--PAGE1-123是代1是在（2是可溶性的雜質(zhì)（也就是說(shuō)這些雜質(zhì)在配置樣品時(shí)一樣可了我們使用HC（最簡(jiǎn)單的辦法是在做過樣品后用強(qiáng)洗脫能力的流動(dòng)相看能否再洗脫下來(lái)東西）1、樣品過濾器（過濾不溶性雜質(zhì)2、萃取小柱（過濾可溶性雜質(zhì)或富集作用）流動(dòng)相的處理（我們建議HPLC系統(tǒng)的所有流動(dòng)相都采用UV級(jí)試劑流動(dòng)相應(yīng)通過0.45um的有機(jī)濾膜進(jìn)行過濾（專用溶劑過濾瓶，隔膜將過濾后的流動(dòng)相在超聲波清洗器中進(jìn)行15-20分鐘的脫氣（待用）流動(dòng)相進(jìn)入液相色譜泵時(shí)應(yīng)經(jīng)過2um的流動(dòng)相過濾頭過濾（一般儀、閥最常見的問題就是1單向閥中形成了一個(gè)氣室（有一個(gè)小氣泡在單向閥2由于流動(dòng)相的3（0分鐘，情況應(yīng)該就有所好轉(zhuǎn)，對(duì)于第三種情況就只能換單向閥了。2、柱塞密封在液相色譜泵頭中是非常重要的國(guó)外是要求每500個(gè)小時(shí)就要更、0了負(fù)值就不能夠真實(shí)的反映壓力，應(yīng)該及時(shí)的聯(lián)系生產(chǎn)廠家進(jìn)行維修。系統(tǒng)出了問題，應(yīng)該馬上聯(lián)系生產(chǎn)廠家進(jìn)行維修。m6個(gè)當(dāng)量的稀硝酸里超聲清洗）通常我們從液相色譜泵到進(jìn)樣閥之間的管路內(nèi)徑為0.02英寸，我們的流動(dòng)相經(jīng)進(jìn)樣系統(tǒng)常用消耗產(chǎn)的I進(jìn)樣閥，基本上各家儀器所配的手動(dòng)進(jìn)樣閥都是羅丹尼的。羅丹尼進(jìn)樣閥前面有一個(gè)進(jìn)樣口，后邊有6個(gè)口，分別接的是1，4之間是定量環(huán)，2接泵，3接柱子，5，6是費(fèi)液。在LOAD狀態(tài)樣品由進(jìn)樣口進(jìn)入1，4定量環(huán)，定量環(huán)滿后樣品5流出；當(dāng)進(jìn)樣閥搬到INJECT狀態(tài)時(shí)從泵來(lái)的流動(dòng)相到2再到1帶著樣品經(jīng)過4，3到了色譜柱進(jìn)行分離，在INJECT狀態(tài)下如果把樣品從進(jìn)樣口注入，則直接從6排出，不會(huì)進(jìn)入定量環(huán)和色譜柱。用手動(dòng)進(jìn)樣閥進(jìn)樣時(shí)，分為滿環(huán)進(jìn)樣和部分進(jìn)樣，一般滿環(huán)進(jìn)樣需要進(jìn)定量環(huán)倍以上體積，才能得到一個(gè)比較好的重現(xiàn)性，通常l的定量環(huán)我們用的進(jìn)樣針進(jìn)樣ll的玻璃的進(jìn)樣針進(jìn)l時(shí)是比較準(zhǔn)確的。HATON費(fèi)液管和定量環(huán)的最高點(diǎn)在同一個(gè)水平面，防止定量的不準(zhǔn)確。能夠有效的延長(zhǎng)色譜柱3的壽命色譜保護(hù)系統(tǒng)常用消耗1、在線過濾器它主要的功能是過濾樣品中不溶性雜質(zhì)，它里邊的篩板一般0.2-2um可選，最常用的2um的；當(dāng)沒有接色譜柱時(shí)都有很高的壓力時(shí)清、m粒徑的保護(hù)柱保護(hù)m粒徑的色譜柱，過我在這里要講一下液相色譜柱的保養(yǎng)和再生：（至少要0倍柱體積，正相柱最好保存在正己烷和異丙醇：）的條件下，最好每月沖洗一到兩次。色譜柱當(dāng)用到一定的時(shí)間后會(huì)出現(xiàn)柱效下降，可以做一次簡(jiǎn)單的再生分析樣品時(shí)用純有機(jī)流動(dòng)相硅膠柱：20正己烷-20二氯甲烷-20乙腈-15二氯甲烷-10正己氰基、氨基柱：20二氯甲烷-20異丙醇-20甲醇-15異丙醇-10二氯甲烷：20乙腈-20二氯甲烷-20正己烷-15二氯甲烷-10乙水或水/有機(jī)混合流動(dòng)相時(shí)反相柱（C2、C4、C8、C18、苯基A：常用方法：20去除緩沖鹽的流動(dòng)相-20乙腈-20二氯甲烷-15乙腈-10去除緩B：生物/蛋白類：20去除緩沖鹽的流動(dòng)相-運(yùn)行一個(gè)梯度洗脫（A：0.1%的三氟乙酸水溶液B：0.1%三氟乙酸在1：2的乙腈比異丙醇溶液）30分鐘內(nèi)B到100%--0.1當(dāng)量濃度的稀硝酸：異丙醇（1：4）運(yùn)行40倍柱體積（不能用GPC柱）-101：4的水/異丙醇20緩沖鹽溶液-20HPLC水-20倍0.1MEDTA-20HPLC水-20乙腈-20氰基柱：20HPLC水-20乙腈-20二氯甲烷-15乙腈-10水系統(tǒng)也是非常重要的。格較貴，國(guó)產(chǎn)柱溫箱的恒溫效果稍差，但是除了示差外基本都能滿足工作。色譜柱把樣品經(jīng)過分離后進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)，我們最常用的檢測(cè)器是紫外檢測(cè)器，（由于它靈敏度與教多的限制正在逐步被蒸發(fā)光散射檢測(cè)器所取代熒光檢測(cè)器，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。我們這里只是講一下UV檢測(cè)器40用0后能量會(huì)迅速m純甲醇的條件下比值應(yīng)在0氘燈的能量已經(jīng)不足了。樣品池的清洗：主要是將色譜柱和保護(hù)柱取下，將進(jìn)樣閥和檢測(cè)器直接連接用個(gè)當(dāng)量的稀硝酸沖洗0分鐘，然后用純水沖0分鐘再用甲醇沖0不能沖洗干凈，可放到超聲波清洗器中超聲0受壓力只有，如果壓力過高就會(huì)將檢測(cè)池沖爆，到時(shí)就只有更換。溶劑回收、樣品回收裝樣品經(jīng)過HC譜圖來(lái)分析問題出在什么地方。怎樣解決。問題一，色譜峰不寬樣品的濃度過高（稀釋檢測(cè)器流通池體積過大（通常用于分析用的流通池是9ul的，不能將制（重新檢查所有的接頭有沒有到位通常由泵到進(jìn)樣閥是采用.2英寸的不銹鋼管，由進(jìn)樣閥到色譜柱采用.1英寸的管子，由色譜柱到檢測(cè)器用.1英寸或更細(xì)的管子。樣品在進(jìn)樣閥中擴(kuò)散（通常是進(jìn)樣的前后打進(jìn)了氣泡造成的柱效差（更換新色譜柱保留時(shí)間過長(zhǎng)（在滿足分離度的前提下，提高流動(dòng)相的洗脫能力（.H際上并不被認(rèn)可）檢測(cè)器還沒有平部分峰重疊（有可能前一針的峰和后一針的峰重疊了鬼峰（也就是突然多出來(lái)的峰（沖洗柱子。（少進(jìn)樣量）流動(dòng)相中緩沖鹽對(duì)色譜柱的氧化（每天做完實(shí)驗(yàn)必須沖洗色譜柱樣品中有未知的干擾組分（根據(jù)需要處理負(fù)存在于示差檢測(cè)器中溶劑吸收能力小于流動(dòng)紫外檢測(cè)器中流動(dòng)相的紫外吸收小于流動(dòng)某種組分的影響（受激發(fā)，或紫外吸收小于流動(dòng)相雙峰（肩峰柱清洗篩板或更換保護(hù)柱芯有干擾組分—對(duì)樣品進(jìn)行前處理或更換色譜柱與流動(dòng)相達(dá)到分也有可能是前一針的峰現(xiàn)在剛出進(jìn)樣量過大，色譜柱超載減小進(jìn)樣色譜柱塌陷有空隙或單向閥有回流更比如流動(dòng)相是90醇（建議在有可能的情況下盡量用接近流動(dòng)相的試劑來(lái)配置樣品）樣品體積太大通常我們要求進(jìn)樣的體積小于柱體積的轉(zhuǎn)子密封泄露—更換進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子密峰前色譜柱有塌陷修補(bǔ)或更進(jìn)樣量過大，色譜柱超載減小進(jìn)樣峰拖前面的峰沒有出（情況）硅膠基質(zhì)的色譜柱在高PH值的流動(dòng)相下降解（選用特殊的色譜柱或高硅膠柱在高溫下降解（通常我們使用硅膠基質(zhì)的色譜柱溫度不超過度死體積的存在（檢查自進(jìn)樣閥以后的所接頭色譜柱有死體積——更換或修尖峰（直上直下的峰就會(huì)膨脹出小氣泡進(jìn)入檢測(cè)器-所以所有的高壓混合裝置的檢測(cè)器出口都應(yīng)該有背壓調(diào)節(jié)器色譜柱存放時(shí)沒有堵死色譜柱兩端，內(nèi)部干涸了。用甲醇沖問題二泄接頭松了，或者卡套要更換檢測(cè)器密封處泄轉(zhuǎn)子密封壞問題三重現(xiàn)性差進(jìn)樣器（自動(dòng)）流路堵檢測(cè)器衰減設(shè)置太前面的樣品吸附在進(jìn)樣系統(tǒng)或色譜柱中現(xiàn)在被沖了下定量不準(zhǔn)（用大的注射器進(jìn)更多的樣，最后不要推到底峰的檢測(cè)范圍在檢測(cè)器的線性范圍以樣品在制備過程中有丟問題四保留時(shí)間的變化含緩沖鹽的流動(dòng)相還沒有平衡（或緩沖鹽濃度不夠色譜柱受到了污染（再生，或更換梯度系統(tǒng)平衡時(shí)間不夠或流動(dòng)相的極性改變后還沒有平衡（衡的）流動(dòng)相沒有混合均樣品在色譜柱中的吸附還沒有平流動(dòng)相中有揮發(fā)成色譜柱溫度沒有恒譜柱（變短）泵的流速不穩(wěn)樣品在色譜柱中滿負(fù)荷—減少進(jìn)樣量；用直徑更粗的色譜流動(dòng)相的PH值過高或過低建議硅膠基質(zhì)的色譜柱使用范圍在2-8之流動(dòng)相配置時(shí)有所改樣品與色譜柱有反應(yīng)-不能被洗脫（換更強(qiáng)的洗脫流動(dòng)相問題六平衡問議用短鏈的離子對(duì)試劑，或平衡更長(zhǎng)的時(shí)間。梯度系統(tǒng)色譜柱的平衡時(shí)間不離子對(duì)試劑平衡時(shí)間不夠——一般離子隊(duì)試劑需要50倍柱體積的沖洗才能流動(dòng)相的平衡時(shí)間不問題七基線問無(wú)樣品峰時(shí)跳動(dòng)流動(dòng)相中有氣泡或樣品極性與流動(dòng)相極性差別太基線漂移—梯度洗脫中流動(dòng)相某種組分的紫外吸收比較色譜柱有污染或流通池有污基線呈波浪形