病毒感染的檢查方法與防治原則1第1頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月病原學(xué)診斷的意義有助于臨床治療（抗生素、干擾素等）為控制病毒學(xué)疾病的流行提供實驗依據(jù)（疫苗等）2第2頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)病毒感染的檢查3第3頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原（如血凝素）病毒核酸（PCR）病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包涵體分離培養(yǎng)（如IgM、IgG）4第4頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應(yīng)注意：

1.標(biāo)本用“雙抗”（2000-10000U）或兩性霉素B（2ug/ml)處理

2.低溫保存，盡快送檢（冰塊，CO2）

3.血清學(xué)診斷采雙份血清（發(fā)病初，2-3周）5第5頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)

細胞培養(yǎng)（cell

culture）

雞胚接種（egginoculation）

動物接種（animalinoculation）6第6頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性7第7頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細胞培養(yǎng)（簡述）

單層細胞培養(yǎng)（monolayercellculture）

分類懸浮細胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細胞（primarycell）細胞種類二倍體細胞（diploidcell）傳代細胞系（continuouscellline）8第8頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞9第9頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月1.細胞培養(yǎng)(1)原代和次代細胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細胞單層細胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細胞)單層細胞(次代細胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

10第10頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限（20代）,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒（EB）1.細胞培養(yǎng)(1)原代和次代細胞培養(yǎng)11第11頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月(2)二倍體細胞培養(yǎng)

體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點：①對多種病毒敏感

②不帶異種蛋白(人源性)

③不帶病毒，無致瘤潛能

④可傳50-100代左右1.細胞培養(yǎng)12第12頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月(3)傳代細胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高

②繁殖能力高，傳代時間長

③有致癌危險，不能用于疫苗生產(chǎn)

（由腫瘤細胞或二倍體細胞突變而來）1.細胞培養(yǎng)13第13頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月2.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

14第14頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月尿囊腔15第15頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復(fù)雜16第16頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月17第17頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月18第18頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月3.動物接種

應(yīng)用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng)（HCV等）

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒，安全性要求高19第19頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月1．病毒增殖鑒定

(1)細胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

20第20頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月21第21頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)22第22頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月麻疹病毒感染細胞呼吸道合胞病毒感染細胞②形成多核巨細胞或稱融合細胞(1)細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)23第23頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月③形成包涵體(inclusionbody)(1)細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)24第24頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月腮腺炎病毒感染細胞(2)紅細胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細胞表面HA受體25第25頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE(－)?？刹《荆伺吣I細胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細胞風(fēng)疹病毒？埃可病毒（+）CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)?？刹《?-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)?？刹《?+)26第26頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月(4)細胞代謝改變

細胞代謝變慢

pH改變（adenovirus）27第27頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大28第28頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月3.病毒血清學(xué)鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗/血凝效價）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

29第29頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月30第30頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA/ELISA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴散試驗(gelimmuno-

diffusion

test)

——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定31第31頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月4.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴增核酸雜交基因芯片基因測序32第32頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

（plaqueformationtest）

3.50％組織細胞感染量

（50％tissuecultureinfectiousdose,

TCID50）感染性病毒量(PFU)33第33頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月34第34頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月CalculateTCID50.Formula:

TCID50/100ul=[(%positivevalue>50%)?50%]/[(%positivevalue>50%)?(%positivevalue<50%)]*logDilutionfactor#

+(logdilution>50%)

#：10-folddilution,itis1.35第35頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定(PCR)理化性狀的檢測（如對干、熱、酸、脂溶劑的敏感性等）形態(tài)學(xué)鑒定（電鏡）血清學(xué)鑒定（中和試驗）基因測序和生物對比（序列同源性分析）36第36頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用于：①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進行血清流行病學(xué)調(diào)查等37第37頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用38第38頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月2.補體結(jié)合試驗

（complementfixationtest）

用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補體抗體

特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。39第39頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）40第40頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查（包涵體）41第41頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測序42第42頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月病毒引物43第43頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月44第44頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月45第45頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）早期抗體檢測可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒

EA早期抗原抗體（急性感染晚期方可檢出）EB病毒VCA衣殼抗原抗體（IgG急性感染期較早出現(xiàn)，終身可保持高水平；IgM僅于急性感染期出現(xiàn)）EBNA核心抗原抗體（IgM并非所有病人都有）

46第46頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動物免疫血清（biologicalproducts）

免疫細胞細胞因子

防治和診斷感染性疾病47第47頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學(xué)提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品48第48頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月二、人工被動免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

（緊急預(yù)防）

細胞免疫制劑

（病毒、腫瘤的治療）

IFN-α、β、γ細胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細胞——LAK細胞

49第49頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病化學(xué)制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

50第50頁，課件共53頁，創(chuàng)作于2023年2月核苷類藥物作用機制之一

HSV/VZV

無環(huán)鳥苷（