一、裝柱裝柱子（添硅膠)時(shí)，常用的有兩種方法:即濕法裝柱和干法裝柱,二者各有好壞。無論干法仍是濕法，硅膠（稱為固定相更加廣義）的上表面必定要平坦，而且硅膠(固定相）的高度一般為15cm左右（長度沒有絕對(duì)之說,依據(jù)自己狀況而定，制備的大柱能夠長達(dá)一米）,很短了可能分別成效不好,太長了也會(huì)因?yàn)閿U(kuò)散或拖尾致使分別成效不好。濕法裝柱是先把硅膠用適合的溶劑拌勻后，再填入柱子中，而后再加壓（土方法能夠用養(yǎng)魚的氧氣泵加壓或是用氮?dú)?，自然不加壓也能?用淋洗劑”走柱子”，本法最大的長處是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒有氣泡。(我一般都用濕法裝柱)干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，而后再輕輕敲打柱子雙側(cè)（濕法也要敲的，成效好點(diǎn)），至硅膠界面不再降落為止，而后再填入硅膠至適合高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會(huì)使得柱子裝的很結(jié)實(shí)（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。接著是用淋洗劑”走柱子"，一般淋洗劑是采納TLC剖析獲得的睜開劑的比率再稀釋一倍后的溶劑.往常上邊加壓，下邊再用油泵抽,這樣能夠加迅速度。干法裝柱較方便，但最大的缺點(diǎn)在于"走柱子”時(shí)，因?yàn)槿軇┖凸枘z之間的吸附放熱(能夠用手摸柱子顯然感覺到）（梯度洗脫時(shí)，濕法裝柱也會(huì)出現(xiàn)該狀況，比較不好辦理，能夠遲緩改變?nèi)軇抑糜谕L(fēng)處），簡單產(chǎn)生氣泡，這一點(diǎn)在使用低沸點(diǎn)的淋洗劑時(shí)如乙醚（用乙醚最最顯然），二氯甲烷更加明顯。固然產(chǎn)生的氣泡在加壓的狀況下不易覺察,可是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時(shí)候，氣泡就會(huì)開釋出來，嚴(yán)重時(shí),整個(gè)柱子變花,樣品不可以能平坦地經(jīng)過，自然也就談不上分別了。解決的方法是:第一、硅膠必定要壓結(jié)實(shí)；第二、必定要用許多的溶劑”走柱子",必定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。也有介紹在硅膠的最上層填上一小層石英砂（我一般墊張濾紙，撒上石英砂，再放些棉花)，防備增添溶劑的時(shí)候，使得樣品層不再齊整。但我的感覺是假如當(dāng)心上樣，增添溶劑，則沒有這個(gè)必需。二、上樣上樣也有干法和濕法之分:干法（也稱硅膠制沙)就是把待分其余樣品用少許溶劑溶解后，在加入少許硅膠,拌勻后再旋去溶劑。這樣獲得的粉末再當(dāng)心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但能夠保證樣品層很平坦。（我一般喜愛用這類方法，除非不可以用)濕法上樣就是用少許溶劑（最好就是睜開劑，假如睜開劑的溶解度不好，則能夠用一極性較大的溶劑,但一定少許）將樣品溶解后,再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移獲得的溶液,沿著層析柱內(nèi)壁平均加入。而后用少許溶劑清洗后,再加入。濕法較方便,但不溶劑讓其完整被硅膠平均吸附，不簡單跑的很平坦柱層析重點(diǎn)在于柱子能否裝好（這是最大影響要素）和淋洗劑能否選擇適合。而淋洗劑的選擇則是經(jīng)過TLC確立.這里要指出的一點(diǎn)是:TLC（作用仍是很大的）的作用除了追蹤反響進(jìn)度，檢測(cè)試劑和原料純度外,一個(gè)重要的用途就是為柱層析選擇適合的淋洗劑。上樣完成后，接著即用淋洗劑淋洗。淋洗劑一般采納TLC剖析獲得的睜開劑的比率再稀釋一倍后的溶劑。因?yàn)閷游鲋捅“宓牟灰粯?，即便二者使用的硅膠都同樣,可是在把TLC剖析獲得的睜開劑用在柱層析時(shí),也顯得極性偏大，所以要稀釋一倍，但又不可以稀釋太多，不然成了靠擴(kuò)散作用來分別，成效也不會(huì)好。（這一點(diǎn)很適用,可是有些特別狀況也不必定，假如要保險(xiǎn)能夠先做根小柱子跑一下,這樣最安全,就是花點(diǎn)時(shí)間）三、采集主要依賴TLC（聽說外國有石英柱，直接用熒光燈照能看出來，可是太貴了，在國內(nèi)不必定合用），需要牢記的是：第一、某種樣品在這類睜開劑中只顯示一個(gè)點(diǎn)，其實(shí)不等于在其余睜開劑中也只顯示一個(gè)點(diǎn)。所以在找尋睜開劑時(shí)，多試試幾種比率不一樣，成分不一樣的睜開劑。睜開劑的極性太小，點(diǎn)分不開，極性太大，也分不開。一般以目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值在0.3左右為最正確.第二、點(diǎn)不可以點(diǎn)得太濃（在最后時(shí)應(yīng)當(dāng)點(diǎn)的濃點(diǎn),這樣看看有無收盡產(chǎn)品），不然簡單重疊,不易判斷,因?yàn)榧偃鐑蓚€(gè)點(diǎn)鄰近的話,一濃就變?yōu)橐粋€(gè)點(diǎn)了.第三、板上點(diǎn)的睜開的清楚程度和溶劑的極性和物質(zhì)在該溶劑中的溶解性相關(guān)，只有二者比較合方才能有一個(gè)交好的分別成效.選擇適合的睜開劑是首要任務(wù)。一般常用溶劑依據(jù)極性從小到大的次序擺列大體為：石油迷<己烷<苯<乙醚睜開劑的比率要靠試試。一般依據(jù)文件（這是首選)中報(bào)導(dǎo)的該類化合物用什么樣的睜開劑,就第一試試使用該類睜開劑，而后不停試試比率，直到找到一個(gè)分別成效好的睜開劑.好多時(shí)候，睜開劑的選摘要靠自己不停變換睜開劑的構(gòu)成來達(dá)到最正確效果。不可以能夠試試兩兩混淆，三者混淆，一般把兩種溶劑混淆時(shí),采納高極性/低極性的體積比為1/3的混淆溶劑，假如有分開的跡象,再調(diào)整比率，達(dá)到最正確成效，假如沒有分開的跡象，最好是換溶劑。在利用TLC追蹤反響時(shí)，在點(diǎn)板的時(shí)候常常是反響系統(tǒng)的混和溶液點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)A,每種難揮發(fā)的原料各點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)B，C，D等等，而后全部的原料和反響系統(tǒng)的混淆溶劑再共同點(diǎn)一個(gè)混淆點(diǎn)X，這些點(diǎn)在板上的地點(diǎn)如下圖：AXBCD這樣的利處是睜開后能夠清楚地看見每個(gè)點(diǎn)的地點(diǎn)，把A這個(gè)點(diǎn)睜開后的各個(gè)層份的點(diǎn)與B，C,等原料比較,進(jìn)而判斷原料消逝沒有,點(diǎn)混淆點(diǎn)X的目的在于，方便察看,因?yàn)橛袝r(shí)，板睜開后，各點(diǎn)的地點(diǎn)有些變形,或許因?yàn)檫呇匦?yīng)等等,使得判斷不易.(我喜愛用小板，跑的快,很快見到結(jié)果,為了防止小板的邊沿，用機(jī)器板較好）利用TLC判斷物質(zhì)的純度時(shí),假如不可以完整確立，能夠再聯(lián)合其余檢測(cè)手段，如NMR，因?yàn)槟撤N樣品在這類睜