華支睪吸蟲生活史的室內(nèi)生態(tài)系統(tǒng)研究

華支睪吸蟲病是我國(guó)常見的食源性人獸疾病。華支睪吸蟲的第一中間宿主為淡水螺類,第二中間宿主為淡水魚、蝦,人為其終宿主,主要保蟲宿主有貓、犬、鼠、豬和狐貍等多種動(dòng)物材料和方法1hs-pahs螺、cyprinus、魚、羅非魚和hylapo掌握藥物本成年家貓,2.0~2.5kg,雌雄不限,購(gòu)自珠江三角洲地區(qū)自由市場(chǎng)。紋沼螺和魚類[麥穗魚(Pseudorasboraparva)、鳑鮍魚(Rhodeussericeusamarus)、草魚(Ctenopharynodonidellus)、鯪魚(Cirrhinusmolitorella)和鯉魚(Cyprinuscarpio)、鳙魚(Aristichthysnobilis)、鯽魚(Carassiusauratusauratus)和羅非魚(Tilapianilotica)]采自廣東省陽(yáng)山縣郊區(qū)魚塘,長(zhǎng)角涵螺采自廣東省梅州市郊區(qū)魚塘,實(shí)驗(yàn)前鏡檢確認(rèn)感染華支睪吸蟲。雌性SD大鼠(SPF級(jí)),150~160g,購(gòu)自中山大學(xué)北校區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。2為船只和魚類提供食物池的建設(shè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)螺類、魚類飼養(yǎng)池占地面積約22m3成蟲培養(yǎng)與清洗液的制備主要參照文獻(xiàn)[8]方法進(jìn)行,解剖感染家貓取出肝臟,采用擠壓法將成蟲擠出,置含有生理鹽水的培養(yǎng)皿內(nèi),37℃孵育24h。待成蟲充分產(chǎn)卵,吸取培養(yǎng)皿底部的蟲卵,離心,收集蟲卵,備用。剪開肝膽管,生理鹽水沖洗,收集清洗液,自然沉淀20min,棄上清;生理鹽水反復(fù)清洗,至沉淀液清晰為止,收集沉淀的蟲卵,備用。4尾逸出情況觀察將螺放入培養(yǎng)皿內(nèi)觀察2周,未見尾蚴逸出,移入生態(tài)室的養(yǎng)殖缸內(nèi)正常養(yǎng)殖。待螺長(zhǎng)至0.5cm,將上述收集的華支睪吸蟲卵放入養(yǎng)殖缸,自然感染螺類。為確定尾蚴逸出的準(zhǔn)確時(shí)間,分別于螺類感染后第60天、80天進(jìn)行尾蚴逸出實(shí)驗(yàn)。主要步驟為:隨機(jī)取紋沼螺100只,長(zhǎng)角涵螺50只,分別置培養(yǎng)皿(10cm×10cm)中,10只/皿,加入10ml水,白熾燈下靜置24h,解剖鏡觀察逸出尾蚴情況。感染后60d和80d的兩種螺分別連續(xù)觀察20d,記錄尾蚴開始逸出的確切時(shí)間。確定有尾蚴逸出后,隨機(jī)取紋沼螺200只,長(zhǎng)角涵螺50只,分別單獨(dú)放入方皿(4cm×4cm)內(nèi),孵育24h,解剖鏡下連續(xù)觀察3d,將有尾蚴逸出的陽(yáng)性螺放入養(yǎng)殖缸內(nèi),與魚類共同飼養(yǎng),感染魚類。5華支睪丸吸蟲感染試驗(yàn)當(dāng)陽(yáng)性螺與魚類共同飼養(yǎng)1個(gè)月后,隨機(jī)抽檢養(yǎng)殖缸內(nèi)的麥穗魚、鳑鮍魚、草魚(苗)、鯪魚(苗)和鯉魚、鳙魚、鯽魚和羅非魚華支睪吸蟲的感染情況。取魚肉壓片檢查,計(jì)算魚肉內(nèi)囊蚴的感染率。再經(jīng)過6個(gè)月的養(yǎng)殖,撈取缸內(nèi)的各種魚,去魚鱗后,取1g背部肌肉,搗碎后放入小燒杯內(nèi),加入30ml新配制的人工消化液(胃蛋白酶3g、鹽酸7ml和生理鹽水1000ml),攪勻后置37℃溫箱,3~6h后取出,棄上液,生理鹽水清洗3次,收集沉淀,置解剖鏡下觀察,記錄每克魚肉的囊蚴數(shù)6囊經(jīng)口注入型4只家貓?jiān)趧?dòng)物養(yǎng)殖房飼養(yǎng)2周,期間進(jìn)行3次糞檢,證實(shí)未感染華支睪吸蟲后,進(jìn)行人工感染。用乙醚麻醉家貓,用灌注注射器將華支睪吸蟲囊蚴經(jīng)口直接注入食道下段或胃內(nèi),120個(gè)/貓。取SD大鼠12只,均分3組,乙醚麻醉后,用灌注注射器吸取華支睪吸蟲囊蚴經(jīng)口注入胃內(nèi)。第1、2和3組每鼠分別感染20、40和80個(gè)囊蚴,感染46d后取其糞便,生理鹽水直接涂片法檢查。將檢獲成蟲移入生理鹽水內(nèi),37℃孵育24h,使其自然排空子宮內(nèi)成熟蟲卵,再將蟲卵放入陰性螺類養(yǎng)殖缸內(nèi),以便再感染,從而建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)華支睪吸蟲生活史循環(huán)系統(tǒng)。結(jié)果1尾逸出和螺類養(yǎng)殖全年飼養(yǎng)缸的水溫為7.8~37.2℃,1~2月最低為7.8~23.2℃,7~8月最高為25~37.2℃。水溫在24.3~37.2℃時(shí),螺類感染后第95天有尾蚴逸出。紋沼螺和長(zhǎng)角涵螺的感染率分別為12.5%(25/200)和18%(9/50)。尾蚴逸出是間歇性的,每逸出4~5d即停止2~3d,然后再逸出。當(dāng)水溫降至20℃時(shí),尾蚴停止逸出。每年4月下旬~6月中旬,及10月中旬~11月中旬,水溫在20~25℃時(shí),逸尾蚴螺類與各種魚類共同飼養(yǎng)30d后,8種魚均檢到囊蚴,但尚未成熟,其囊壁不清晰且排泄囊內(nèi)未見排泄物;共同飼養(yǎng)45d后,囊蚴的囊壁清晰透亮,且排泄囊內(nèi)充滿黑色排泄物。魚類反復(fù)感染尾蚴6個(gè)月后,發(fā)現(xiàn)麥穗魚、草魚、鳑鮍魚、鳙魚、鯪魚、鯽魚、鯉魚和羅非魚每克魚肉平均寄生囊蚴的數(shù)量分別為1792、16、8、6、5、4、4和2個(gè)。2檢獲率和檢獲率家貓和大鼠感染華支睪吸蟲囊蚴46d后,糞檢到華支睪吸蟲卵。50d后剖檢家貓,共檢獲成蟲402條(分別為94、97、102和109條),檢獲率為83.8%(402/480);3組12只大鼠共檢獲成蟲476條,其中第1組63條(11、16、17和19條),第2組131條(30、32、34和35條),第3組282條(65、67、71和79條),檢獲率為85.0%(476/560)。華支睪丸吸蟲感染螺、沼螺、長(zhǎng)角涵螺等5種魚類的感染途徑在閉合式水循環(huán)生態(tài)系統(tǒng)中,養(yǎng)殖的紋沼螺、長(zhǎng)角涵螺和上述各種淡水魚,均能正常生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖。螺類感染蟲卵后,經(jīng)胞蚴和雷蚴發(fā)育階段,第95天尾蚴即可發(fā)育成熟逸出,并能直接感染養(yǎng)殖缸內(nèi)的各種魚類。上述生