氟西汀對抑郁模型大鼠海馬區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA表達(dá)的影響2009年07月09日作者：張曉斌，張志珺，謝春明,隋玉秀，孫奕，奚廣軍作者單位：東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江蘇南京210009目的：探討抗抑郁藥氟西汀對抑郁模型大鼠海馬區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）mRNA表達(dá)的影響。實驗動物：年c （SD）雄性大鼠由東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，體重200?250g。2、方法1.2.1動物分組及模型建立適應(yīng)性飼養(yǎng)大鼠1周，自由攝食進(jìn)水，自然晝夜節(jié)律光照，通風(fēng)良好，（21±2）°C恒溫。期間訓(xùn)練飲用蔗糖水，測定蔗糖水消耗和曠野試驗基線值。選擇評分相近大鼠24只，隨機分為對照組、對照加藥組、抑郁組及抑郁加藥組4組。抑郁組、抑郁加藥組均單籠飼養(yǎng)，每籠1只，對照組、對照加藥組每籠4只。參照文獻(xiàn)［4］的方法，以慢性不可預(yù)見性的輕度刺激結(jié)合孤養(yǎng)法制備抑郁模型，按隨機方法在21d內(nèi)給予抑郁組、抑郁加藥組8種應(yīng)激因子，包括：禁食20h，禁水20h，夾尾1min，4C冰水游泳5min，電擊足底（電壓為50V，每次持續(xù)5s），束縛應(yīng)激2h，潮濕墊料、鼠籠傾斜17h，光照（兩只40W的臺燈，照射17^。每日給予1種刺激，每種刺激累計使用2?3次，順序隨機，使動物不能預(yù)料刺激的發(fā)生。對照加藥組、抑郁加藥組大鼠在實驗開始時接受氟西?。?mg?kg-1?d-1）腹腔注射21d，對照組、抑郁組予腹腔注射蒸餾水21d。1.2.2曠野試驗曠野裝置由不透明的材料制成，底面為75cmx75cm的正方形，被等分為25個等邊方格，周圍為50cm高的墻壁。按照參考文獻(xiàn)［4］，共進(jìn)行2次，分別于應(yīng)激前、應(yīng)激第21天進(jìn)行。將大鼠置于中心方格內(nèi)，觀察大鼠在5min內(nèi)穿越格數(shù)（四爪均進(jìn)入的方格方可記數(shù)，為水平運動得分）及后肢直立次數(shù)（兩前爪騰空或攀附墻壁，為垂直運動得分）。1.2.3蔗糖水消耗試驗蔗糖水消耗試驗可用來檢測動物對獎賞的反應(yīng)性。分別于應(yīng)激前、應(yīng)激第21天進(jìn)行。在進(jìn)行蔗糖水試驗時，大鼠單籠喂養(yǎng)，在安靜的房間內(nèi)，禁食禁水10h后進(jìn)行蔗糖水試驗，同時予每只大鼠事先定量好的兩瓶水（1瓶1%蔗糖水，1瓶純水）。30min后調(diào)換蔗糖水和純水的位置，60min后取走兩瓶并稱量。按糖水消耗量/總液體消耗量x100%計算大鼠糖水消耗比例。1.2.4GDNFmRNA表達(dá)水平檢測在應(yīng)激后第21天處死動物，醫(yī)用解剖鏡分離、取出大鼠海馬，將組織破碎后，用Triziol法提取總RNA，然后用逆轉(zhuǎn)錄酶將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。構(gòu)建聚合酶體系（上游引物? ~，下游引物，PrimerPremier5.0設(shè)計），Taq酶催化。熱循環(huán)：I—fff—fIII—III/\IfII—f—If—/\ ' ■

95°C預(yù)熱5min；然后94°C20s,58°C20s,72°C30s,共40個循環(huán)。各樣品目的基因和管家基因分別進(jìn)行SYBR熒光實時定量PCR反應(yīng)，檢測GDNFmRNA表達(dá)水平，結(jié)果表示為由梯度稀釋DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品目的基因校正后的相對含量（目的基因與內(nèi)參比值）士標(biāo)準(zhǔn)差。2結(jié)果結(jié)果：應(yīng)激21d后，抑郁組和抑郁加藥組海馬區(qū)的GDNFmRNA表達(dá)水平顯著高于對照組和對照加藥組（PV0.05和PV0.01）。結(jié)論：應(yīng)激可能通過機體的反饋調(diào)節(jié)作用引起大鼠海馬區(qū)GDNFmRNA的表達(dá)增高，氟西汀對大鼠海馬區(qū)GDNFmRNA的表達(dá)無明顯影響。3討論全球有抑郁癥患者1.2?2.0億，我國有超過2600萬人患有抑郁癥。抑郁癥引起的精神殘疾給患者、家庭和社會帶來了沉重的負(fù)擔(dān)，而在其支配下的自傷、自殺、擴大性自殺等暴力行為更是危害巨大。過去對抑郁癥的發(fā)病機制進(jìn)行了大量的研究，但關(guān)于該病的確切生化基礎(chǔ)還知之甚少，難以完全解釋抗抑郁療效的延遲現(xiàn)象。目前認(rèn)為，慢性、低水平、長期的應(yīng)激源是促進(jìn)抑郁發(fā)生、加重病情的主要原因，其應(yīng)激因子的多變性和不可預(yù)見性，能較真實地模擬抑郁病人的某些癥狀和病因。慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁模型已成為探討抑郁癥的發(fā)病機制及抗抑郁劑作用機理而廣泛應(yīng)用的動物模型。本實驗采用慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)法建立大鼠抑郁模型，實驗結(jié)果顯示，與對照組大鼠相比，抑郁模型組大鼠的水平運動得分、垂直運動得分、糖水消耗量均明顯減少。水平運動得分反映了動物的活動度，垂直運動得分反映了動物對新鮮環(huán)境的好奇程度，糖水消耗量則是評價快感缺乏的有效客觀指標(biāo)。這些表現(xiàn)說明動物表現(xiàn)出抑郁狀態(tài)、興趣喪失和快感缺乏，與抑郁癥的核心癥狀如心境低落、興趣缺乏以及樂