文獻應用|通過Sapphire平臺研究基于熒光的一種蛋白質(zhì)-RNA相互作用的小分子調(diào)節(jié)劑AzureBiosystems國立首爾大學化學系CRI化學蛋白組學WanGiByun團隊在《Chembiochem》發(fā)表了他們最新的研究成果，基于熒光的緊密結(jié)合分析發(fā)現(xiàn)了一種蛋白質(zhì)-RNA相互作用的小分子調(diào)節(jié)劑。那為什么要研究RNA-蛋白之間的相互作用呢？RNA和蛋白是可以相互作用的生物分子，可以通過物理性相互作用，調(diào)節(jié)彼此的生命周期和功能。mRNA編碼序列指導蛋白質(zhì)和一些調(diào)節(jié)序列的合成，而mRNA的非翻譯區(qū)域通過調(diào)控蛋白質(zhì)的翻譯、定位和與其他蛋白質(zhì)的相互作用，影響編碼蛋白的命運。另一方面，從RNA合成到降解的過程中，蛋白質(zhì)反過來可以結(jié)合和調(diào)控RNA的表達和功能。RNA與蛋白質(zhì)的相互作用對于維持細胞穩(wěn)態(tài)是非常重要的，而干擾兩者的相互作用會造成細胞功能失調(diào)和相關(guān)疾病的發(fā)生。那如何來檢測蛋白-RNA間的相互作用呢？讓我們一起來看看WanGiByun團隊是怎么做的：蛋白質(zhì)結(jié)合會引起微環(huán)境的變化，而這將會顯著改變與之結(jié)合的核酸偶聯(lián)的熒光基團的熒光強度。鑒于此，WanGiByun團隊構(gòu)建了一種簡單而強大的分析方法來檢測let-7miRNA及其轉(zhuǎn)錄后調(diào)控蛋白Lin28之間的相互作用。通過熒光EMSA來確定化合物的活性以及IC50，測定熒光結(jié)合強度后，經(jīng)4%丙烯酰胺凝膠電泳后，使用AzureSapphire對Cy3和TAMRA以及Cy5的熒光信號進行可視化檢測。Figure3.Hitidentificationandvalidation(a)Chemicalstructureofhitcompounds.(b)Dose-responsecurveobtainedbyfluorescenceintensitybasedbindingassay.Errorbarsrepresentthestandarddeviationfromthreeindependentmeasurements.(c)HitvalidationbyEMSA.此外，通過WesternBlot來檢測下游信號通路蛋白的含量變化。僅需一臺Sapphire即可完成EMSA和Western

Blot的檢測，Sapphire的功能絕不僅限于此……Sapphire是市面上唯一可以進行掃描式和CCD成像化學發(fā)光的雙模式成像系統(tǒng)，也是唯一使用3種檢測器檢測信號的成像系統(tǒng)（APD，PMT，CCD），具有更寬的動態(tài)范圍，靈敏度更高，分辨率可達10-1000微米。Sapphire除了完成Paper中使用的EMSA凝膠阻滯實驗外，還能完成哪些實驗呢？可以完成DNA/Protein凝膠成像，WesternBlot化學發(fā)光，多通道熒光檢測，in-cellwestern檢測，2D和2D-DIGE以及磷屏成像檢測……看到這里