艾灸-層析法保護(hù)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的大鼠糖尿病早期肝損傷

扁桃體是科友甲科植物。黃酮類化合物具有降糖、降脂、清除自由基、保護(hù)細(xì)胞損傷等多種生物學(xué)活性。在初始研究中，提出了多酚類抗生素可降低糖尿病大鼠和大鼠的血糖水水平，并改變糖尿病小鼠的肝臟器官指數(shù)。本文的目標(biāo)是研究多酚類抗生素對(duì)早期大鼠肝臟損傷的保護(hù)作用。1材料表面1.1料液比的確定香椿子Toonasinensis(A.juss.)Roem.購于安徽亳州,適當(dāng)粉碎,70%乙醇浸泡24h,經(jīng)70%乙醇提取,重復(fù)3次,提取料液比分別為1∶1.2,1∶1,1∶1,提取時(shí)間1h,45min,45min,合并濾液。,AB-8大孔樹脂純化,福林酚法測(cè)定多酚的含量,所得香椿子多酚提取物中多酚含量為49.04%。1.2藥物和試劑鏈脲佐菌素:Sigma(進(jìn)口分裝),格列本脲(天津太平洋制藥有限公司),血糖試劑盒(上海榮盛生物技術(shù)有限公司)。1.3動(dòng)物1.4全自動(dòng)生化分析方法自動(dòng)平衡離心機(jī):LDZ5-2型(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);電子天平MP200A型(上海良平儀器廠);日立Hitachi7170A型全自動(dòng)生化分析儀;自動(dòng)血糖儀與試紙條,羅氏-羅康全優(yōu)越型血糖儀及試紙;脫水機(jī)TP1020(德國徠卡公司);超薄切片機(jī)ULTRACUTR(奧地利萊卡/武漢進(jìn)出口);多功能顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)DMR(德國Leica公司)。2方法2.1血糖檢測(cè)方法SD大鼠,60只,適應(yīng)性飼養(yǎng)7d,按體重隨機(jī)分為正常組和造模組,取8只作為正常組,將另外52只,禁食不禁水12h,按55mg·kg-1ip(2%)鏈脲佐菌素,注射72h后,禁食12h,用血糖儀檢測(cè),血糖濃度高于11.1mmol·L-1者作為高血糖組納入實(shí)驗(yàn)。2.2理法標(biāo)準(zhǔn)下中央原理下中央部5,5.0規(guī)15.5%5.5%5.110.5%5.25%的目標(biāo)函數(shù)將高血糖大鼠隨機(jī)分為模型組(0.5%羧甲基纖維素鈉)、香椿子多酚高、低劑量組(75,45mg·kg-1)及格列本脲組(10mg·kg-1)。另外正常組給藥同等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉,每天下午6點(diǎn)給藥,連續(xù)給藥14d。2.3血清動(dòng)脈測(cè)定末次給藥后禁食12h,用10%水合氯醛麻醉大鼠,腹主動(dòng)脈取血,3500r·min-1離心10min,取上層血清,保存于-55℃冰箱,用于各種血清學(xué)測(cè)定。迅速解剖大鼠,肝臟用4%多聚甲醛固定,脫水,常規(guī)石蠟包埋。2.4觀察指標(biāo)和方法2.4.1影響糖尿病大鼠的糖含量在造模后3d、給藥7d用血糖儀及試紙測(cè)定大鼠空腹12h血糖,給藥14d后禁食不禁水12h,用葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖含量。2.4.2影響糖尿病大鼠肝臟器官的指數(shù)大鼠處死,取大鼠肝臟,用冰生理鹽水漂洗,用濾紙吸干水分,電子天平測(cè)定肝臟質(zhì)量,計(jì)算臟器指數(shù)。2.4.3影響糖尿病大鼠肝臟的功能2.4.4肝組織病理學(xué)觀察大鼠處死,迅速取肝臟,生理鹽水漂洗,濾紙擦干,4%多聚甲醛固定,二甲苯脫水,常規(guī)石蠟包埋,切片,常規(guī)HE染色,觀察大鼠肝臟形態(tài)變化。本實(shí)驗(yàn)將肝組織病變程度分為4級(jí):(-)肝小葉沒有變性;(+)肝細(xì)胞變性累及肝組織的1/3以下的肝小葉或僅見個(gè)別肝細(xì)胞變形;(ue0d1)肝細(xì)胞變性累及肝組織的2/3至1/3的肝小葉;(ue0d2)肝細(xì)胞變性累及肝組織的2/3以上的肝小葉并且程度較重。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料以u(píng)e0af±s表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,組間比較采用單因素方差分析,病理組織學(xué)檢查結(jié)果采用Ridit分析方法,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1對(duì)大鼠血糖的影響與正常組相比,模型組大鼠血糖有顯著性升高(P<0.01),在試驗(yàn)過程中血糖比較平穩(wěn),香椿子多酚高、低劑量組從第7天開始能顯著降低糖尿病大鼠血糖水平(P<0.05),第14天高劑量組降血糖水平和陽性藥相當(dāng)。見表1。3.2對(duì)肝臟臟器指數(shù)的影響與正常組比,模型組大鼠肝臟指數(shù)顯著升高(P<0.01),說明鏈脲佐菌素能造成大鼠肝臟臟器指數(shù)升高。與模型組比較,香椿子多酚高劑量組可顯著降低大鼠肝臟指數(shù)(P<0.05),但是未能降低到正常水平。陽性組和低劑量組臟器指數(shù)與模型組比較,差異沒有顯著性。見表2。3.3對(duì)0.4重組病毒alt及ast含量的影響與正常組相比,糖尿病模型組ALT和AST含量顯著升高(P<0.05),但是陽性組及香椿子多酚高、低劑量組不能顯著降低ALT及AST含量。3.4格列本10.2對(duì)香港特區(qū)細(xì)胞形態(tài)的影響肉眼觀,兩組大鼠肝臟色澤基本相同。各組肝臟病理切片HE染色結(jié)果顯示,正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,中央靜脈結(jié)構(gòu)完好,細(xì)胞索呈放射狀排列,細(xì)胞排列整齊,胞質(zhì)均勻,匯管區(qū)未見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);模型組肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂,細(xì)胞體積增大,內(nèi)見大小不等的脂滴空泡。局部有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較,格列本脲10mg·kg-1組肝細(xì)胞形態(tài)未見明顯改善,香椿子多酚75,45mg·kg-1組鏡下肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)有所恢復(fù),但未恢復(fù)至正常水平。各組大鼠肝臟病理變化見表4。4對(duì)大鼠肝臟病理的影響肝臟是調(diào)節(jié)糖代謝的重要器官,肝損害是常見的糖尿病慢性并發(fā)癥之一,糖尿病合并肝損害時(shí)肝臟糖代謝出現(xiàn)紊亂,使血糖進(jìn)一步升高,形成惡性循環(huán)。糖尿病性肝臟損害啟動(dòng)因素為高血糖、高血脂,繼發(fā)氧化應(yīng)激致肝細(xì)胞二次打擊是其發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素。本實(shí)驗(yàn)研究證明,與正常組比較,模型組大鼠有血清轉(zhuǎn)氨酶改變及肝臟病理損傷;香椿子多酚高、低劑量組能改善肝臟病理改變,但是不能降低血清轉(zhuǎn)氨酶水平。說明香椿子多酚對(duì)糖尿病大鼠早期肝臟病理形態(tài)改變?cè)缬谘遛D(zhuǎn)氨酶改變。格列本脲組未能改善糖尿病大鼠肝臟病理改變,這說明格列本脲不是通過變肝臟糖代謝過程來發(fā)揮降血糖作用的,這與現(xiàn)有研究相符。香椿子多酚能降低糖尿病大鼠血糖,改善肝臟