第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程選修3第二章細(xì)胞工程本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分主要內(nèi)容動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)

動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)

動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體制備

4123動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)手段包括本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)學(xué)習(xí)目標(biāo)：1、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程、條件及應(yīng)用2、對(duì)比說(shuō)出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的請(qǐng)自主完成導(dǎo)學(xué)案課前預(yù)習(xí)部分本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)1．概念：（1）材料：取自動(dòng)物

或

動(dòng)物的器官或組織。（2）場(chǎng)所：在

模擬動(dòng)物

。（3）目的：使動(dòng)物細(xì)胞或組織繼續(xù)

、

并維持原有的

和

。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)2．過(guò)程：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：

取動(dòng)物組織塊剪碎，用

處理，形成分散的

，此稱細(xì)胞懸液，然后接種到

中培養(yǎng)，待細(xì)胞分裂形成一層細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。（2）動(dòng)物組織培養(yǎng)：

剪取動(dòng)物組織塊，用

沖洗，將組織塊移入

，使組織塊

在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，稱貼壁培養(yǎng)。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)3．培養(yǎng)的條件：（1）環(huán)境條件：包括

、

、

和

等。①溫度：哺乳動(dòng)物多以

℃為宜；②PH值：多數(shù)細(xì)胞生存的最適pH為

；

③氣體：細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有

和

，

是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的

；

④營(yíng)養(yǎng)成分：有

等。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)（2）培養(yǎng)基：

①天然培養(yǎng)基：取自

、

和

等；其特點(diǎn)是

、

。

②合成培養(yǎng)基：人工配制，仍需加入

；其特點(diǎn)是成分

、便于實(shí)驗(yàn)條件的控制。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)4．培養(yǎng)類型：（1）原代培養(yǎng)：

①概念：從機(jī)體取出組織或細(xì)胞的

，一般培養(yǎng)10代左右；

②特點(diǎn)：細(xì)胞的

未發(fā)生很大改變；

③應(yīng)用：藥物測(cè)試、

等試驗(yàn)。（2）傳代培養(yǎng)：由于

的限制和

的消耗，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖減緩，需要將原代細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞

，轉(zhuǎn)移到

中繼續(xù)培養(yǎng)，一般可繼續(xù)培養(yǎng)

代左右。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)5．技術(shù)的應(yīng)用：用于

、

和

等領(lǐng)域。補(bǔ)充概念：細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官（取材）細(xì)胞懸液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液（分解細(xì)胞間的蛋白）原代培養(yǎng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶剪碎過(guò)程：細(xì)胞株細(xì)胞系動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量蛋白質(zhì)遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)補(bǔ)充概念：細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶中，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫做接觸抑制。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分細(xì)胞貼壁過(guò)程那么什么是接觸抑制？本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)探究》》1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，為什么選擇胚胎期或幼齡動(dòng)物的器官和組織？

2、為什么要用胰蛋白酶對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理？胃蛋白酶不行嗎？3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)相同嗎？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基狀態(tài)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆1．克?。褐高z傳上完全相同的

、

或來(lái)自同一祖先的生物個(gè)體的

。2．動(dòng)物體細(xì)胞克?。簩⒐w體細(xì)胞的

與受體去核卵細(xì)胞的

進(jìn)行人工組合，借助于卵細(xì)胞的發(fā)育能力，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)發(fā)育成

進(jìn)而形成新個(gè)體的技術(shù)，其關(guān)鍵是

技術(shù)，利用的是動(dòng)物細(xì)胞核的

性。3．細(xì)胞核移植：利用

技術(shù)等將某種動(dòng)物細(xì)胞的

移入同種或者異種動(dòng)物的

的技術(shù)。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆4．大致過(guò)程如下：（動(dòng)物克?。┍疚臋n共33頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植融合后的卵細(xì)胞本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆5．克隆技術(shù)應(yīng)用：

在克服動(dòng)物

雜交繁殖障礙、創(chuàng)造

等方面具有重要意義和潛在經(jīng)濟(jì)價(jià)值；在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域，人的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)分化形成相應(yīng)的組織、器官，可用于組織器官的

（治療性克?。?；此外，還能利用克隆技術(shù)保護(hù)和挽救

。

但是目前克隆技術(shù)并不成熟，仍存在某些問(wèn)題，有待進(jìn)一步完善。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆討論》》1、動(dòng)物核移植技術(shù)選擇的受體細(xì)胞為什么是卵細(xì)胞？2、你認(rèn)為用體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？3、閱讀課本56頁(yè)積極思維，從社會(huì)倫理道德方面思考生殖性克隆會(huì)引發(fā)哪些社會(huì)問(wèn)題？4、分析圖2-12的技術(shù)路線，找出生殖性克隆與治療性克隆的區(qū)別，以及應(yīng)該阻斷哪一步來(lái)阻止生殖性克??？5、討論克隆技術(shù)的應(yīng)用和前景。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體（一）動(dòng)物細(xì)胞融合1．概念：是指

或

結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。2．誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：

物理法：

、

常見的誘導(dǎo)因素有化學(xué)法：

、

生物法：

等。3．應(yīng)用：制造

。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體（二）單克隆抗體1．制備過(guò)程：（1）能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是：

；

能夠無(wú)線增殖的細(xì)胞：

；（2）利用

融合，檢驗(yàn)和篩選雜交細(xì)胞。（3）

該雜交細(xì)胞，并篩選能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是：。（4）在

或者

中培養(yǎng)雜交細(xì)胞，獲取單克隆抗體。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：

________、_________、_________。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體2．單克隆抗體的應(yīng)用：

單克隆抗體具有_______、_______、_______、_______和

優(yōu)點(diǎn)，主要用于治療疾病和運(yùn)載藥物，如治療_______、________等。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。診斷試劑——最廣泛應(yīng)用本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體探究》》1、比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合（完成表格）細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交

、

去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng)、聚乙二醇克服遠(yuǎn)源雜交不親和，獲得

。動(dòng)物細(xì)胞融合用

使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，還有

。獲得

細(xì)胞、制備

。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體2、制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞？在融合的過(guò)程中你可以找出幾種類型的細(xì)胞？3、制備單克隆抗體的過(guò)程有兩次篩選，兩次篩選的目的是什么？本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。本文檔共33頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期三\2點(diǎn)31分三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體小結(jié)以下內(nèi)容（制備單克隆抗體原理）利用______產(chǎn)生特異性抗體的功能。利用______無(wú)限增殖的特