流式細(xì)胞術(shù)在周期與凋亡中的應(yīng)用第一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一目錄010203工作原理周期應(yīng)用凋亡應(yīng)用04案例分析第二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一Publishedjournal

（scipapers>1000)第三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一第四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一概念流式細(xì)胞儀是對細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量，并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把指定的細(xì)胞亞群從中分選出來

第五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一儀器基本組成流動(dòng)室和液流系統(tǒng)流動(dòng)室 鞘液SHEATH激光源和光學(xué)系統(tǒng)光源濾片光電管和檢測系統(tǒng)光電倍增管PMT計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)

計(jì)算機(jī)第六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一液流系統(tǒng)

InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid流動(dòng)室第七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一光路圖Air-cooledArgonIonLaserBeamShapingLensesHighSensitivityQuartzFlowCellForwardScatterDetectorSideScatterDetector525BPFL1(FITC)575BPFL2(PE)620BP

FL3(ECD)675BPFL4(PC5)488DL488BK550DL600DL645DL流動(dòng)室第八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一激光配置488nm氬離子激光器633nm氦氖激光器大功率紫外激光器第九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一光路-濾片特性

長通濾片–

允許長于設(shè)定波長的光通過短通濾片–允許短于設(shè)定波長的光通過帶通濾片–允許一定帶寬的波長通過630nmBandPassFilterWhiteLightSource第十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一光信號(hào)收集光信號(hào)分離，導(dǎo)向，各探測通道PMT接收并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。二色鏡

123帶通濾波片光電倍增管激光束細(xì)胞收集透鏡前向散射光側(cè)向散射光，熒光第十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一數(shù)據(jù)處理FSCSSC

FL1FL2FL3脈沖處理，模數(shù)轉(zhuǎn)換光信號(hào)電信號(hào)記錄數(shù)據(jù)，顯示結(jié)果（面積，峰高，寬度）第十二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一顆粒度細(xì)胞大小參數(shù)非熒光信號(hào)第十三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一FL1–FITC,GFP…(PMT2)FL2–PE(PMT3)FL3–ECD,PI…(PMT4)FL4–PC5,APC…(PMT5)熒光信號(hào)第十四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一激光器第十五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一周期應(yīng)用第十六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一第十七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一單參數(shù)直方圖第十八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一DNA細(xì)胞周期分析細(xì)胞周期G2MG0G1s

200

400

600

8001000G0G1sG2MDNA分析DNA含量細(xì)胞數(shù)量2N4N

第十九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一產(chǎn)品列表第二十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一研究領(lǐng)域第二十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一分析軟件Modfit:/products/mflt/Flowjo:/v764/en/cellcycle.htmlFCSEXPRESS:/site/multicycleplugin.shtml第二十二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一凋亡研究在G0/G1峰前出現(xiàn)一個(gè)亞二倍體峰，即凋亡峰。檢測調(diào)亡，可進(jìn)行抗腫瘤藥物研究和某些因素對細(xì)胞的損傷機(jī)理的研究。第二十三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一第二十四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一細(xì)胞凋亡第二十五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一凋亡檢測-每一步都有檢測試劑盒第二十六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一細(xì)胞膜變化的檢測磷脂酰絲氨酸（PS）的檢測—早期凋亡第二十七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一早期凋亡PS檢測及結(jié)果判斷早期凋亡特征磷脂膜（PS）外翻，但是細(xì)胞膜保持完整性，因此PI染色為陰性DNA沒有發(fā)生斷裂

結(jié)果判定早期凋亡：AnnexinV+/PI-死亡或者晚期凋亡：AnnexinV+/PI+正常的活細(xì)胞：AnnexinV-/PI-第二十八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一線粒體水平檢測相關(guān)產(chǎn)品線粒體膜電位的檢測原理：熒光染料JC-1在活細(xì)胞中以聚體形式存在于線粒體基質(zhì)上產(chǎn)生紅色熒光，在凋亡細(xì)胞中，以單體形式存在不與線粒體結(jié)合而產(chǎn)生綠色熒光。操作簡單，試劑直接加入細(xì)胞中，20分鐘后檢測第二十九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一JC-1檢測結(jié)果流式圖AntifibroticeffectsofZK14,anovelnitricoxide-donatingbiphenyldicarboxylatederivative,onratHSC-T6cellsandCCl4-inducedhepaticfibrosisLi

Dai,Hui

Ji,Xiang-wen

KongandYi-hua

Zhang第三十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一DNA水平的凋亡檢測-晚期檢測凋亡晚期DNA內(nèi)切酶活性被激活升高，雙鏈DNA在核小體之間切斷形成~185bp為基數(shù)的有序片段檢測方法Tunel流式法，通過在核酸片段末端標(biāo)記，跟傳統(tǒng)相比優(yōu)點(diǎn)在于可以計(jì)算凋亡百分比DNALadder分析，但凋亡細(xì)胞太少時(shí)作不到第三十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一TUNEL簡介通過DNA末端轉(zhuǎn)移酶將帶標(biāo)記的dNTP（多為dUTP）接到DNA片段的3’-OH端，再通過熒光檢測定量分析結(jié)果。TUNEL（Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPn