原發(fā)性血小板增量癥轉(zhuǎn)急性髓系白血病的臨床特點(diǎn)及jak2vm17f基因突變與疾病轉(zhuǎn)化的關(guān)系

核電站血小板增多（esjtaimi等）是一種具有廣泛血管克隆疾病的缺血性病變。血小板持續(xù)升高的特點(diǎn)是血小板持續(xù)升高。臨床癥狀主要表現(xiàn)為出血和血栓形成，通常伴有jang2v617f的突變。ET的發(fā)病率約30/10萬(wàn)，任何年齡均可能發(fā)病材料和方法et轉(zhuǎn)aml患者的性別、年齡分布收集本院2010年1月至2018年10月收住的3例ET轉(zhuǎn)AML患者，其中男性2例，女性1例，年齡分別為60、67和67歲。診斷參考第3版《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》材料和儀器瑞氏-姬姆薩染色液試劑盒購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司，本實(shí)驗(yàn)室配制的過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)（PAS）染色試劑、過(guò)氧化物酶（POX）染色試劑均由廣東西隴化工股份有限公司提供。流式細(xì)胞儀（FACSCantoII型）購(gòu)自美國(guó)BectonDickinson公司，并提供配套的所有單克隆抗體、溶血素及破膜劑。PCR儀（ABI7500型）購(gòu)自美國(guó)Life公司，白血病相關(guān)融合基因檢測(cè)試劑盒為上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司提供，Vilber凝膠分析系統(tǒng)為法國(guó)Lourmat公司提供。秋水仙胺及細(xì)胞染色體培養(yǎng)液為天津瑞愛(ài)金生物科技有限公司提供。細(xì)胞組織學(xué)檢測(cè)選取取材、涂片、染色好的骨髓涂片，油鏡下在分布均勻的區(qū)域觀察細(xì)胞形態(tài)特征，必要時(shí)進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞化學(xué)染色并觀察酶型、計(jì)數(shù)陽(yáng)性率，骨髓分類(lèi)計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞，外周血分類(lèi)計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞。嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版》進(jìn)行操作，按第3版《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》分型細(xì)胞抗原表達(dá)及表達(dá)量的檢測(cè)采集患者約2ml肝素抗凝骨髓液，采用CD45/SSC設(shè)門(mén)，用熒光素標(biāo)記的單克隆抗體及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞抗原的表達(dá)及表達(dá)量，根據(jù)細(xì)胞大小、細(xì)胞內(nèi)顆粒情況識(shí)別正常細(xì)胞與異常細(xì)胞，結(jié)果判斷參照歐洲白血病免疫分類(lèi)協(xié)作組（EGIL）的積分標(biāo)準(zhǔn)。核分析采集患者約2-5ml肝素抗凝骨髓液，接種至培養(yǎng)液中，細(xì)胞密度約2×10單核細(xì)胞的獲取、裂解、總rna提取采集患者肝素抗凝骨髓液約2-3ml，用等體積生理鹽水稀釋?zhuān)又M(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞的獲取、裂解、總RNA提取并測(cè)定濃度。取反應(yīng)體系20μl，根據(jù)試劑盒中的逆轉(zhuǎn)錄酶、特異引物和模板，37℃逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)1h，得到cDNA，以cDNA為模板，采用多重巢式RT-PCR方法，檢測(cè)分析結(jié)果。結(jié)果細(xì)胞組織學(xué)特征例1患者診斷ET5年后轉(zhuǎn)化為AML-M2a，患者放棄治療出院；例2患者診斷ET6年后轉(zhuǎn)化為AML，行DIAG方案（地西他濱30mg/d1-5+去甲氧柔紅霉素10mg/d1+阿糖胞苷0.06g/d1-14+特爾津300ug/d1-14）化療1個(gè)療程后骨髓部分緩解，后不規(guī)則門(mén)診隨訪，血小板持續(xù)上升達(dá)702×103例ET患者轉(zhuǎn)化為AML后骨髓形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，例1患者骨髓增生活躍，原始細(xì)胞比例約67%，其形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：胞體大，圓形、類(lèi)圓形或不規(guī)則，胞漿量少至中等、淡藍(lán)色、部分可見(jiàn)空泡、部分可見(jiàn)細(xì)小紫紅色顆粒，胞核異形性明顯，呈扭曲、折疊、凹陷、切跡或花瓣樣、分葉狀，染色質(zhì)粗顆?；虼謮K狀，可見(jiàn)1-4個(gè)核仁（圖1）。POX：原始細(xì)胞陽(yáng)性率約4%?？紤]急性髓系白血病。例2患者骨髓增生活躍，原始細(xì)胞比例約70%，輕度大小不一，以小細(xì)胞為主，圓形或類(lèi)圓形，胞漿量少、淡藍(lán)色、部分可見(jiàn)細(xì)小紫紅色顆粒，胞核多數(shù)圓形，少數(shù)可見(jiàn)凹陷、扭曲，染色質(zhì)細(xì)顆粒狀，核仁可見(jiàn)1-3個(gè)（圖2）。POX陽(yáng)性率約6%?？紤]急性白血病，未分型?；?個(gè)療程后血小板逐漸上升、血小板增多，復(fù)查骨髓象骨髓增生活躍，粒系比例正常，以成熟階段粒細(xì)胞為主，胞漿顆粒增多、增粗，紅系比例略低，以中晚幼紅為主，全片共見(jiàn)巨核細(xì)胞132個(gè)，分類(lèi)25個(gè)其中顆粒型巨核細(xì)胞12個(gè)、產(chǎn)血小板型巨核細(xì)胞11個(gè)、裸核2個(gè)，血小板成堆、成片易見(jiàn)（圖3）。例3患者骨髓增生活躍，白血病細(xì)胞比例約83%，成堆、成團(tuán)或單個(gè)散在分布，胞體大小不一，呈類(lèi)圓形或不規(guī)則形，胞漿量多、藍(lán)色、易見(jiàn)空泡，少數(shù)可見(jiàn)吞噬成熟紅細(xì)胞，成團(tuán)分布細(xì)胞胞漿互相融合，邊緣可見(jiàn)瘤狀突起，胞核類(lèi)圓形或不規(guī)則，可見(jiàn)2核、3核、多核、畸形核，染色質(zhì)細(xì)顆粒網(wǎng)狀，部分可見(jiàn)1-2個(gè)核仁（圖4-5）。POX染色：陰性。PAS染色陽(yáng)性率：80%，呈中粗顆粒、粗顆粒、珠狀、串珠狀陽(yáng)性（圖6）。骨髓象提示：可見(jiàn)大量分類(lèi)不明細(xì)胞。急性髓系配型例1患者白血病細(xì)胞主要表達(dá)HLA-DR、CD4、CD13、CD33、CD34、CD38、CD117、CD123，少部分表達(dá)MPO，提示急性髓系白血病：AML-M2a。例2患者白血病細(xì)胞主要表達(dá)CD34、CD117、少部分表達(dá)MPO，提示系列不明白血病。例3患者白血病細(xì)胞主要表達(dá)CD36、CD58、CD71、GiyA，部分表達(dá)CD117，提示急性髓系白血病：AML-M6a。細(xì)胞染色體核型及轉(zhuǎn)變前后j科學(xué)型的變化例1患者，ET時(shí)期染色體核型正常，急變時(shí)細(xì)胞核型存在1條由1號(hào)染色體長(zhǎng)臂和7號(hào)染色體短臂組成的衍生染色體，附加額外的1條8號(hào)染色體，14號(hào)染色體長(zhǎng)臂附加未知來(lái)源片段：47,XY,+1,der(1;7)(q10;p10),+8,add(14)(q32)（圖7）。例2、例3患者急變前后，染色體核型均正常。3例ET患者急變前后染色體核型情況見(jiàn)表2。例1、例2ET患者轉(zhuǎn)變前后JAK2V617F基因均陽(yáng)性，例3ET患者在ET時(shí)期陽(yáng)性，AML時(shí)期陰性（表3）。3例ET患者轉(zhuǎn)化的急性髓系白血病時(shí)期的形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、JAK2V617F基因結(jié)果見(jiàn)表4。et患者轉(zhuǎn)化的急性髓系白酒的臨床特征骨髓增殖性腫瘤（myeloproIiferativeneoplasm,MPN）是一組起源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，主要包括慢性粒細(xì)胞白血?。╟hronicmyeloidleukemia,CML）、原發(fā)性血小板增多癥（essentialthrombocythemia,ET）、原發(fā)性骨髓纖維化（primarymyelofibrosis,PMF）和真性紅細(xì)胞增多癥（polycythaemiavera,PV)陳況等本研究中，3例ET患者急變前后臨床及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果特點(diǎn)分析如下：(1)診斷ET時(shí)年齡均大于55歲，其中兩例≥60歲。(2)均長(zhǎng)期口服羥基脲治療，均在確診ET后8年之內(nèi)轉(zhuǎn)急性髓系白血病。(3)3例ET患者轉(zhuǎn)化的急性髓系白血病形態(tài)學(xué)特征較普通初診急性白血病更不典型，異形性更明顯，如例1患者胞體出現(xiàn)不規(guī)則，部分胞漿可見(jiàn)空泡，胞核出現(xiàn)扭曲、折疊、凹陷、切跡或花瓣樣、分葉狀等，POX陽(yáng)性率低。尤其例3患者，骨髓白血病細(xì)胞易見(jiàn)成堆、成團(tuán)分布，胞漿之間可見(jiàn)融合，核形極不規(guī)則，POX染色陰性，PAS染色強(qiáng)陽(yáng)性，具髓外腫瘤的形態(tài)學(xué)特征，未做免疫分型形態(tài)學(xué)無(wú)法確定這類(lèi)細(xì)胞是骨髓來(lái)源還是髓外腫瘤。3例ET轉(zhuǎn)化的急性髓系白血病單純靠形態(tài)學(xué)均未能準(zhǔn)確分型，結(jié)合免疫學(xué)檢查后才能較準(zhǔn)確分型，提示ET轉(zhuǎn)化的急性白血病需常規(guī)做免疫分型檢查提高診斷率。這種白血病細(xì)胞的異形性可能跟治療有關(guān)。(4)例2患者轉(zhuǎn)急性髓系白血病經(jīng)化療1個(gè)療程后1年內(nèi)血小板逐漸上升，骨髓白血病細(xì)胞消失，又表現(xiàn)為ET骨髓象，接著不規(guī)則治療1年后白血病復(fù)發(fā)，提示ET轉(zhuǎn)急性白血病后，白血病時(shí)期和ET時(shí)期可交替存在；(5)3例ET患者轉(zhuǎn)AML前后有2例JAK2V617F基因均陽(yáng)性，有1例在ET時(shí)期陽(yáng)性，轉(zhuǎn)白血病后變陰性。JAK2V617F基因突變發(fā)生于大約50%-60%的ET患者綜上所述，ET患者向急性白血病轉(zhuǎn)化發(fā)生率低，ET轉(zhuǎn)化的急性白血病形態(tài)學(xué)異形性可能較初診的急性白血病更顯著，可以常規(guī)做免疫分型檢測(cè)提高診斷率；近年來(lái)的研究表明，沒(méi)有客觀的證據(jù)說(shuō)明使用“羥基脲”會(huì)增加ET患者向急性白血病轉(zhuǎn)化的發(fā)生，JAK2V617F基因突變不被認(rèn)為