種子生產(chǎn)與經(jīng)營專業(yè)小麥電泳圖譜的判讀鑒定一、電泳凝膠的判讀鑒定

該圖采用ISTA

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標(biāo)準(zhǔn)電泳方法分析小麥品種的電泳圖譜。

該方法可將小麥醇溶蛋白分離成大量（20~30）單種成分，并且不同品種具有特異的小麥醇溶蛋白成分的特征譜帶。

這就是區(qū)分和鑒定不同品種的遺傳基礎(chǔ)。

二、小麥電泳圖譜的判讀鑒定頂行分別代表一粒小麥籽粒醇溶蛋白電泳譜帶的小麥品種，共計(jì)10個(gè)小麥品種。圖中示明小麥醇溶蛋白電泳圖譜和品種特征譜帶類型二、小麥電泳圖譜的判讀鑒定第一種將小麥醇溶蛋白電泳圖譜分成4個(gè)區(qū)段，按遷移率順序先后分別稱為α、β、γ、和ω區(qū)段。在每個(gè)區(qū)段，再用數(shù)字編號(hào)每條譜帶，從而形成品種電泳圖譜類型。二、小麥電泳圖譜的判讀鑒定標(biāo)明標(biāo)準(zhǔn)品種3的譜帶。第二種按小麥醇溶蛋白在凝膠上遷移位置給每條譜帶編碼數(shù)字。二、小麥電泳圖譜的判讀鑒定上述兩種譜帶命名系統(tǒng)中已考慮譜帶染色強(qiáng)度（深淺）。二、小麥電泳圖譜的判讀鑒定UPOV（國際植物新品種保護(hù)聯(lián)盟）決定，利用小麥品種測定記錄電泳資料測定遷移值方法來標(biāo)明電泳譜帶。以Apolla小麥品種（品種3）數(shù)條譜帶遷移值測定對(duì)凝膠電泳圖譜進(jìn)行校正。在檢驗(yàn)室可利用分析標(biāo)準(zhǔn)品種和測定特定譜帶遷移值就可對(duì)每次分析凝膠進(jìn)行校正。二、小麥電泳圖譜的判讀鑒定Autyan(1)Bushuk(2)Konarev(3)UPOV(a)2630395253546265686971747781839094991001618.523.53136.537.544.545.547.5505355.5586365.571778287.5ω

9282754341γ

32321β535243221α

71642182126313235545660616367727779879097100表小麥品種中國春主要醇溶蛋白電泳譜帶的幾種命名系統(tǒng)種子生產(chǎn)與經(jīng)營專業(yè)小麥種子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳操作程序

從小麥種子中提取的醇溶蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠的分子篩效應(yīng)和電泳系統(tǒng)的電荷效應(yīng)作用下得到良好的分離，通過顯色顯示蛋白質(zhì)譜帶類型。

不同小麥品種由于遺傳基礎(chǔ)不同，種子內(nèi)所含的蛋白質(zhì)種類也有差異，這種差異可利用電泳圖譜加以鑒別，從而對(duì)品種真實(shí)性和純度進(jìn)行鑒定。一、樣品醇溶蛋白提取

數(shù)取小麥種子，用鉗子逐粒夾碎（夾種子時(shí)墊上小片清潔的紙，以便于清理鉗頭和防止樣品之間的污染），放入離心管中，加入蛋白質(zhì)提取液200μl，充分搖動(dòng)混合，在室溫下提取24h，然后在18000×g條件下離心15min，取其上清液用于電泳。一、樣品醇溶蛋白提取二、凝膠制備

1、組裝電泳槽（前槽接正極，后槽接負(fù)極）。

2、封底縫從冰箱中取出凝膠溶液和過氧化氫溶液，吸取10ml凝膠溶液，加入1滴0.6%過氧化氫，快速搖勻后迅速倒入封口處，稍加晃動(dòng)，使整條縫口充滿膠液，讓其在5~10min內(nèi)聚合封好。3、灌分離膠

吸取45ml凝膠溶液，加入3滴0.6%過氧化氫，迅速搖勻，倒入凝膠板之間，馬上插好樣品梳，讓其在5~10min聚合。二、凝膠制備三、進(jìn)樣

小心抽出樣品梳，用濾紙或注射器吸去樣品槽里中多余的水，然后用微量進(jìn)樣器吸取10~20μl樣品加入樣品槽中（每加一次，用去離子水沖洗進(jìn)樣器兩次）。四、電泳1、在前后槽注入電極緩沖液（前槽浸沒樣品槽，后槽超過鉑絲）。2、打開電泳儀電源，將電壓調(diào)到500v。3、電泳時(shí)，要求在15~20℃溫度下進(jìn)行。

4、電泳時(shí)間一般為60~80min，具體時(shí)間可按甲基綠（電泳的前沿指示劑）遷移時(shí)間來推算，電泳時(shí)間為甲基綠移至前沿所需時(shí)間的2~2.5倍。四、電泳五、染色1、將膠板小心地取下，在染色液中染色1~2d。2、一般情況下不需要脫色，但為使譜帶清晰，可用清水沖洗。六、鑒定