則導(dǎo)致轉(zhuǎn)導(dǎo)失敗,在選擇平板上無菌落形成。局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)局限性傳導(dǎo):把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中,并與后者基因組整合,重組,形成局限轉(zhuǎn)導(dǎo)子的現(xiàn)象。根據(jù)轉(zhuǎn)導(dǎo)子出現(xiàn)頻率的高低可分為低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)(LFT)和高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)(HFT)不正常脫離轉(zhuǎn)導(dǎo)育種將供體細(xì)菌在LB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)期加入噬菌體液混合后于37℃靜置20min。平板涂布(需設(shè)對照組)取布滿噬菌斑而變得透明的平板,刮下軟瓊脂離心(4000r~10000r/min)。加入1~2滴氯仿殺死活菌體,離心取上清液轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體液將受體菌培養(yǎng)到對數(shù)期加入轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體液,噬菌體液與菌液比為(0.2~0.4:1)于37℃靜置20min使受體菌感染。4000~10000r/min離心15min收集菌體懸浮于適量緩沖液中,涂布選擇培養(yǎng)基平板根據(jù)選擇標(biāo)記挑選轉(zhuǎn)導(dǎo)子轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的制備轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)化,接合區(qū)別轉(zhuǎn)化是細(xì)菌吸收外源DNA片段.轉(zhuǎn)導(dǎo)是以噬菌體為載體來傳遞DNA接合則是兩個(gè)細(xì)菌之間通過性菌毛直接交換DNA.應(yīng)用應(yīng)用轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)菌的遺傳學(xué)研究中的一種常用研究手段。它可以用來在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移基因,進(jìn)行互補(bǔ)測驗(yàn),進(jìn)行基因定位,特別是通過共轉(zhuǎn)導(dǎo)方法進(jìn)行基因的精細(xì)結(jié)構(gòu)分析。在遺傳工程中可以把所要克隆的基因通過

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