復(fù)方磺酸二胺喹惡啉鈉對海蘭褐蛋雞免疫器官的影響

氨基丙烯酸是一種用于預(yù)防和抗凝劑的藥物。這是磺胺類藥物的重要成員之一，在動物臨床上得到廣泛使用。這是目前應(yīng)用最廣泛、劑量最高的藥物之一。但隨著抗藥菌株的大量出現(xiàn),價格的降低,臨床用藥濃度越來越高。另外,由于商品名的混亂,重復(fù)用藥現(xiàn)象屢見不鮮,由此而引起的中毒現(xiàn)象已嚴重影響了養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展。磺胺喹惡啉是一種在國內(nèi)需求量較大的抗球蟲獸藥,具有良好的抑制球蟲生長繁殖的功能,該試驗將致力于正確評價不同濃度的磺胺喹惡啉對雛雞的生長發(fā)育和對各器官組織特別是免疫器官的影響,并分析其中毒機理。1材料和方法2結(jié)果與分析2.1關(guān)于磺酰胺中毒的實驗觀察2.2氨基丙烯酸對雞體重的影響2.3兩組抗體水平的比較表2表明,在14日齡時,試驗組(1)抗體水平最高,其次是對照組,試驗組(2)的抗體水平最低,對照組和試驗組(1)在0.05水平上無差異。試驗組(2)顯著低于對照組和試驗組(1),在0.01水平上有差異。在21日齡時,對照組抗體水平最高,其次是試驗組(1)。試驗組(2)的抗體水平最低,對照組和試驗組(1)在0.05水平上無差異;試驗組(2)顯著低于對照組和試驗組(1),在0.05水平上有差異。這表明:高劑量、長時間應(yīng)用磺胺喹惡啉鈉,對雛雞的免疫具有嚴重的抑制作用,顯著降低新城疫抗體水平。2.4各組間肝臟指數(shù)比較表3表明,14日齡時,對照組胸腺和法氏囊指數(shù)最高,其次是試驗組(1),試驗組(2)最低,各組差異不明顯,各組間脾臟指數(shù)基本相同。21日齡時,試驗組(1)胸腺和法氏囊指數(shù)最高,其次是對照組,試驗組(2)最低。對照組和試驗組(1)在0.05水平上無差異;試驗組(2)顯著低于對照組和試驗組(1),在0.01水平上有差異,而各組間脾臟指數(shù)無顯著差異。這說明:高劑量磺胺喹惡啉會引起法氏囊和胸腺明顯萎縮,對脾臟指數(shù)無顯著影響。2.5微生物試驗的結(jié)果2.6動態(tài)病理觀察2.6.1出血的臟器表現(xiàn)試驗組(2)剖檢可見整個腸黏膜有散在出血點,肝腫大呈淡黃色,有的病雞腺胃有出血斑點,肌胃角質(zhì)層有大小不等的的潰瘍灶,腎腫大,尿酸鹽沉積不明顯,可見針尖狀出血,胸腺萎縮點狀出血,胸部、大腿部肌肉明顯出血,脾臟稍腫大,法氏囊明顯萎縮,其他臟器無明顯眼觀病變;試驗組(1)病理變化較輕,腸黏膜無散在出血點,肌胃角質(zhì)層無潰瘍灶,腎腫大,尿酸鹽沉積不明顯,脾臟輕微腫大,法氏囊及其他臟器無明顯的眼觀病變。2.6.2病理組織學(xué)檢測(1)胸腺:對照組胸腺小葉發(fā)育良好,皮、髓質(zhì)分界明顯,皮質(zhì)較寬,皮、髓質(zhì)淋巴細胞致密。試驗組(1)未見明顯的病理組織學(xué)變化。試驗組(2)14d時,胸腺皮質(zhì)區(qū)減少,髓質(zhì)區(qū)相對增多,皮質(zhì)區(qū)可見淋巴細胞消失灶;21d胸腺皮質(zhì)區(qū)進一步減少,仍可見淋巴細胞消失灶。皮、髓質(zhì)區(qū)可見異嗜性粒細胞浸潤。胸腺充血、出血。(2)法氏囊:對照組法氏囊淋巴濾泡發(fā)育良好,大小較一致。淋巴濾泡內(nèi)淋巴細胞數(shù)量較多,分布密集,網(wǎng)狀細胞增生不明顯。間質(zhì)清晰,未見間質(zhì)組織增生。試驗組(1)21d時,法氏囊淋巴濾泡大小較為一致,濾泡皮質(zhì)與髓質(zhì)分界明顯,皮、髓質(zhì)區(qū)淋巴細胞較稀疏。試驗組(2)14d時,法氏囊淋巴濾泡大小較為一致,濾泡皮質(zhì)與髓質(zhì)分界明顯,髓質(zhì)區(qū)細胞分布稀疏,輕度充血、出血。21d時,淋巴濾泡萎縮,濾泡間結(jié)締組織增生,濾泡內(nèi)淋巴細胞十分稀疏,皮質(zhì)很少,個別濾泡髓質(zhì)區(qū)細胞消失呈空泡化。(3)脾:對照組14d時,脾臟淋巴小結(jié)及動脈周圍淋巴鞘不甚明顯,但有相對集中的淋巴組織。紅髓區(qū)淋巴細胞較多;21d時,白髓形象明顯,淋巴小結(jié)和動脈周圍淋巴組織逐漸增多,淋巴細胞數(shù)量增多,紅髓區(qū)淋巴細胞也相對增多。橢球分界明顯,較小,未見網(wǎng)狀細胞增生。試驗組(1)未見明顯的病理組織學(xué)變化。試驗組(2)14d時,脾臟白髓很少,未見明顯的淋巴小結(jié)和動脈周圍淋巴組織。21d時,可見到較小的淋巴小結(jié)和動脈周圍淋巴組織,橢球分界略顯清晰。脾索內(nèi)淋巴細胞較少,主要是紅細胞。(4)骨髓:試驗組(2)14d時,骨髓髓系細胞減少。21d時,髓系細胞減少更加明顯,紅系細胞的發(fā)育與對照組比較也受到一定程度的影響。(5)肝:試驗組(1)21d時,可見肝細胞腫大,顆粒變性,空泡變性。試驗組(2)14d時,試驗組可見肝細胞腫大,顆粒變性,空泡變性,出血。21d時,可見肝細胞更加明顯的顆粒變性,并有灶狀壞死,壞死灶內(nèi)可見異嗜性白細胞浸潤。(6)腎:試驗組(1)21d時,可見腎小管上皮細胞腫大,顆粒變性,空泡變性。試驗組(2)14d時,可見腎小管上皮細胞顆粒變性,以集合管、遠曲小管最為明顯。21d時鏡檢可見腎小球毛細血管壁增厚,遠曲小管和集合管上皮細胞病變更加明顯,呈明顯的空泡變性及壞死病變。(7)小腸:試驗組鏡檢可見黏膜上皮細胞層杯狀細胞增多,上皮細胞變性、壞死、脫落,固有層充血、出血。3結(jié)論3.2微生物檢查3.3病理部位的檢查和變化3.4病理形態(tài)的變化3.4.1細胞受損,免疫抑制骨髓是造血器官和重要的中樞免疫器官,是胸腺和法氏囊淋巴細胞的發(fā)源地,磺胺喹惡啉所導(dǎo)致的骨髓髓系細胞減少,造血功能受損,必然會導(dǎo)致機體的免疫機能受損,從而引起免疫抑制。紅細胞減少與磺胺藥中毒引起的貧血有關(guān)。3.4.2嗜酸性社會細胞的浸充該試驗高劑量磺胺喹惡啉組,胸腺的主要病變是胸腺皮質(zhì)萎縮、淋巴類細胞的減少等,這種病變隨用藥時間的延長逐漸加重,還可見嗜酸性粒細胞浸潤。胸腺是禽類重要的中樞免疫器官,是T淋巴細胞分化的場所,它的病變必然會對機體的免疫機能,特別是細胞免疫機能造成重大影響。3.4.3非炎性退行性病變該試驗高劑量磺胺喹惡啉組,法氏囊的病變主要表現(xiàn)為法氏囊濾泡的萎縮、皮質(zhì)減少、淋巴細胞減少以及間質(zhì)組織增生為主要特征的非炎性退行性病變,法氏囊是禽類另一重要的中樞免疫器官,是淋巴干細胞分化B細胞的場所,它的病變也必然會對機體的免疫機能,特別是體液免疫機能造成重大影響。3.4.4外周血免疫相關(guān)病變該試驗高劑量磺胺喹惡啉組,脾臟的主要病變是淋巴細胞缺失,脾臟實質(zhì)細胞進行性減少,但是脾臟指數(shù)卻未見明顯下降,這可能與脾臟網(wǎng)狀細胞增生、充血等病變有關(guān)。脾臟是重要的外周免疫器官,是機體產(chǎn)生抗體和進行免疫反應(yīng)的主要場所。因而,脾臟的淋巴細胞缺失,是導(dǎo)致機體體液免疫、細胞免疫和非特異性免疫功能降低,發(fā)生免疫抑制的重要原因。脾臟的淋巴細胞缺失可能是與高劑量磺胺喹惡啉引起的骨髓及中樞免疫器官病變有關(guān)。3.4.5一些內(nèi)臟器官的病理形態(tài)變化雛雞飲用高劑量磺胺喹惡啉可以引起實質(zhì)器官的急性變質(zhì)性損傷病變,并且這種病變還相當(dāng)明顯,其中肝臟和腎臟是主要的受害器官。1.1藥物、制劑及儀器選擇1日齡海蘭褐蛋健康雛雞90只,由濱州市某種雞場提供;磺胺喹惡啉購自昆山制藥總廠;TMP購自山東壽光制藥廠,按4∶1比例混合;新城疫Lasota系低毒力活疫苗,產(chǎn)于齊魯動物保健品廠。1.2日齡時系活疫苗的免疫選擇的試驗用雛雞,在舍溫28~34℃,相對濕度為75%~85%條件下用正常配合飼料飼養(yǎng)1周。7日齡時對雛雞進行新城疫Lasota系活疫苗點眼和滴鼻免疫。將1周齡雛雞隨機分為3組,每組30只,3組雞平行墊料隔離飼養(yǎng),設(shè)1組為對照組不投放任何藥物,其余2組為試驗組(1)與試驗組(2),分別飲用0.2%和0.5%復(fù)方磺胺喹惡啉鈉鹽溶液,自由采食,飼喂至21日齡。1.3撲殺雞ndv檢測(1)按上述飼養(yǎng)條件,3組分別進行飼養(yǎng)。14日齡時各組分別取15只雛雞撲殺,觀察組織器官病變;21日齡撲殺剩余試驗組和對照組雛雞,觀察組織器官病變。各組雛雞在撲殺前分別稱重,并逐個采血,分離血清,通過微量法(HI試驗)測定NDV抗體效價。(2)對撲殺雛雞脾臟、胸腺和法氏囊以電子分析天平分別稱重并記錄重量,按如下方法計算免疫器官指數(shù):免疫器官指數(shù)=免疫器官重量(g)/雞活體重(kg)。內(nèi)臟器官、骨髓和腦組織以10%福爾馬林溶液固定,做病理組織切片,顯微鏡下觀察組織病理變化。(3)取心包液和肝臟做常規(guī)細菌培養(yǎng)檢查,判定細菌感染情況。1.4測試方法1.4.1加樣稀釋方法用2000r/min低速離心機對采取的血液離心5min,取上層血清備用。在96孔V型微量凝集板上進行,用定量稀釋器加樣稀釋。第1孔加入1∶1280倍ND標(biāo)準陽性血清50μl,依次做倍比稀釋至第7孔,棄去最后50μl,第8孔不加抗原做對照。每孔加入50μl的生理鹽水及50μl待檢血清,每孔再加入1%的致敏紅細胞懸液1滴,輕輕搖勻30min后觀察,判定結(jié)果。1.4.2病理學(xué)染色及組織病理學(xué)檢測取所有試驗雛雞的心、肝、脾、肺、腎、胃腸及法氏囊等內(nèi)臟器官,用濃度10%福爾馬林溶液固定12~24h,然后再制成5μm厚的石蠟切片,進行HE染色,生物顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化。1.4.3兩組主觀型雞的一般情況比較2次撲殺前各組隨機挑取2只雛雞的肝臟切面抹片進行革蘭氏染色。在各組雞剖檢時以無菌操作取心包液、肝組織按常規(guī)劃線法接種于普通瓊脂培養(yǎng)基及麥糠凱瓊脂培養(yǎng)基上,經(jīng)37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h,觀察菌落形態(tài)。對照組雛雞生長發(fā)育及雞群的精神狀態(tài)良好,飲食欲正常,增長速度快,個體差異小;試驗組(2)生長發(fā)育不良,雞精神沉郁,擠堆,活動少?？s頸閉眼,糞便呈白色,有的水瀉,采食減少,飲水增多,有的病雞呆立,呈昏睡狀,羽毛蓬亂,體重低于正常發(fā)育雞的水平,雞群均勻度差,個別雛雞虛弱站立不穩(wěn),運動失調(diào),角弓反張。試驗組(1)癥狀稍輕,個別雛雞出現(xiàn)采食減少,飲水增多,精神沉郁,無明顯水瀉癥狀。試驗組雛雞在飲用磺胺喹惡啉鈉溶液后,14及21日齡各組雛雞體重見表1。在14日齡時,試驗組(1)體重最大,其次是對照組,試驗組(2)的體重最小,各組差異不顯著。21日齡體重,對照組體重最大,其次是試驗組(1),試驗組(2)的體重最小,對照組和試驗組(1)在0.05水平上有差異;試驗組(2)顯著低于對照組和試驗組(1)(P<0.05)。這表明:高劑量、長時間應(yīng)用磺胺喹惡啉鈉,雛雞的生長發(fā)育明顯受阻,雞體增重顯著減慢。涂片及在普通瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng),經(jīng)檢查未發(fā)現(xiàn)大腸桿菌、白痢桿菌等病原菌。說明磺胺喹惡啉對細菌感染有很好的預(yù)防作用,試驗雞的病癥與細菌感染無關(guān)。3.1抗菌藥的使用較低含量(0.2%)的磺胺喹惡啉連續(xù)2周飲水,早期雛雞尚不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀,后期有輕微的中毒表現(xiàn)。當(dāng)把劑量提高到0.5%時,則早期就表現(xiàn)明顯的中毒癥狀。較低含量(0.2%)的磺胺喹惡啉連續(xù)2周飲水,對雛雞的生長發(fā)育尚不造成明顯的影響;當(dāng)把劑量提高到0.5%,連用7d雛雞體重明顯低于對照組,用藥至14d時體重顯著低于對照組。高劑量磺胺喹惡啉對雛雞免疫功能的影響極為明顯,表現(xiàn)免疫器官指數(shù)及新城疫抗體水平下降,表明雛雞免疫期間最好不用,尤其是不要高劑量使