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試驗十二殺菌劑生物測定——孢子萌發(fā)法第1頁第1頁一、試驗?zāi)繉W(xué)習(xí)并掌握殺菌劑生物測定辦法之一------孢子萌發(fā)法。

將孢子哺育在含有一定藥劑介質(zhì)中，在保溫、保濕條件下培養(yǎng)一定期間后鏡檢，依據(jù)殺菌劑對病原真菌孢子萌發(fā)克制作用來測定藥劑生物活性。二、試驗原理載玻片含藥介質(zhì)孢子孢子含藥介質(zhì)第2頁第2頁其它藥劑選取適當(dāng)溶劑（如丙酮、二甲基亞砜、乙醇等）溶解，用0.1%吐溫80無菌水溶液稀釋。依據(jù)預(yù)備試驗，設(shè)置5-7個系列質(zhì)量濃度，有機溶劑最后含量不超出2%。三、試驗環(huán)節(jié)（1）藥劑配制水溶性藥劑直接用無菌水溶解稀釋第3頁第3頁（每毫升1×105-1×107個孢子，并加入0.5%葡萄糖溶液）（2）孢子懸浮液配制培養(yǎng)基上病原真菌孢子洗脫過濾離心（1000r/min）5min倒去上清液，加入去離子水離心去離子水將孢子重懸浮第4頁第4頁然后架放于帶有淺層水培養(yǎng)皿中，加蓋保濕培養(yǎng)于適宜溫度培養(yǎng)箱中。（3）藥劑處理低濃度高濃度孢子懸浮液0.5mL藥液0.5mL混合均勻微量加樣器凹玻片第5頁第5頁四、結(jié)果調(diào)查與統(tǒng)計分析當(dāng)空白對照孢子萌發(fā)率達到90%以上時，檢查各處理孢子萌發(fā)情況。每處理各重復(fù)隨機觀測3個以上視野，調(diào)查孢子總數(shù)不少于200個，分別統(tǒng)計萌發(fā)數(shù)和孢子總數(shù)。孢子芽管長度不小于孢子短半徑視為萌發(fā)。同時還應(yīng)觀測統(tǒng)計芽管生長異常情況、附著胞形成數(shù)等。第6頁第6頁試驗結(jié)果統(tǒng)計處理濃度ppm濃度對數(shù)檢查孢子總數(shù)孢子萌發(fā)數(shù)孢子萌發(fā)%更正萌發(fā)%機率硫酸銅多菌靈CK第7頁第7頁●

計算各處理孢子萌發(fā)相對克制率，采用濃度對數(shù)-幾率值法計算各藥劑EC50、EC90,原則誤及其95%置信限，評價供試藥劑對靶標菌孢子萌發(fā)克制活性。●但在觀測試驗結(jié)果時，除要觀測孢子萌發(fā)與不萌發(fā)這兩種截然不同形態(tài)外，更要注意萌發(fā)芽管形態(tài)改變，即芽管是否有膨大現(xiàn)象，是否有附著器形成，附著器顏色深淺，發(fā)芽管長度、以及侵入菌體形成情況等，即從微細觀測中來了解藥品作用方式。

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