沙眼衣原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷

河北省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病防治所

趙翠英

沙眼衣原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷病原體淋球菌梅毒螺旋體生殖器皰疹病毒生殖道沙眼衣原體乳頭瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血桿菌衣原體念珠菌滴蟲(chóng)疥蟲(chóng)陰虱肝炎病毒－－－病種淋病梅毒:生殖器皰疹:生殖道沙眼衣原體感染:尖銳濕疣:HIV感染/艾滋病:軟下疳:性病性淋巴肉芽腫:念珠菌性陰道炎:滴蟲(chóng)性陰道病:疥瘡:陰虱病:肝炎（乙、丙）：－－－性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)病原體病種性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫50-60年代經(jīng)典性病80-90年代監(jiān)測(cè)性病目前傳染法報(bào)告病例監(jiān)測(cè)性病梅毒淋病沙眼衣原體感染生殖器皰疹尖銳濕疣我國(guó)主要流行的性傳播疾?。ㄐ圆。┥逞垡略w:30%～50%生殖支原體:10%～40%其它:20%～30%梅毒淋病HIV/AIDS梅毒梅毒50-60年代80-90年代目前梅毒我國(guó)主要2007年衛(wèi)生部《全國(guó)性病監(jiān)測(cè)方案》要求監(jiān)測(cè)性病5種：TP，NG，CT,HSV,HPV沙眼衣原體作為獨(dú)立病種報(bào)病2007年衛(wèi)生部《全國(guó)性病監(jiān)測(cè)方案》要求監(jiān)測(cè)性病5種：TP，沙眼衣原體感染后：約70％女性和50％男性為無(wú)癥狀86％的女性和55％的男性感染者持續(xù)感染時(shí)間為1年以上。

不尋求治療…….沙眼衣原體感染后：可逆行感染：

1.女性：盆腔炎、輸卵管炎、不孕、流產(chǎn)和死胎等2.男性：附睪炎、前列腺炎和不育3.新生兒：結(jié)膜炎、肺炎及Reiter綜合征（反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎）可逆行感染：近年來(lái)研究：

引起活動(dòng)性關(guān)節(jié)炎，與動(dòng)脈硬化、冠心病有關(guān)；細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)導(dǎo)致與HIV感染的促進(jìn)作用

沙眼衣原體感染已成為全世界范圍的公共衛(wèi)生問(wèn)題!沙眼衣原體感染實(shí)驗(yàn)室診斷課件實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是控制傳播的最有效手段一級(jí)預(yù)防：倡導(dǎo)性行為的改變（推遲首次性交年齡，減少性伴，使用安全套等）二級(jí)預(yù)防：檢測(cè)與治療（性病患者及性伴；孕婦新生兒；普通人群無(wú)癥狀感染傳播三級(jí)預(yù)防：檢測(cè)與治療并發(fā)癥實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是控制傳播的最有效手段一級(jí)預(yù)防：倡導(dǎo)性行為的改變（沙眼衣原體感染病例定義《全國(guó)性病監(jiān)測(cè)方案》,2007流行病學(xué)史：有不安全性行為，或性伴感染史臨床表現(xiàn);男性尿道炎、附睪炎等，女性宮頸炎、盆腔炎實(shí)驗(yàn)室檢查：CT抗原或核酸或培養(yǎng)陽(yáng)性確診病例：符合1+2+3或2+3者，無(wú)癥狀感染病例：符合3且沒(méi)有臨床癥狀者。沙眼衣原體感染病例定義《全國(guó)性病監(jiān)測(cè)方案》,2007

沙眼衣原體生物學(xué)特性衣原體屬微生物具有細(xì)胞壁、核糖體、DNA和RNA具有合成蛋白質(zhì)、核酸和脂類的能力不能產(chǎn)生三磷酸腺苷（ATP），完全依靠宿主細(xì)胞提供必須的能量沙眼衣原體生物學(xué)特性衣原體屬微生物沙眼衣原體病原學(xué)具有原體和始體二個(gè)發(fā)育型原體有傳染性。原體一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，就發(fā)育為始體始體具有新陳代謝活性，行二分裂增殖，生長(zhǎng)成具有傳染性的原體，然后釋放出來(lái)去感染鄰近的細(xì)胞從感染細(xì)胞到釋放出原體大約需要35-48小時(shí)沙眼衣原體病原學(xué)具有原體和始體二個(gè)發(fā)育型嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生生活特性：原體和始體

正常生活周期持續(xù)性感染沙眼衣原體病原學(xué)嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生正常生活周期沙眼衣原體感染實(shí)驗(yàn)室診斷課件沙眼衣原體血清分型和致病性

沙眼衣原體有15個(gè)血清型,A,B,Ba,C,D-K,L1,L2,L3

－A，B，Ba和C型最常引起沙眼

－D-K型主要感染泌尿生殖道

－L1,L2,L3型引起性病性淋巴肉芽腫沙眼衣原體血清分型和致病性沙眼衣原體有15個(gè)血清型,A物理和化學(xué)因素對(duì)沙眼衣原體的影響溫度衣原體對(duì)熱敏感，其傳染性在60℃10分鐘完全喪失化學(xué)制劑

衣原體很容易被乙醚、福爾馬林、酚等化學(xué)制劑滅活物理和化學(xué)因素對(duì)沙眼衣原體的影響溫度發(fā)病機(jī)理衣原體感染人體后，→柱狀上皮→單核巨噬細(xì)胞→繁殖→細(xì)胞死亡，細(xì)胞內(nèi)增值可逃避宿主免疫防御功能，得到間歇性保護(hù)。衣原體的致病機(jī)理是抑制被感染細(xì)胞代謝，溶解破壞細(xì)胞并導(dǎo)致溶解酶釋放，代謝產(chǎn)物的細(xì)胞毒作用，引起變態(tài)反應(yīng)和自身免疫。發(fā)病機(jī)理衣原體感染人體后，沙眼衣原體的檢測(cè)

常用實(shí)驗(yàn)室方法標(biāo)本涂片染色直接鏡檢抗原檢測(cè)試驗(yàn),包括衣原體抗原免疫快速法、直接免疫熒光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)核酸檢測(cè)，多采用實(shí)時(shí)熒光PCR法細(xì)胞培養(yǎng)法沙眼衣原體的檢測(cè)常用實(shí)驗(yàn)室方法一、直接涂片法（姬姆薩染色）：方法：涂片－姬姆薩染色－鏡檢包涵體一、直接涂片法（姬姆薩染色）：方法：涂片－姬姆薩染色－鏡檢包沙眼衣原體包涵體姬姆薩染色

臨床應(yīng)用：眼部感染：敏感性95％，男性尿道：敏感性15％，宮頸感染：敏感性41％。應(yīng)用范圍：眼部標(biāo)本。沙眼衣原體包涵體姬姆薩染色

臨床應(yīng)用：眼部感染：敏感性95％二、沙眼衣原體抗原檢測(cè)

試劑盒-艾博檢測(cè)方法使用前將試劑、裂解液和樣本恢復(fù)到室溫（15-30℃）。1將試劑放置在干凈的水平臺(tái)面上；2在裂解管中豎直滴入無(wú)色的裂解液A5滴，立即放入棉簽樣本（宮頸拭子），用手指擠壓裂解管中的棉簽頭，并轉(zhuǎn)動(dòng)棉簽15次，靜置2分鐘；二、沙眼衣原體抗原檢測(cè)

試劑盒-艾博檢測(cè)方法檢測(cè)方法3在同一裂解管中豎直滴入裂解液B6滴，混合液可能產(chǎn)生沉淀為正常現(xiàn)象。用手指擠壓裂解管中的棉簽頭，并轉(zhuǎn)動(dòng)棉簽15次，此時(shí)溶液呈淡藍(lán)色。靜置1分鐘；4擠干裂解管中的棉簽頭，棄去棉簽，蓋上并旋緊裂解管滴頭；5在試劑的加樣孔中滴入3滴裂解后溶液；610～20分鐘判讀結(jié)果，20分鐘后判讀無(wú)效。檢測(cè)方法3在同一裂解管中豎直滴入裂解液B6滴，混合液可能檢驗(yàn)結(jié)果的解釋1陽(yáng)性（+）：出現(xiàn)兩條紅色條帶，位于檢測(cè)區(qū)（T）和質(zhì)控區(qū)（C）。陽(yáng)性結(jié)果表明：樣本中含有衣原體抗原。2陰性（-）：僅在質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在檢測(cè)區(qū)（T）無(wú)紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：樣本中檢測(cè)不出衣原體抗原，或是含量低于可檢測(cè)范圍。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋1陽(yáng)性（+）：出現(xiàn)兩條紅色條帶，位于檢測(cè)區(qū)（檢驗(yàn)結(jié)果的解釋3無(wú)效：在質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試劑已變質(zhì)損壞。4注意：檢測(cè)區(qū)（T）內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出不同深淺的顏色。但是，在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也該判為陽(yáng)性結(jié)果檢驗(yàn)結(jié)果的解釋3無(wú)效：在質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不“立明”衣原體抗原免疫快速法試驗(yàn)1.原理該實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)寄生於尿道或?qū)m頸柱狀上皮細(xì)胞內(nèi)的沙眼衣原體抗原的快速免疫方法。(1).標(biāo)本加提取緩沖液經(jīng)80℃水浴加熱,使衣原體脂多糖(LPS)抗原釋放。(2).加標(biāo)本提取液到含有帶色乳膠標(biāo)記的鼠抗衣原體LPS單克隆抗體的測(cè)試卡檢體窗中,作用15分鐘?！傲⒚鳌币略w抗原免疫快速法試驗(yàn)1.原理(3).如標(biāo)本中含有衣原體LPS抗原,可與上述標(biāo)記的單抗結(jié)合,結(jié)合物可通過(guò)毛細(xì)管作用移動(dòng)到結(jié)果窗,并可被該處所含有的未標(biāo)記的鼠抗衣原體LPS單抗所捕捉,陽(yáng)性時(shí)在結(jié)果窗中形成一條可見(jiàn)的蘭色帶,過(guò)剩的未結(jié)合的帶色乳膠標(biāo)記的鼠抗衣原體LPS單抗可移動(dòng)到質(zhì)控窗,與該處的兔抗鼠抗體相結(jié)合,顯現(xiàn)一條蘭色帶。(3).如標(biāo)本中含有衣原體LPS抗原,可與上述標(biāo)記的單抗結(jié)合2.檢測(cè)方法(1).先將試劑、測(cè)試卡、塑料管置室溫30分鐘復(fù)溫。(2).預(yù)備80℃±2℃水浴。(3).加試劑1至塑料管刻度(約0.6ml)。(4).將拭子標(biāo)本浸入管內(nèi)混勻,置水浴80℃±2℃,10-12分鐘提取LPS抗原,取出后,轉(zhuǎn)動(dòng)拭子并沿管壁擠壓,棄去拭子。提取液置室溫冷卻后蓋回管塞(此液置室溫3小時(shí)內(nèi)不影響結(jié)果)。2.檢測(cè)方法(1).先將試劑、測(cè)試卡、塑料管置室溫30分鐘復(fù)(5).將測(cè)試卡平置臺(tái)面上,逐滴加入5滴提取液于檢體窗,靜置15分鐘后觀察結(jié)果。(6).結(jié)果

質(zhì)控窗:顯示一條蘭帶,表明卡片質(zhì)量可靠,如30分鐘內(nèi)無(wú)蘭帶顯示,應(yīng)另取測(cè)試卡進(jìn)行試驗(yàn)。

結(jié)果窗：陽(yáng)性時(shí)顯示一條深淺不同的蘭帶,強(qiáng)陽(yáng)性者可在15分鐘內(nèi)出現(xiàn),一般一小時(shí)后作出報(bào)告。質(zhì)控窗和結(jié)果窗的蘭帶深淺可能不同，不影響結(jié)果的解釋。(5).將測(cè)試卡平置臺(tái)面上,逐滴加入5滴提取液于檢體窗,靜置(7).質(zhì)控：取試劑2加5滴於塑料管,再加試劑1至刻度,以下操作同4-5,結(jié)果應(yīng)在質(zhì)控窗和結(jié)果窗均顯示一條蘭帶。(7).質(zhì)控：取試劑2加5滴於塑料管,再加試劑1至刻度,以下3.注意事項(xiàng)

(1).本試劑盒僅可作為泌尿生殖道衣原體感染的檢測(cè)。

(2)本試劑檢測(cè)的是衣原體抗原，因而不能區(qū)別是衣原體的感染還是攜帶者。不能區(qū)別衣原體的死活，不能作為判愈試驗(yàn)。

(3)本試驗(yàn)的敏感性為87%，特異性為98.8%。3.注意事項(xiàng)(1).本試劑盒僅可作為泌尿生殖道衣原抗原檢測(cè)

免疫膠體金快速法檢測(cè)臨床應(yīng)用敏感性：較低特異性:高缺點(diǎn)：需要確證，不宜質(zhì)控操作臨床應(yīng)用：臨床癥狀典型病例的檢測(cè)不適合非典型感染的篩查抗原檢測(cè)

免疫膠體金快速法檢測(cè)臨床應(yīng)用敏感性：較低抗原檢測(cè)

沙眼衣原體酶免疫法檢測(cè)臨床應(yīng)用敏感性：較高特異性:高缺點(diǎn)：需要確證，批量操作臨床應(yīng)用：臨床和健康體檢沙眼衣原體感染的篩查抗原檢測(cè)

沙眼衣原體酶免疫法檢測(cè)臨床應(yīng)用敏感性：較高三、核酸擴(kuò)增試驗(yàn)（NAAT）核酸擴(kuò)增技術(shù)是通過(guò)擴(kuò)增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)粒、染色體和RNA）檢測(cè)病原體。方法包括：聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）等溫鏈置換擴(kuò)增技術(shù)（SDA）轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)（TMA）核酸序列擴(kuò)增技術(shù)（NASBA）

實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)（目前采用較多的方法）三、核酸擴(kuò)增試驗(yàn)（NAAT）核酸擴(kuò)增技術(shù)是通過(guò)擴(kuò)增沙眼衣原體NAAT法臨床應(yīng)用敏感性：高（90%-97%）特異性:高（99%-100%）缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)要求高，成本高，費(fèi)時(shí)，假陽(yáng)性，抑制物臨床應(yīng)用：臨床和健康體檢沙眼衣原體感染的篩查?？捎糜趯m頸、尿道標(biāo)本以及尿液和陰道標(biāo)本。NAAT法臨床應(yīng)用敏感性：高（90%-97%）四、細(xì)胞培養(yǎng)法：原理：衣原體在瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，染色檢測(cè)方法：制備McCoy細(xì)胞接種標(biāo)本（2500轉(zhuǎn)，1