手工費林滴定法測定還原糖的測定

糖原狀法的研究和應用已有一個世紀。很多經(jīng)典的還原糖測定方法如Lane-Eynong、高錳酸鉀滴定等方法至今仍在生產(chǎn)、科研實驗室廣泛使用。在食品及發(fā)酵工業(yè)中,費林試劑滴定法常用來測定糖的含量。其特點是簡單、方便、設(shè)備投入少,如嚴格按操作要求,可以進行準確的測定。但由于反應溫度、搖動力度和次數(shù)、滴定速度等因素對測定都有影響,導致不同測定者之間的測定結(jié)果出現(xiàn)偏差。還原糖測定儀是根據(jù)費林試劑法原理而建立的一種還原糖測定方法,它由自動控制系統(tǒng)控制反應溫度、攪拌力度和滴定速度。本研究對手工費林試劑滴定和還原糖測定儀測定結(jié)果進行了比較,對產(chǎn)生測定誤差的原因進行了探討,為進一步提高費林試劑滴定方法的準確度提供了新的依據(jù)。1材料和方法1.1測試材料1.1.1氧化鈉、酒石酸甲鈉、亞鐵氰化鉀費林甲液:硫酸銅35.0g,1%次甲基蘭5mL,定容至1000mL。費林乙液:氫氧化鈉126.4g,酒石酸甲鈉117.0g,亞鐵氰化鉀9.4g,定容到1000mL。0.203%、0.416%、0.590%、0.822%標準葡萄糖樣品:分別稱取烘干葡萄糖2.03g、4.16g、5.90g、8.22g,定容到1000mL。1.1.2還原糖測定全自動還原糖測定儀SGD-Ш型,山東省科學院中日友好生物技術(shù)研究中心提供。1.2方法1.2.1林永生1.2.1.蘭色體積測定取費林甲乙液各5mL于250mL三角瓶中,加水10mL,并預先加入20mL0.1%標準葡萄糖溶液,混合后于電爐上加熱,使溶液在2min內(nèi)沸騰,用0.1%標準葡萄糖溶液以每分鐘20滴的速度滴定至蘭色剛好消失,記錄滴定體積。1.2.1.葡萄糖溶液滴定取費林試液各5mL,加入樣品及適量0.1%標準葡萄糖溶液,使其接近終點,以下操作如空白。滴定時應用0.1%標準葡萄糖溶液,以不超過1mL為宜,否則應另取樣重做。根據(jù)滴定液的體積計算還原糖含量。1.2.2糖原測量的操作過程(1)啟動時按“開/關(guān)”鍵,自動啟動程序,儀器自動清洗,開機完成。(2)儀器自動定標按定標鍵,費林甲、乙液自動進入反應池。儀器自動進入定標程序,試劑泵啟動后,用微量注射器將1.0%標準葡萄糖溶液100μL注入反應池,完成后儀器自動定標。(3)測量按分析鍵,試劑泵啟動后,用微量注射器將待測葡萄糖樣品注入反應池,自動完成還原糖測定并打印。2測定同一原因樣品的測定結(jié)果分別在6個不同的測定地點(包括生產(chǎn)廠化驗室和專業(yè)分析部門)用費林試劑滴定法測定不同濃度的標準葡萄糖樣品,結(jié)果見表1。采用還原糖測定儀分別于2月2日(測定1)、2月6日(測定2)、2月8日(測定3)、3月13日(測定4)、3月21日(測定5)和3月20日(測定6)6次對不同濃度的標準葡萄糖樣品進行測定,測定結(jié)果見表2。從測試結(jié)果能看出:同一測定地點對不同含量的還原糖測定結(jié)果具有可比性;不同地點對同一還原糖樣品測定結(jié)果差別較大。總體上還原糖測定儀測定的精密度和準確度明顯高于費林試劑滴定法。3還原糖測定系統(tǒng)Fehling氏試劑由Fehling于1848年設(shè)計,即硫酸銅堿性酒石酸甲鈉溶液,是最早用于還原糖測定的試劑。其原理是根據(jù)還原糖將Cu2+還原成Cu2O的量來確定還原糖含量。糖和還原的銅量比列關(guān)系不是常數(shù),而是依反應時銅過量的多少而不同,一般在1∶5~1∶7之間,屬于非化學計量反應。因此,費林試劑測定還原糖需要首先進行標定,根據(jù)標定數(shù)據(jù)表查得相應的還原糖含量。費林試劑滴定時要求保持微沸狀態(tài),目的是為了去除溶解氧對指示劑顏色變化產(chǎn)生的干擾。在滴定時通入氮氣隔絕空氣,就可以避免次甲基藍被空氣中的氧氧化為藍色,保證了滴定結(jié)果的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。臧瑾康等采用自身指示劑既斐林試劑中酒石酸鉀鈉絡(luò)合物的深藍色的消失至K2FeCu((CN)6為終點,取代國標中直接滴定法次甲基蘭指示劑,減少了終點誤差,簡化了操作,節(jié)約了試劑。滴定速度快慢和樣品溶液消耗量多少都會影響測定結(jié)果。在嚴格控制每兩秒一滴的滴定速度下,用0.1%葡萄糖標準溶液滴定10.00mL堿性酒石酸銅溶液(甲、乙液各5.00mL)約消耗10.00mL。當用樣品溶液滴定時也應該消耗10.00mL左右,才能使二者保持條件相同,測定結(jié)果才準確。還原糖測定儀是根據(jù)費林試劑法測定還原糖的原理建立的一種還原糖自動測定系統(tǒng),能自