布洛芬注射液對小鼠急性中毒的觀察

布洛芬是一種具有強(qiáng)大抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛作用、精確、副作用小等優(yōu)點(diǎn)的強(qiáng)前列腺素合成抑制劑。它是世界上最受歡迎的食品之一。1材料和方法1.1布洛芬溶液a布洛芬注射液由浙江尖峰藥業(yè)有限公司提供,批號(hào)101101,本品為無色澄明液體,含布洛芬(C13H18O2)為標(biāo)示量的102.0%,陰涼處保存。溶媒對照采用0.9%NaCl注射液,由南京小營藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供,批號(hào)2010070106。1.2每組大鼠的時(shí)間SPF級ICR小鼠60只,雄鼠30只,雌鼠30只。動(dòng)物分為6組,每組10只,雌雄各半。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡為4~5周齡,體重為18~22g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購于上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)0041319,生產(chǎn)單位許可證號(hào)SCXK(滬)2008-0016。1.3籠具清潔定期消毒小鼠飼養(yǎng)于江蘇省藥物安全性評價(jià)中心SPF動(dòng)物房,飼養(yǎng)密度為5只/籠,籠具每日清潔,托盤、食盆、飲水瓶每周更換消毒,噪音小于60分貝。飼養(yǎng)間溫度21℃~24℃,相對濕度50%~65%,換氣次數(shù)10~20次/h,照明12h/d(06:00開燈~18:00關(guān)燈)。1.4動(dòng)物自由食性飼料小鼠飼料由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司提供,批號(hào)20101229,動(dòng)物自由采食,飼料檢測內(nèi)容為粗蛋白、粗灰分、水分、鈣、總磷,檢測合格。1.5布洛芬注射液小鼠單次注射給藥正式試驗(yàn)布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥預(yù)試驗(yàn)設(shè)定劑量為2000mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg和125mg/kg,給藥容積為0.5mL/20g,2000mg/kg組、1000mg/kg組、500mg/kg組的死亡率均為100%(每組3只動(dòng)物,給藥后3只動(dòng)物均死亡),250mg/kg組、125mg/kg組小鼠沒有出現(xiàn)死亡情況。所以布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥正式試驗(yàn)設(shè)定給藥劑量為550mg/kg、467mg/kg、397mg/kg、337mg/kg、287mg/kg和0.9%氯化鈉注射液對照組。劑量間距比為0.85。給藥容積為0.5mL/20g。布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥正式試驗(yàn)藥物濃度及配制方法見表1。根據(jù)動(dòng)物體重按隨機(jī)化分組法分組。劑量設(shè)計(jì)及分組情況見表2。根據(jù)所觀察到的各種反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間以及大體解剖中肉眼可見的病變和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果,分析判斷出現(xiàn)的各種反應(yīng)可能涉及的組織、器官或系統(tǒng),從而初步判斷供試品可能的毒性靶器官,并確定供試品的安全劑量范圍。1.6統(tǒng)計(jì)處理采用Bliss法于計(jì)算機(jī)上用POMS軟件計(jì)算供試品小鼠單次腹腔注射LD2結(jié)果2.1給藥后小鼠的情況550mg/kg組給藥當(dāng)天未見動(dòng)物死亡,給藥后1d觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)4雄、5雌動(dòng)物死亡,僅剩的1只雄性小鼠精神萎靡,狀態(tài)不佳;給藥后3d觀察,僅剩的1只雄性小鼠死亡。467mg/kg組給藥當(dāng)天未見動(dòng)物死亡,給藥后1d觀察1雄、4雌動(dòng)物死亡;給藥后3d觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)3雄、1雌動(dòng)物死亡;剩余的1只雄性小鼠在剩余觀察期內(nèi)未見異常。397mg/kg組給藥當(dāng)天未見動(dòng)物死亡,給藥后1d觀察1雄死亡;給藥后3d觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)1雌死亡,其余動(dòng)物在剩余觀察期內(nèi)未見異常。337mg/kg組給藥后3d觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)1雌鼠死亡,其余動(dòng)物在觀察期內(nèi)未見異常。287mg/kg組給藥后,在觀察期內(nèi)未見動(dòng)物死亡。腹腔注射0.9%氯化鈉注射液對照組,小鼠在14d觀察期間均未發(fā)現(xiàn)明顯異?，F(xiàn)象。動(dòng)物具體死亡時(shí)間及死亡總數(shù)見表3。2.2小鼠細(xì)胞病理變化各布洛芬注射液給藥組動(dòng)物給藥后立即出現(xiàn)活動(dòng)減少、四肢乏力、俯臥、呼吸減緩的現(xiàn)象,但給藥當(dāng)天1~4h觀察期內(nèi)未見死亡;在隨后的觀察期內(nèi),發(fā)現(xiàn)小鼠死亡時(shí)對小鼠尸體解剖,發(fā)現(xiàn)動(dòng)物尸體內(nèi)器官已出現(xiàn)自溶現(xiàn)象,未做病理切片;存活的動(dòng)物在給藥后1d活動(dòng)恢復(fù)正常。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí),對各組存活動(dòng)物進(jìn)行解剖,并對主要臟器(腎臟、脾臟、肝臟、肺、心臟、腦)進(jìn)行肉眼觀察及病理切片分析;各布洛芬注射液給藥組存活動(dòng)物的主要臟器病理切片與對照組相比,未見異常改變。2.3統(tǒng)計(jì)結(jié)果試驗(yàn)數(shù)據(jù)布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥試驗(yàn)結(jié)果見表4。經(jīng)過Bliss法計(jì)算,布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥的LD3布洛芬注射液以往的研究發(fā)現(xiàn),布洛芬的嚴(yán)重過敏反應(yīng)與急性中毒可導(dǎo)致腎乳頭壞死、急性腎功能衰竭、膀胱炎和排尿困難、休克、大出血、知覺喪失等癥狀在中國藥典二部標(biāo)準(zhǔn)(2010年版)中關(guān)于布洛芬制劑僅有口服溶液、片劑、膠囊、緩釋膠囊、滴劑和糖漿。布洛芬注射液是近兩年在國外上市的新型制劑。因?yàn)閯┬偷脑?布洛芬注射液經(jīng)靜脈推注或滴注后生物利用度較其他劑型有顯著提高。因此,若臨床劑量設(shè)計(jì)不合理,出現(xiàn)不良反應(yīng)后,治療方法較其他布洛芬制劑更加困難。本次試驗(yàn)中,小鼠單次腹腔給予布洛芬注射液后,各給藥組動(dòng)物給藥后立即出現(xiàn)活動(dòng)減少、四肢乏力、俯臥、呼吸減緩的現(xiàn)象,符合以往研究中發(fā)現(xiàn)的布洛芬急性中毒后的乏力、嗜睡的癥狀。存活的動(dòng)物在給藥后第2天觀察時(shí)癥狀消失,也符合布洛芬經(jīng)代謝后,其不良反應(yīng)癥狀減輕或迅速消失的描述。經(jīng)過Bliss法計(jì)算,布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥的LD50和95%可