秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則1（優(yōu)選）秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則（優(yōu)選）秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則2直接病毒診斷細(xì)胞病理學(xué)方法:光鏡下檢查病變組織或脫落細(xì)胞中的特異性病毒包涵體，DNA病毒在核內(nèi)裝配產(chǎn)生核內(nèi)包涵體，RNA病毒在胞漿裝配產(chǎn)生胞漿包涵體電子顯微鏡法:負(fù)染法（重金屬染液，電子光束通過(guò)低電子密度的病毒顆粒但不能通過(guò)金屬背景，病毒顆粒明亮清晰，負(fù)反差）、超薄切片法、immuneelectronmicroscope（抗體處理病毒顆粒形成病毒抗體復(fù)合物凝聚成團(tuán)，高速離心負(fù)染后觀察）

病毒抗原檢測(cè):胞內(nèi)病毒抗原的檢測(cè)免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)胞外（游離）病毒抗原的檢測(cè)ELISA病毒核酸檢測(cè)核酸雜交技術(shù)斑點(diǎn)分子雜交法、Southern印跡法、原位分子雜交法、Northern印跡法聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）直接病毒診斷細(xì)胞病理學(xué)方法:光鏡下檢查病變組織或脫落細(xì)胞中的3（1）標(biāo)本處理

組織、細(xì)胞粗提將沉渣、細(xì)菌、真菌等去除，釋

放病毒，有的還需要提純濃縮

體液腦脊液、胸腔液、水泡液、尿液等直接接種培

養(yǎng)管

拭子咽、眼、鼻拭子直接放入含有抗生素的培養(yǎng)管病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（1）標(biāo)本處理

組織、細(xì)胞粗提將沉渣、細(xì)菌、真菌等去除，釋

41動(dòng)物接種2雞胚接種雞胚對(duì)多種病毒敏感，羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊、絨毛尿囊膜3組織培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)傳1～10代二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳50～100代傳代細(xì)胞培養(yǎng)三大培養(yǎng)方法（2）分離培養(yǎng)方法器官培養(yǎng)組織培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)

1動(dòng)物接種2雞胚接種雞胚對(duì)多種病毒敏感，羊膜腔、尿囊5秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則優(yōu)質(zhì)課件6常用的細(xì)胞培養(yǎng)常用的細(xì)胞培養(yǎng)71CPE2hemadsorption病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo)正常細(xì)胞病變細(xì)胞（3）病毒的鑒定流感病毒和某些副粘病毒感染細(xì)胞后24～48小時(shí)，在細(xì)胞膜上出現(xiàn)病毒的血凝素，能吸附動(dòng)物及人的紅細(xì)胞1CPE2hemadsorption病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指82、50%感染量ID50

或50%組織細(xì)胞感染量TCID50（

tissuecultureinfectivedose50）估計(jì)病毒感染性的強(qiáng)弱及含量，不能準(zhǔn)確地測(cè)定感染性病毒顆粒的數(shù)量

病毒感染雞胚、動(dòng)物或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小病毒量病毒樣本作10倍連續(xù)稀釋

病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶（瓊脂限制病毒的擴(kuò)散），稱(chēng)蝕斑。一個(gè)蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制增殖后形成的，稱(chēng)蝕斑形成單位（plaqueformingunit，PFU），病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位來(lái)表示（4）病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定1、蝕斑測(cè)定比較準(zhǔn)確地測(cè)定感染性病毒顆粒的多少2、50%感染量ID50或50%組織細(xì)胞感染量TCID59秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則優(yōu)質(zhì)課件10胞外（游離）病毒抗原的檢測(cè)ELISA（1）天然被動(dòng)免疫：通過(guò)胎盤(pán)的IgG和初乳中的IgA；載體病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、HSV1原代細(xì)胞培養(yǎng)傳1～10代原代細(xì)胞培養(yǎng)傳1～10代減毒活疫苗（attenuatedlivevaccine）利用DNA重組技術(shù)，將編碼病毒抗原的基因插入到另一無(wú)毒力的載體病毒，使之高效表達(dá)消除腫瘤病毒的潛在的致癌作用部分肽只激發(fā)B細(xì)胞表位，缺乏激發(fā)TH細(xì)胞的表位包涵體，DNA病毒在核內(nèi)裝配產(chǎn)生核內(nèi)包涵體，抗獨(dú)特型抗體疫苗（antiidiotypevaccine）

病毒的血清學(xué)診斷

最有特異性中和試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)免疫擴(kuò)散等免疫標(biāo)記技術(shù)流感病毒與患者血清中抗HA抗體（中和抗體）結(jié)合后，紅細(xì)胞表面的糖蛋白受體就不能與HA結(jié)合，血凝現(xiàn)象被抑制。雙份血清同時(shí)做血凝抑制試驗(yàn)，恢復(fù)期抗體效價(jià)比急性期高4倍或以上可確診胞外（游離）病毒抗原的檢測(cè)ELISA病毒的血清學(xué)診斷11DiagnosisStrategyforViralInfectionDiagnosisStrategyforViralI12不同肽免疫活性有差異?；钜呙纾╨ivevaccine）秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則利用DNA重組技術(shù)，定向缺失病毒基因組的某一區(qū)段，使病毒喪失毒力而保留增殖能力和免疫原性亞單位疫苗（subunitvaccine）物理或化學(xué)方法滅活病毒。DiagnosisStrategyforViralInfection成功的范例1961年我國(guó)應(yīng)用脊灰疫苗，脊灰發(fā)病率大幅度下降。物理或化學(xué)方法滅活病毒。病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶（瓊脂限制病毒的擴(kuò)散），稱(chēng)蝕斑。變異株可能回復(fù)到有毒力的野生株不含病毒核酸，僅有能誘導(dǎo)中和抗體的衣殼蛋白或包膜表面抗原。ELISAforHIVantibody

不同肽免疫活性有差異。ELISAforHIVantib13利用DNA重組技術(shù)，將編碼病毒抗原的基因插入到另一無(wú)毒力的載體病毒，使之高效表達(dá)秦病毒感染的檢測(cè)方法與防治原則不含病毒核酸，僅有能誘導(dǎo)中和抗體的衣殼蛋白或包膜表面抗原。病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶（瓊脂限制病毒的擴(kuò)散），稱(chēng)蝕斑。將野毒株表面抗原基因與弱毒株其他基因組合而獲得減毒活病毒原位分子雜交法、Northern印跡法減毒活疫苗（attenuatedlivevaccine）包涵體，DNA病毒在核內(nèi)裝配產(chǎn)生核內(nèi)包涵體，利用DNA重組技術(shù)，將編碼病毒抗原的基因插入到另一無(wú)毒力的載14

免疫預(yù)防1、人工被動(dòng)免疫（1）天然被動(dòng)免疫：通過(guò)胎盤(pán)的IgG和初乳中的IgA；（2）人工被動(dòng)免疫：

1）人胎盤(pán)或人血中提取出的免疫球蛋（IgG）；

2）康復(fù)期病人的血清或高效價(jià)免疫血清（SARS

病人恢復(fù)期血清）病毒感染的防治免疫預(yù)防1、人工被動(dòng)免疫病毒感染的防治15人工主動(dòng)免疫滅活疫苗：乙腦疫苗狂犬病疫苗流感滅活疫苗HAV，HBV疫苗等減毒活疫苗：脊髓灰質(zhì)炎疫苗麻疹疫苗腮腺炎疫苗風(fēng)疹疫苗HAV疫苗亞單位疫苗：流感疫苗、乙肝疫苗人工主動(dòng)免疫滅活疫苗：乙腦疫苗狂犬病疫苗流感滅活疫苗HAV，16人工主動(dòng)免疫－病毒疫苗減毒活疫苗（attenuatedlivevaccine）滅活疫苗（inactivatedvaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）基因工程疫苗（geneengineeredvaccine）基因工程亞單位疫苗（geneengineeredsubunitvaccine）基因工程載體疫苗（geneengineeredvectoredvaccine）基因缺失活疫苗（genedeletedlivevaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）。合成肽疫苗（syntheticpeptidevaccine）抗獨(dú)特型抗體疫苗（antiidiotypevaccine）人工主動(dòng)免疫－病毒疫苗減毒活疫苗（attenuatedl17活疫苗（livevaccine）減毒活疫苗基于基因工程技術(shù)的新型活疫苗遺傳重組活疫苗基因缺失活疫苗載體活疫苗活疫苗（livevaccine）減毒活疫苗18減毒活疫苗(attenuatedlivevaccine)自然或人工選擇法（如Ts株）所篩選的對(duì)人低毒或無(wú)毒的變異株，如脊灰、流感、麻疹的減毒株優(yōu)點(diǎn)模擬自然感染，免疫效果好，局部IgA。理論上的缺點(diǎn)，實(shí)際工作中少見(jiàn)變異株可能回復(fù)到有毒力的野生株如果機(jī)體免疫缺陷，減毒株仍可能引起感染或并發(fā)癥可能激活機(jī)體內(nèi)其它病毒的感染減毒活苗可能引起持續(xù)感染成功的范例1961年我國(guó)應(yīng)用脊灰疫苗，脊灰發(fā)病率大幅度下降。1980年天花病毒滅絕減毒活疫苗(attenuatedlivevaccine)19遺傳重組活疫苗將野毒株表面抗原基因與弱毒株其他基因組合而獲得減毒活病毒適用于基因組分節(jié)段雙鏈RNA病毒，如流感病毒、輪狀病毒等遺傳重組活疫苗將野毒株表面抗原基因與弱毒株其他基因組合而獲得20基因缺失活疫苗利用DNA重組技術(shù)，定向缺失病毒基因組的某一區(qū)段，使病毒喪失毒力而保留增殖能力和免疫原性?xún)?yōu)點(diǎn)疫苗株的遺傳背景清楚，不易突變回到野毒株基因缺失活疫苗利用DNA重組技術(shù)，定向缺失病毒基因組的某一區(qū)21載體活疫苗利用DNA重組技術(shù)，將編碼病毒抗原的基因插入到另一無(wú)毒力的載體病毒，使之高效表達(dá)易建立多價(jià)疫苗載體病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、HSV1載體活疫苗利用DNA重組技術(shù)，將編碼病毒抗原的基因插入到另一22滅活疫菌（inactivatedvaccine）滅活全病毒疫苗亞單位疫苗合成肽病毒疫苗基因工程疫苗獨(dú)特型病毒疫苗核酸疫苗滅活疫菌（inactivatedvaccine）滅活全病毒23滅活全病毒疫苗物理或化學(xué)方法滅活病毒。適用烈性或易變異病毒如乙腦病毒、狂犬病病毒、流感病毒，常用甲醛液作為滅活劑優(yōu)點(diǎn)生產(chǎn)簡(jiǎn)單、易保存運(yùn)輸缺點(diǎn)需要大量培養(yǎng)病毒，成本高無(wú)局部抗體，不激活CTL，可激活TDTH甲醛滅活的麻疹病毒和RSV疫苗可加重疾病，機(jī)制不詳滅活全病毒疫苗物理或化學(xué)方法滅活病毒。適用烈性或易變異病毒如24亞單位疫苗（subunitvaccine）種類(lèi)化學(xué)方法制備如HBsAg和流感HA基因工程亞單位疫苗優(yōu)點(diǎn)不含病毒核酸，僅有能誘導(dǎo)中和抗體的衣殼蛋白或包膜表面抗原。免除了回復(fù)突變和交叉復(fù)活的可能消除腫瘤病毒的潛在的致癌作用亞單位疫苗（subunitvaccine）種類(lèi)25合成肽病毒疫苗人工合成病毒保護(hù)性抗原決定簇肽段優(yōu)點(diǎn)