觀察標(biāo)本的處理第一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五分散法：即用化學(xué)的或物理的方法，將觀察標(biāo)本分離成單個細胞或薄片，或者將整個觀察標(biāo)本進行整體封藏。優(yōu)點—仍能保持每個小單位的完整。缺點—彼此間相互的關(guān)系（除整體封藏外）就不一定看得清楚了。第二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五第一節(jié)整體及局部特征制片第二節(jié)掃描電鏡觀察標(biāo)本簡介第三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五

第一節(jié)整體及局部特征制片

一、昆蟲整體封片二、昆蟲軟組織制片技術(shù)第四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五一、昆蟲整體封片（一）昆蟲胚卵整體封片（二）昆蟲局部器官的整封片第五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（一）昆蟲胚卵整體封片

固定、解剖：將布安氏液(苦味酸、冰醋酸和甲醛以一定比例配制）固定好的卵粒放入蠟盤，注入70%酒精，在實體鏡下用尖嘴無齒攝及解剖針?biāo)洪_卵殼，取出完整的卵胚，放入裝有70%酒精的小瓶中。染色：用吸管吸去70%酒精，加數(shù)滴硼砂洋紅浸沒標(biāo)本，染色5-10分鐘。脫水、透明：用70%酒精洗滌2-3次，再經(jīng)80%、90%、100%酒精逐級脫水30分鐘。然后用二甲苯透明2小時。第六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（一）昆蟲胚卵整體封片封片：載玻片上滴上粘稠的樹脂，把已透明好的胚胎放在樹脂內(nèi)，擺好位置。做好的整封片水平放置在30℃恒溫箱中，3一4周后，待樹脂充分凝固即可裝盒。第七頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（二）昆蟲局部器官的整封片（氣門）固定：在實體鏡下，取昆蟲氣門一對，投入70%酒精內(nèi)固定1小時。染色：用吸管吸去固定液，滴入硼砂洋紅染色5分鐘，吸去染色液后，用70%酒精洗滌幾次。脫水、透明及封片：經(jīng)80%、90%、95%酒精逐級脫水15分鐘，用100%酒精脫水兩次，每次10分鐘，用100%酒精和二甲苯等量混合液處理30分鐘，轉(zhuǎn)入二甲苯液中透明30分鐘至1小時即可用中性樹膠封藏。

第八頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五二、昆蟲軟組織制片技術(shù)

（一）涂抹制片

（二）壓碎制片

（三）離散制片第九頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（一）涂抹制片（血液涂片）

取血液：用左手持住經(jīng)乙醚麻醉的蟲體，右手持昆蟲針刺破幼蟲的腹足基部，迅速將傷口流出的血液滴在洗凈的載玻片上。涂片：左手持血液載玻片，右手持另一個載玻片，以其一端邊緣置于血液的左側(cè)。右手將玻片稍向后拉，血液立即充滿在兩玻片的斜角中，再以30-40度斜角向左均勻推過去，即涂成血液薄膜玻片。固定、染色及封片：涂片稍稍晾干，滴甲醇數(shù)滴以覆蓋血膜，固定3分鐘。用吸水紙吸去甲醇液，滴上數(shù)滴10%吉姆薩染液，染色10一30分鐘或更長。染色后用磷酸緩沖液分色，至著色清晰為度，然后晾干涂片即可封藏。

第十頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（二）壓碎制片

-----雙翅目幼蟲唾液腺的染色體的制片取出唾液腺：挑出三齡老熟幼蟲放入生理鹽水中。左手持尖嘴無齒鑷，捏住幼蟲尾部約1/3處，右手持解剖針用平穩(wěn)的力量向右移動，將幼蟲的頭節(jié)拉開可見唾液腺。解離：將唾液腺放入鹽酸溶液中處理5一8分鐘，使腺體細胞分離，然后用吸水紙吸去鹽酸溶液。然后用蒸餾水滴洗2-3次。染色：用石炭酸品紅染液，染色15-20分鐘，即可在低倍顯微鏡下觀察核內(nèi)染色體被染成紫紅色，細胞質(zhì)為淺紅色。第十一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（二）壓碎制片4。染色體釋放：將蓋玻片壓蓋于腺體上，隨即用解剖針輕輕按壓蓋玻片，染色體便成串地從破裂處分散到腺體周圍。再以拇指對著蓋玻片垂直地壓一下，既吸去多余的染液，又使染色體的形態(tài)及位置固定下來。鏡檢：取出載玻片與蓋玻片分別在低倍鏡下檢查。脫水、透明及封片：將載玻片和蓋玻片分別經(jīng)95%、100%和100%三個灑精皿中停留1-2分鐘，然后再分別經(jīng)兩個二甲苯皿中透明5分鐘，即可用中性樹膠封藏。第十二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（三）離散制片（肌肉制片）

解剖蜜蜂，取出肌肉用FAA固定液(甲醇5ml，冰醋酸5ml和70%酒精90ml配合而成)固定24小時。然后經(jīng)50%、30%酒精和蒸餾水各1-2小時，并多次用蒸餾水洗滌。用馬克凱郎氏液(硝酸10ml,甘油20ml和蒸餾水20ml配成)浸泡2天。經(jīng)多次蒸餾水洗滌，將組織塊置于載玻片上，蓋上蓋玻片，輕壓并稍轉(zhuǎn)動使組織塊分散。將分散后的極小組織塊加入Orth鋰卡紅（碳酸鋰飽和水溶液100ml和洋紅3-5g,煮沸l(wèi)5分鐘,冷卻后過濾配成）染色20分鐘。然后吸去染液，70%酒精洗滌幾次，再用蒸餾水洗滌數(shù)次。第十三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五（三）離散制片將組織塊放入蒸餾水中，用注射器抽吸沖擊使之分散成單個細胞，取上部的懸浮液（內(nèi)含單一肌纖維）迅速倒入另一瓶中。懸浮液自然沉淀后，吸去上清液，經(jīng)15%、30%、50%、70%、80%、95%、100%各級酒精脫水5-6小時，然后放入冬青油和100%酒精的等量混合液中經(jīng)24小時，再用純冬青油透明。用吸管吸出單個肌纖維滴入蒸發(fā)皿中，加入適量的中性樹膠，攪拌均勻后，滴一滴在載玻片，蓋上蓋玻片封片即成。第十四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五第二節(jié)掃描電鏡觀察標(biāo)本簡介

掃描電鏡（SEM）是利用高能微束電子針（電子流）轟擊樣品表面，使之發(fā)出多種信號,再收集其中某種或某些信號加以處理放大而成像的。第十五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五觀察標(biāo)本制備的一般程序：

取樣—→清洗—→固定—→洗凈—→脫水(逐級進行)—→干燥—→噴鍍（導(dǎo)電處理）?，F(xiàn)以昆蟲表面形態(tài)特征的觀察標(biāo)本制備為例說明其制備過程。第十六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期五昆蟲表面形態(tài)特征標(biāo)本制備操作步驟：取昆蟲材料以0.01mol磷酸緩沖液洗凈，如被覆有蠟質(zhì)或粉末，則以二甲苯去除蠟或粉末以求盡量顯示其表面形態(tài)特征；固定，用10%的戊二醛予以固定1小時；洗凈，以0.1mol磷酸緩沖液漂洗2-3次；再將樣品放入1%鋨酸固定液中固定2小時左右，再洗凈，磷酸緩沖濃反復(fù)漂