Y染色體微缺失是嚴(yán)重少精子或無(wú)精子癥的重要原因，是導(dǎo)致男性不育的第二大遺傳因素，其發(fā)生率僅次于Klinefelter綜合克氏綜合。從1999年開(kāi)始，歐洲男科學(xué)協(xié)會(huì)和歐洲分子遺傳實(shí)驗(yàn)質(zhì)控(EAA/EMQN為提高診斷質(zhì)量，出版了Y染色體微缺失分子診斷指南，并提供了客觀的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。最新版的實(shí)驗(yàn)室指南是2013年9月EA/MQN根據(jù)2在1999和2004的礎(chǔ)修而成。指重闡：少精癥無(wú)子男中現(xiàn)的Y染色體缺區(qū)，主要是無(wú)精子因子(azoospermiafactor，AZF)區(qū)域僅包含AZFa、AZFb、AZFbc、AZFc和AZFabc區(qū)，獨(dú)立的AZFd區(qū)并不存在；AZFc區(qū)中g(shù)r/gr缺失是影響精子生成的一個(gè)危險(xiǎn)因素，但臨床意義尚存爭(zhēng)議，不作為常規(guī)檢查指標(biāo)；檢測(cè)位點(diǎn)增加并不能提高檢測(cè)靈敏度，反而可能使結(jié)果復(fù)雜化；基于兩管多重PCR的檢測(cè)方法仍適用于整個(gè)AZF缺失檢測(cè)。EAA/EMQN12年國(guó)際量估劃(EQA計(jì)劃)實(shí)表明參實(shí)室過(guò)范實(shí)驗(yàn)操作，改善報(bào)告質(zhì)量，可有效降低診斷錯(cuò)誤率。Y染色體微缺失在中國(guó)不育男性中的發(fā)生頻率為，處于較高水平，我們建議將AZF檢測(cè)作為男性嚴(yán)重少精子或無(wú)精子癥的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，呼吁國(guó)內(nèi)AZF檢測(cè)驗(yàn)加入EQA計(jì)劃善國(guó)Y染色微缺 失 檢 測(cè) 實(shí) 驗(yàn) 操 作 規(guī) 范 。Y染色微失檢在已展，內(nèi)對(duì)AZF缺失模式、檢測(cè)序列標(biāo)簽位點(diǎn)(sequencetaggedsite,STS的數(shù)量、檢測(cè)方法和內(nèi)部質(zhì)量控制等臨床問(wèn)題未達(dá)成共識(shí)。各實(shí)驗(yàn)室的診斷操作方法有很大不同，導(dǎo)致不準(zhǔn)確或錯(cuò)誤診斷時(shí)有發(fā)生，迫切需要建立Y染色體微缺失診斷標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)EAA/EMQN更的2013版指南對(duì)以上問(wèn)題都給出了明確的專家共識(shí)，對(duì)我國(guó)建立自己的檢測(cè)指南有重要的指導(dǎo)意義。一Y染色體微缺失發(fā)生頻率Y染色體微缺失在健康人群中發(fā)生率約為1/4000，但在不男性中著升高微缺失發(fā)生頻率為2%～10%甚至更高。2013版出Y染國(guó)中發(fā)生頻率為%，處于較高水平。2006年朱曉斌等[1]針對(duì)中國(guó)不育男性染色體研究表明AZF微缺失在非梗阻性無(wú)精子癥患者中的發(fā)生率，嚴(yán)重少精子癥患者中發(fā)生率為，與國(guó)內(nèi)外其他學(xué)者的研究基本一致。隨著微缺失分子機(jī)制的闡明和Y染色體男性特異區(qū)域的結(jié)構(gòu)(MSY)測(cè)序完成，結(jié)合十多年臨床數(shù)據(jù)分析EAA專家總結(jié)沿用Repping等[2]對(duì)Y染色體微缺失區(qū)域的義模式，分為：AZFa區(qū)缺失、AZFb區(qū)缺失、AZFbc區(qū)缺失和AZFc區(qū)缺失，認(rèn)為只有該微缺失模式有明確的臨床表現(xiàn)。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)AZFd區(qū)缺失是否存在一直存有議。盡管現(xiàn)在AZFb與AZFc兩區(qū)域之間存在新的缺位點(diǎn)一些學(xué)認(rèn)為的AZFd區(qū)缺失)，但是該區(qū)域缺失沒(méi)有明確的臨床意義，也并非獨(dú)立存在的缺失模式。所以第四區(qū)域AZFd區(qū)缺失仍存在較多爭(zhēng)議。Müslümanolu等]在2005年的一項(xiàng)究指出AZFd缺失可能與精子形成有關(guān)，但仍缺乏有力的臨床證據(jù)2013年，陳科[4]在精子正常和輕少精子癥患者中都現(xiàn)了定的AZFd區(qū)缺失。然，至為止AZFd區(qū)域尚發(fā)與精生成相的選基，缺失對(duì)應(yīng)臨表型需一步認(rèn)。二、gr/gr缺失不納入常規(guī)檢查項(xiàng)目研究證實(shí)gr/gr缺失屬于AZFc部分缺失，是影響精子生成的一個(gè)重要因素，但是否需要將其作為常規(guī)檢查指標(biāo)尚存爭(zhēng)議。盡管gr/gr缺失可導(dǎo)致AZFc區(qū)一半以上基因丟失，但其臨床意義仍不明確，因?yàn)樵撊笔Щ颊呔由杀硇妥兓鄻?，從少精到精子?shù)目正常都存在gr/gr缺失表型在不同人種和地域間存在差異，已有研究證實(shí)在歐洲白種人(除了法國(guó)人[5]和人[6])和西太洋居中，gr/gr缺失是男性生精障礙的高危因素[7]。但在部分亞洲國(guó)家日本和中國(guó)[8,9]gr/gr缺失在健康人群中的概率和在不育患者的概率無(wú)顯著差別。李錚[10]研究發(fā)現(xiàn)Y染色體gr/gr缺失既存于嚴(yán)不育男性，也存在于生精功能正常的捐精者中，缺失可能遺傳自父親，并未影響精子的發(fā)生，不能認(rèn)為是精子發(fā)生的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因子。因此在中國(guó)gr/gr缺失不建議作為Y染色體微缺失常規(guī)檢測(cè)的缺失模式。三、AZF缺失基因型/表相性Y染色體是AZF的缺失，該區(qū)域包含精子生成的相關(guān)基因家族，不同程度的缺失可導(dǎo)致少精子或無(wú)精子癥AZF區(qū)進(jìn)一步可分為AZFa、AZFb、AZFc區(qū)域。AZFa區(qū)域缺失通常導(dǎo)致唯支持細(xì)胞綜合(CO綜合征)和無(wú)精子癥。如果診斷為整個(gè)AZFa區(qū)域缺失，從睪丸中獲得精子的概率為0。AZFb和AF(/1；P1，1端)是O。研個(gè)AZFa區(qū)域缺失情況一樣，患者也不能通過(guò)睪丸穿(TESE)獲得精子。嚴(yán)重少精子或無(wú)精子癥患者中AZFc缺失發(fā)生頻率最高，AZFc缺失的臨床表型和睪丸組織學(xué)類型多種多樣。一般說(shuō)來(lái)AZFc缺失患者尚殘存精子生成能力。罕見(jiàn)情況下，其缺失在自然狀態(tài)下可遺傳給其男性后[11]。近50%AZFc缺失的無(wú)精子癥患者可通過(guò)TESE獲得精子，進(jìn)行單精子卵胞內(nèi)注射(ICI受孕，但這些患者的男性后代都將是AZFc缺失的攜帶者。四、Y染色體微缺失檢測(cè)人群Y染色體微缺失檢測(cè)不僅可以明確嚴(yán)重少精子或無(wú)精子癥的病因，而且可以對(duì)預(yù)后做出一定的評(píng)估。Y染色體微缺失通常見(jiàn)于無(wú)精子癥或精子濃度少于2×106/ml的患者。一般的臨床參數(shù)，如激素水平、睪丸大小、精索靜脈曲張、睪丸畸形、感染等對(duì)是否存在Y染色體微缺失沒(méi)有任何預(yù)測(cè)價(jià)值Y染色體微缺失必須通過(guò)分子檢測(cè)來(lái)確定。擬行ICSI的嚴(yán)重少精子癥應(yīng)該做Y染色體微缺失檢測(cè)，而對(duì)非梗阻性無(wú)精子癥患者在行TESE或者睪丸顯微切開(kāi)取精術(shù)前也應(yīng)該進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，因?yàn)楫?dāng)整個(gè)AZFa、整個(gè)AZFb、AZFbc或者AZFabc缺失時(shí)都不建給患做手術(shù)需要特提醒的，如果采用輔助生育技術(shù)，AZFc缺失可以垂直遺傳給男性后代。如果患者通過(guò)AZF檢測(cè)發(fā)現(xiàn)部分AZFa、AZFb或AZFc缺失，建議家族中其他男性也進(jìn)行AZF檢測(cè)，因?yàn)榉N缺失是以遺傳的但整個(gè)AZFa、AZb、AZFbc或者AZFabc缺失時(shí)不議家族他男性員做AZF檢測(cè)，因?yàn)檫@些缺失通常沒(méi)有精子生成。對(duì)丈夫攜帶AZFc區(qū)缺失類型的夫妻，研究其ICSI受孕情況[12]，大部分究明Y染色體缺存與不響精和孕，也個(gè)報(bào)指缺會(huì)致精率下，響胎量降囊率和ICSI成功率[13]。五STSY染色體微缺失上的STS位點(diǎn)高達(dá)131個(gè)，如果用于Y染色體微缺失檢測(cè)的STS過(guò)少，將有可能漏檢某些區(qū)域的缺失，但若采用的STS過(guò)多，則可能包含一些多態(tài)性序列，而這些位點(diǎn)在正?？捎行灾幸部沙霈F(xiàn)缺失。指南指出，原則上只要對(duì)每個(gè)AZF區(qū)域一個(gè)非多態(tài)性的STS位點(diǎn)進(jìn)行分析就足以判斷AZFa、AZFb、AZFc是否任知包個(gè)STS位點(diǎn)，每個(gè)區(qū)域設(shè)置2個(gè)STS位點(diǎn)有助于增加檢測(cè)的準(zhǔn)確性。鑒于眾多實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)總結(jié)和外部質(zhì)量控制，并考慮到多重PCR擴(kuò)增的形式，在1999和2004版指南中推薦經(jīng)典STS引物仍然有效，這些引物包括AZFa:sY84、sY8；AZFb：sY127、sY134；AZFc:sY254、sY255(都在DAZ基上。些STS位點(diǎn)引物由多個(gè)實(shí)驗(yàn)室和外部質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)證明：結(jié)果可信重復(fù)性好。采用這些引物幾乎能夠檢測(cè)到所有臨床上的相關(guān)缺失和文獻(xiàn)報(bào)道的3個(gè)AZF區(qū)域95%以上的缺失，設(shè)計(jì)的這套引物能完全滿足常規(guī)檢測(cè)。它是一個(gè)簡(jiǎn)單的標(biāo)準(zhǔn)，便于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和縮小實(shí)驗(yàn)室之間的檢測(cè)差異，因此強(qiáng)烈推薦所有實(shí)驗(yàn)室都采用這些引物。指南指出一些檢測(cè)方法和試劑可檢測(cè)很多STS位點(diǎn)，但并不能提高檢測(cè)的靈敏度，反而可能使結(jié)果復(fù)雜化、難以解釋，因?yàn)檫@可能檢測(cè)到很多假的缺失位點(diǎn)，尤其是當(dāng)DNA質(zhì)量不好PCR條件不是最佳時(shí)。而大部分試劑盒并沒(méi)有額外的單重PCR來(lái)確認(rèn)可疑結(jié)果，因此指南并不推薦增加STS位點(diǎn)[14]。六、PCR的形式和內(nèi)質(zhì)量控制Y染色體微缺失檢測(cè)采用多重PCR體系，體系中設(shè)置的PCR引物應(yīng)該包括2個(gè)內(nèi)對(duì)照：sY14(SRY、ZFX/ZFY6個(gè)STS位點(diǎn)：sY84、s6、sY127、sY134、sY254、sY255PCR需設(shè)立內(nèi)對(duì)照(RY、ZFX/ZFY基因)，陽(yáng)性對(duì)照健康的男性DNA)，陰性照女性DNA)和水空白對(duì)用水代替模板，即含有除模板DNA外所有成分的R反應(yīng))照監(jiān)測(cè)DNA是否污染，空白對(duì)照監(jiān)測(cè)試劑是否污染。內(nèi)對(duì)照SRY基是男性別決定因，位于Y色體短，內(nèi)照SRY因可以在ZFY基因丟失時(shí)證明Y染色體特征序列的存比如：在XX男性中。ZFX基因檢測(cè)不僅可以作為女性DNA對(duì)照，也作沒(méi)有SRY基因的46，XX男性患者一的性對(duì)。指南推的相操作經(jīng)過(guò)真設(shè)和優(yōu)，采兩管多重PCR反應(yīng)，每管重PCR反應(yīng)體中都括每區(qū)域一個(gè)點(diǎn)。標(biāo)本現(xiàn)整個(gè)AZFa、AZb或AZFc區(qū)缺失時(shí)，兩管PCR反應(yīng)中相應(yīng)區(qū)域設(shè)置的2個(gè)STS位點(diǎn)產(chǎn)物都會(huì)缺失。當(dāng)AZFa和AZFb區(qū)域出現(xiàn)部分缺失時(shí)，相關(guān)區(qū)域單個(gè)位點(diǎn)的缺失是有可能的，但需小心求證，對(duì)整個(gè)區(qū)域進(jìn)行詳細(xì)的研究，目前這種情況很少見(jiàn)，被認(rèn)為是例外。通常認(rèn)為AZFc區(qū)的sY254或sY255單個(gè)缺失實(shí)驗(yàn)果錯(cuò)誤。七、Y染色體微失檢測(cè)法EAA/EQN推薦重PCR方測(cè)Y染色缺于重PCR的Y染體微缺失檢測(cè)多實(shí)光PCR(Real–timePCR)、電泳法和芯片法等。Real–timePCR檢測(cè)采用熒光標(biāo)記探針，不涉及電泳，檢測(cè)速度更快，數(shù)字化結(jié)果更加直觀，因此指南推薦有條件的實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)采用該方法。在沒(méi)有Rea–timePCR檢測(cè)儀的實(shí)驗(yàn)室，可采電泳法毛細(xì)電法。其的檢測(cè)法如基因片檢測(cè)其花費(fèi)貴，且包含太多必要的點(diǎn)，不指南所薦。實(shí)室建立一新的檢方法，需經(jīng)過(guò)大量樣本