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文檔簡介
局部,甚至整個生物體用作診斷和治療疾病的醫(yī)藥品,生物制品用基因工程、細胞工程、發(fā)酵工程等生物學技術制成的免疫制劑或有生物活性的制劑。可用于疾病的預防、診斷和治療。生物技術制藥:承受現(xiàn)代生物技術人為地制造一些條件,借助某些微生物、植物或動物來生產(chǎn)所需的醫(yī)藥品。生物技術藥物:承受DNA重組技術、單克隆抗體技術或其它生物技術研制的蛋白質(zhì)〔包括治療性抗體等〕或核酸類藥物。生物技術:以生命科學為根底,利用生物體〔或生物組織、細胞及其組分〕的特性和功〔品系〕進展加工生產(chǎn),為社會供給商品和效勞的一個綜合性技術體系。血液:是一種流淌性結(jié)締組織,循環(huán)于心血管系統(tǒng)內(nèi),它將身體必需的養(yǎng)分物質(zhì)和氧氣輸送到各個器官、組織和細胞;同時將機體不需要的代謝產(chǎn)物運送到排泄器官。血液還對入侵的微生物、病毒、寄生蟲等,以及其它有害物質(zhì)發(fā)生反響,保護機體免遭損害;血液是體液的一個重要組成局部,在維持機體內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定方面起著重要的作用體液:人體內(nèi)含有大量液體,包括水分和其中溶解的物質(zhì),成人,約占體重的60%,總稱為體液。體液三分之二在細胞內(nèi),三分之一在細胞外,存在于血管內(nèi)的血漿、淋巴管內(nèi)的淋巴液、細胞間隙的和組織7自然藥物化學:是運用現(xiàn)代科學理論和方法爭論自然藥物中的化學成分及其生理功能的一門科學。內(nèi)容包括各類自然藥物的化學成分、構(gòu)造特征、性質(zhì)、提取和分別方法、構(gòu)造鑒定及生理活性等的爭論。主要爭論內(nèi)容是植物中的自然有機化合物的分別提純、構(gòu)造鑒定、構(gòu)效關系基因工程技術:是將重組對象的目的基因插入載體,拼接后轉(zhuǎn)入的宿主細胞,構(gòu)建成工程菌,實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重組合,并使目的基因在工程菌內(nèi)進展復制和表達的技術下游階段:將試驗室成果產(chǎn)業(yè)化、商品化,為獲得高質(zhì)量、高產(chǎn)量的表達產(chǎn)物,需對影響表達及分別純化的因素進展分析〔如型生物反響器、高效分別介質(zhì)及裝置、分別純化的優(yōu)化把握、高純度產(chǎn)品的制備技術等〕上游階段:在試驗室完成,獲得目的基因后,用限制性內(nèi)切酶和連接酶將目的基因插入載體,并轉(zhuǎn)入宿主菌mRNDNDNA的克隆表達。從產(chǎn)生該蛋白質(zhì)的真核細胞中提取mRNA,以其為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的mRNADNADNA為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶或DNA聚合酶作用下,最終合成編碼該蛋白質(zhì)的雙鏈DNA序列,該序列不含內(nèi)含子表達型載體:在cDNA插入位置的上游具有啟動子序列,重組后插入的cDNA能夠表達,并經(jīng)轉(zhuǎn)錄和翻譯合成相應蛋白質(zhì)的載體非表達型載體:在cDNA插入位置的上游無啟動子序列,重組后插入的cDNA不能表達,不能經(jīng)轉(zhuǎn)錄和翻譯合成相應蛋白質(zhì)的載體火成為兩端形成粘末端的DNADNA片段,再用連接酶連接成完整的基因基因表達:是指構(gòu)造基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及全部加工過程,用基因工程制備藥物,必需使目的基因進展高效表達酵母:是爭論基因表達調(diào)控最有效的單細胞真核微生物3000個嚴緊型載體:伴隨宿主染色體的復制而復制,在宿主細胞中拷貝少〔1-3〕載體:依據(jù)真核基因在原核細胞中表達的特點關,應將外源基因克隆到高拷貝的質(zhì)粒載體上,這對于提高外源基因的總體表達水平格外有利融合蛋白:是由一條短的原核多肽和真核蛋白結(jié)合在一起所形成的蛋白質(zhì);其氨基端是原核序列,羧基端是真核序列.酵母載體:是可以攜帶外源基因在酵母細胞內(nèi)保存和復制,并隨酵母分DNARNA單位一般表達載體:只能便利地引入外源基因并進展表達,對表達產(chǎn)物N-末端氨基酸是否有增減并無嚴格要求準確表達載體——要求在啟動子或前導肽編碼序列的適當部位有內(nèi)切酶位點,以利于接入外源基因,并使它在表達和加工后N-末端氨基酸序列與自然產(chǎn)物一樣,既無多余的氨基酸,也無缺失的氨基酸兩階段培育法:第一階段先使菌體生長至確定密度,其次階段誘導外源基因的表達選擇性壓力〔如抗生素等菌體的生長。把握菌體生長對提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性、削減代謝副產(chǎn)物的積存、提高外源蛋白產(chǎn)率都有重要嚴緊反響:在高拷貝質(zhì)粒工程菌中,由于質(zhì)粒復制和外源基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯消耗了大量-tRNA的缺乏使核糖體在密碼子上停留,并合成“魔點”ppGpp現(xiàn)象補料分批培育:將種子〔基因工程菌〕接種至發(fā)酵反響器,經(jīng)過一段時間培育后,間歇或連續(xù)地補加穎培育基,使菌體進一步生長的方法連續(xù)培育:將種子〔基因工程菌〕接種至發(fā)酵反響器中,攪拌培育至確定菌體濃度后,環(huán)境,把握其比生長速率透析培育:利用膜的半透性原理,使代謝物和培育基分別,去除培育液中代謝物對工程菌的不利影響有機氮源:酪蛋白水解物作為氮源有利于產(chǎn)物的合成與分泌接種量:指移入的種子液體積和培育液體積的比例雙水相安排法:水溶性高聚物-無機鹽組成雙水相系統(tǒng)〔如PEG-無機鹽〕將混合物與雙水相混合,離心分相,則PEG、目的物和雜蛋白富集在上相,而細胞碎片、核酸、多糖等分布于下相反相色譜:利用pro分子中非極性基團〔氨基酸R側(cè)鏈〕與非極性固定相之間的作用力大小、pro分子中極性基團〔-COOH、-NH2、-OH等〕與流淌相之間的作用力大小的差異進展分別pro濃度的無機鹽溶液洗脫〔濃稀〕干擾素interferonIF:是人體細胞分泌的一種活性蛋白質(zhì),具有廣泛的抗病毒、抗αβγ、ω4個類型。α干擾素又依其構(gòu)造分為α1b、α2a、α2b等亞型,其區(qū)分在于個別氨基酸的差異上,早期干擾素是用病毒誘導人白血球產(chǎn)生的,產(chǎn)量低、價格昂貴,不能滿足需要,現(xiàn)在可利用基因工程技術并在大腸桿菌中發(fā)酵、表達來進展生產(chǎn)抗體:由淋巴細胞產(chǎn)生,能與相應抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白免疫球蛋白:是化學構(gòu)造上的概念,抗體:是生物學功能上的概念,全部抗體都是免疫球蛋白,但并非全部免疫球蛋白都具有抗體活性單克隆抗體McA:將抗體產(chǎn)生細胞〔淋巴細胞〕B稱為單克隆抗體有限稀釋法:把雜交瘤細胞懸液稀釋后,參與到96孔板中,使每孔理論上只含有一個HTHTRPMI1640培育液〔也需參與飼養(yǎng)細胞〕軟瓊脂法:在培育液中參與0.5%左右的瓊脂糖凝膠,細胞分裂后形成小球樣團塊,由96孔板連續(xù)培育1-2周,先給小鼠〔BALB小鼠〕腹腔注射0.5ml的降植烷〔或液體石蠟,然后接種106淀,取上清夜凍存〔7~12d便可抽取腹水〕人-鼠嵌合抗體制備原理:由于抗體與抗原特異結(jié)合的功能取決于抗體分子的V區(qū),而CMcAb的V區(qū)基因和編碼人Ig的C區(qū)基因連接起來,再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細胞,就可表達出完整的人-鼠嵌合抗體[〔VH+VL〕鼠—〔CH+CL〕人]改形抗體〔又稱CDR移植抗體〕制備原理:用鼠源性單克隆抗體的CDR區(qū)序列替換Ig中的互補打算區(qū)序列,使人的Ig具有鼠源性單克隆抗體的抗原結(jié)合特異性抗體特性:具有鼠源性單克隆抗體與抗原結(jié)合的特異性;但抗體分子中鼠源局部只占很小比例,可根本消退免疫原性模板替換:使用與鼠對應局部有較大同源性的人框架區(qū)替換鼠框架區(qū)的方法補償變換:在人的框架區(qū)選擇與CDR有相互作用,與抗體的親合力有親熱關系或?qū)蚣軈^(qū)空間構(gòu)造折疊起關鍵作用的殘基進展轉(zhuǎn)變,以補償完全的CDR移植的方法殘基〔CDR和框架區(qū)中的一些關鍵殘基〕的方法雙功能抗體〔研制階段:又稱為雙特異性抗體BsA與兩種抗原特異結(jié)合的雙臂抗體化學交聯(lián)法:將兩個抗體交聯(lián)在一起,此法快速、簡便、高效,純化 簡潔;但此法構(gòu)建的雙功能抗體,可能由于化學交聯(lián)過程會影響抗體的功能,不太簡潔到達靶部位,體內(nèi)穩(wěn)定性較差,且無連續(xù)性等生物學方法〔雜交瘤法:將一般抗體產(chǎn)生細胞〔脾細胞〕與產(chǎn)生McAb的雜交瘤細胞融合而成;此法連續(xù)性好,但構(gòu)建過程簡潔、周期長、純化技術簡潔,基因組過大且不穩(wěn)定,又不能對雙功能抗體進展改造。故不常用VHVL,以融合蛋白的形式表達53.HBsAg的反向被動血凝診斷試劑檢測原理:紅細胞經(jīng)甲醛處理后,在酸性條件下能吸附蛋白質(zhì),當純化的抗乙肝病毒血清吸附其上時便具有抗體活性,假設待測樣品中有乙型肝炎病毒外表抗原時,則發(fā)生特異性結(jié)合反響而使血細胞發(fā)生凝集養(yǎng),使之生存和生長。已有近百年歷史了。隨著細胞生物學、分子生物學、生物化學和基因工程等一系列學科和技術的進展,漸漸形成了細胞工程學細胞工程:以細胞為單位,按人們的意志,應用生物學、分子生物學等理論和技術,有量培育、增殖,并提取出對人類有用的產(chǎn)品病毒載體:如牛痘病毒、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和桿狀病毒等牛痘病毒已廣泛用于構(gòu)建多價疫苗;逆轉(zhuǎn)錄病毒正被試驗用于基因治療;桿狀病毒載體-昆蟲細胞體系也已成功用于幾百種外源基因的高效表達DNANaH2PO4CaCl2溶液,當NaH2PO4和CaCl2形成Ca3PO4沉淀時,DNA被包裹在當中,形成DNA-Ca3PO4共沉淀。當沉淀物與細胞外表接觸時,通過細胞吞噬作用將DNA導入其中。優(yōu)點是方DNADNA放在一起進展形成混合的共沉淀物,一起導入細胞。DNANaH2PO4CaCl2溶液,當NaH2PO4和CaCl2形成Ca3PO4沉淀時,DNA被包裹在當中,形成DNA-Ca3PO4共沉淀。當沉淀物與細胞外表接觸時,通過細胞吞噬作用將DNA導入其中。優(yōu)點是方DNADNA放在一起進展形成混合的共沉淀物,一起導入細胞?!才嘤病诚?,爭論植物的細胞、組織和器官的生長以及把握其生長發(fā)育的技術懸浮培育:在液體培育基中,能夠保持良好分散性的細胞和小的細胞聚攏體〔細胞團〕的培育〔在此培育條件下,組織化水平較低〕.細胞培育:利用單個細胞進展液體或固體培育,誘導其增殖及分化〔目的是為了得到單細胞無性生殖系〕分生組織培育:又稱生長錐培育,在人工培育基上培育莖端分生組織細胞外植體:用于植物組織〔細胞〕〔的切段葉、花、果、穗、胚珠、胚乳、花藥和花粉等均可作為外植體進展組織培育.器官形成:是指在組織培育或懸浮培育物中芽、根或花等器官的分化與形成或者在先后,再形成錐管組織而將二者連成一個軸,最終形成小植株無性生殖:又叫克隆,指使用母體培育物反復進展繼代培育時,通過同種外植體而獲得越來越多的無性生殖后代突變體:細胞本身發(fā)生遺傳變異或應用誘變處理發(fā)生的遺傳變異所得的細胞繼代培育:由最初的外植體上切下的增殖的組織,培育一代稱為“第一代培育”,連續(xù)多代的培育就稱為繼代培育67.培育基:是植物離體器官、組織或細胞的無菌土壤,養(yǎng)分成分可調(diào)控植物細胞或組織培育基常含有無機鹽、碳源、有機氮源、植物生長激素、維生素等成分〔表6-6列出了幾種常用培育基的化學組成〕68.植物激素:是植物代謝過程中形成的生長調(diào)整物質(zhì),在極低濃度〔小于1微摩爾〕時即能調(diào)整植物的生育過程,并能從合成部位轉(zhuǎn)運到作用部位而發(fā)揮作用69.成批培育法:將培育基一次性地參與反響器,接種、培育確定時間后收獲細胞的方式70.半連續(xù)培育法:在反響器中投料和接種培育一段時間后,將局部培育液和穎培育液進展交換的培育方法71,連續(xù)培育法利用連續(xù)培育反響器,在投料和接種一段時間后,以確定的速度連續(xù)采集細胞和培育液,并以同樣速度供給穎培育基以使細胞生長環(huán)境維持恒定的培育方法固定化培育法:利用固定化反響器進展培育,將細胞固定于網(wǎng)狀多孔板、尼龍網(wǎng)套和中空纖維膜等反響器的膜外表,放入培育液中進展培育及連續(xù)收集培育物的方法誘導子:能觸發(fā)形成植物抗生素信號的物質(zhì)細胞內(nèi)或細胞外生物誘導子: 植物體在防范過程中為對抗微生物感染而產(chǎn)生的物質(zhì)非生物誘導子:不是植物細胞中自然成分但又能觸發(fā)植物細胞形成抗毒素信號的物質(zhì)前體飼養(yǎng):是增加次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)率的重要方法,次級代謝產(chǎn)物的合成依靠于3中主要原材料的供給發(fā)酵工程又稱為微生物工程:是利用微生物制造工業(yè)原料與工業(yè)產(chǎn)品并供給效勞的技術微生物發(fā)酵工程::如基因工程、細胞工程、酶工程都與發(fā)酵工程相關自然選育: :即不經(jīng)人工處理,利用微生物的自然突變進展菌種選育的過程稱為~誘變育種:即用人工方法誘發(fā)突變;突變發(fā)生部位一般是在遺傳物質(zhì)DNA上,并可穩(wěn)定遺傳原生質(zhì)體融合: 是將兩個親株分別通過去除細胞壁,使菌體細胞在高滲環(huán)境中釋放出由原生質(zhì)體包被著的球狀體在高滲條件下混合兩個親株的原生質(zhì)體由PEG作促融劑使它們相互凝集發(fā)生細胞融合,接著兩細胞基因組由接觸到交換,從而實現(xiàn)遺傳物質(zhì)重組,在再生細胞中就有可能選擇出較抱負的重組子氨基酸:利用生物技術得到基因克隆的生產(chǎn)菌,或承受融合技術提高氨基酸產(chǎn)量抗生素:可從產(chǎn)生菌中分別誕生物合成酶基因,進展克隆,提高生產(chǎn)菌的生物量,或得到的雜合抗生素維生素:構(gòu)建基因工程菌,簡化維生素的生產(chǎn)工藝〔如VitC〕疫苗:利用基因工程技術將抗原克隆到E.coli或酵母中,用工程菌生產(chǎn)疫苗,產(chǎn)量高、工藝簡潔、操作安全(如)或酶化學方法(如限制性內(nèi)切核酸酶)DNA切割成為基因水平的很多片段,繼而將這些片段與適當?shù)妮d體結(jié)合,將重組DNA轉(zhuǎn)入受體菌擴增雜合抗生素:應用遺傳重組技術改造菌種,產(chǎn)生的工程菌,制備的型抗菌活性化合物誘導法:是利用反響過渡態(tài)類似物為半抗原制作單克隆抗體,篩選出具高催化活性的單抗即抗體酶??截惙ǎ褐饕罁?jù)抗體生成過程中抗原-抗體互補性來設計的。引入法:則借助基因工程和蛋白質(zhì)工程將催化基因引入到特異抗體的抗原結(jié)合位點上,使其獲得催化功能?;瘜W修飾法:對抗體進展化學修飾,使抗體與催化基團相連??贵w酶: 由抗原誘導產(chǎn)生的,在構(gòu)造上與抗原高度互補并與抗原具有特異結(jié)合功能的免疫球蛋白。酶是一類具有催化功能的生物
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