不同來源丹參種質(zhì)生物學性狀及藥效成分分析

丹參是嘴唇科的一種重要中藥。它具有活血化瘀、消腫脹、止痛、滋陰安神等功效。丹參根包含丹參素、丹參酮等療效成分，對治療冠狀動脈粥樣硬化、心絞痛和心腦血管疾病有良好療效。同時，它還具有抗菌消炎、保肝、改善腎功能的作用。隨著臨床需求的增加，丹參的種植面積不斷擴大。不同的丹參資源在不同的地區(qū)和條件下非常不同。一些地方也有替代產(chǎn)品，很難保證丹參產(chǎn)品的質(zhì)量。為了達到“優(yōu)質(zhì)、安全、有效、可控”的丹參產(chǎn)品目標，我們在丹參對照過程中研究了不同丹參資源的生物學特性和治療效果，為選擇優(yōu)良丹參資源和建立合理的品種組合提供了重要依據(jù)。1材料和方法1.1材料來源及材料來源將8個不同來源的丹參種質(zhì)于2002年12月栽種于陜西商洛天士力植物藥源基地,所有種質(zhì)材料均由陜西商洛天士力植物藥業(yè)有限公司藥源基地收集、提供,各丹參品系的名稱如表1所示.1.2方法1.2.1年地表氣候商洛位于秦嶺南麓,陜、豫、鄂三省交界處,屬亞熱帶向暖溫帶過渡地帶季風性半濕潤山地氣候,一年四季分明,雨熱同期,夏無酷暑,冬無嚴寒.自古以來是丹參的地道產(chǎn)區(qū)之一.年平均氣溫7.8～13.9℃,元月平均氣溫1.3℃,7月平均氣溫24.8℃,年大于0℃積溫5001.9～4484.7℃,大于10℃積溫4299.8～3765℃,無霜期為173～218d.年降水量710～930mm,日照1860～2130h,試驗區(qū)海拔700～1000m;土壤類型為淤積沙土,有較肥厚的腐殖質(zhì)層,厚20～60cm,pH值在6.58～7.0之間,有機質(zhì)0.1～0.2g/kg.1.2.2試驗設(shè)計和處理選擇排灌方便、土壤肥力中等均勻、地面平整的沙壤土,施磷酸二銨作基肥625kg/hm2.返青后追施尿素120kg/hm2.試驗小區(qū)面積15m2,3次重復(fù),隨機區(qū)組排列,于2002年12月栽種,密度30cm×30cm.其他管理方法與一般大田相同.1.2.3產(chǎn)量性狀調(diào)查方法返青成活后隨機選取12株有代表性的植株掛牌名稱,定點觀察,在不同的生長發(fā)育階段觀察記錄物候期和植株葉片、花朵和莖稈的形狀、顏色、有無絨毛等形態(tài)特征,采收期測量株高、冠幅、根長、根條數(shù)、根粗、根重、優(yōu)級品率以及折干率等產(chǎn)量性狀.株高和根長用直尺測量,根粗(最大直徑)用游標卡尺測量,根重量采用稱重法測定.凡根直徑在1cm以上,根長在25cm以上者為優(yōu)級品,優(yōu)級品占總根量的百分率即為優(yōu)級品率.抗病性采用田間調(diào)查方法并結(jié)合丹參的特點進行.1.2.4儀器配置情況丹參酮ⅡA含量測定按文獻方法進行,采用HPLC法,儀器型號:Agilent1100型高效液相色譜儀.儀器配置情況如下:單元泵、自動進樣器、VWD檢測器、Autoscience柱溫箱、迪馬5μm,4.6×250mmC18色譜柱.測定丹參素含量對照溶液的制備試驗溶液的制備測量丹參酮ⅡA標準品購于中國藥品生物制品檢驗所,丹參素標準品購于上海醫(yī)科大學.2結(jié)果與分析2.1從現(xiàn)冷對子株至開花期時間的變化各個品系物候期變化見表2,大部分品系在4月中旬以前返青出苗,只有甘西鼠尾出苗較晚,而61-2-22丹參出苗最早.從現(xiàn)蕾開花到盛花期來看,61-2-22比其他品系早10～20d,甘西鼠尾和山東白花開花期比其他品系稍晚,其余品系均在6月上旬到下旬期間;種子成熟期基本在7月中下旬,甘西鼠尾比其他品系晚熟1周左右.2.2地球儀的形態(tài)特征2.2.1南有效位階在壁后或半緣葉緣8個丹參品系在葉片的形狀、大小、顏色和葉緣特征方面有一定差異,其中甘西鼠尾葉片較大,單葉,具柄,葉片呈三角狀或橢圓戟形,長5～12cm,寬3～7cm,先端銳尖,或漸尖,葉緣具粗鋸齒;南丹參的葉片也比較大,但為羽狀復(fù)葉,小葉5～7(9)枚,卵狀披針形,長4～15cm,寬2～10cm,葉緣距圓齒,先端漸尖或尾狀漸尖,兩面除葉脈上疏被柔毛外,均無毛.三葉鼠尾通常具3小葉,稀5小葉,小葉具柄,卵圓或橢圓形,葉緣銳鋸齒,葉面光滑無毛,深綠色;其他5個品系差異不十分顯著.從花冠的顏色來看,大部分品系的花冠為藍紫色,毛地黃鼠尾花冠黃色,花冠平伸,不向上彎.甘西鼠尾花冠紫紅色,山東白花丹參花冠顏色為黃白色,花萼和莖的顏色性狀也有一定差異(表3和表4).2.2.2南有效糖參酮含量和產(chǎn)品品質(zhì)8個種質(zhì)在冠幅、根長、根數(shù)、根粗、根鮮重、藥效成分含量方面具有顯著和極顯著差異(表5),可以利用這些主要生物學性狀差異區(qū)別不同丹參種質(zhì).根粗和根長是商品等級和質(zhì)量的重要指標,南丹參均居第1位,南丹參根鮮重比居第2位的商洛丹參高出158.69%,61-2-22最低.在有效成分方面,南丹參丹參素含量比第2位的甘西鼠尾高156.77%.丹參酮ⅡA含量最高的是山東白花.南丹參的產(chǎn)量和丹參素含量都表現(xiàn)出較好特性,山東白花在丹參酮含量方面是一個很好的丹參種質(zhì)資源.2.2.3氣調(diào)因子的生長性狀間相關(guān)系數(shù)(表6)表明了各性狀之間的相關(guān)程度和影響大小的關(guān)系程度.丹參酮ⅡA與冠幅、根深、根長、根條數(shù)、根鮮重、丹參素含量呈負相關(guān),但相關(guān)不顯著,而與根粗為極顯著負相關(guān),說明影響丹參酮ⅡA含量的主要因素是根粗.丹參素與冠幅、根深、根長、根粗、根鮮重呈極顯著正相關(guān),說明丹參的各種生長因素都會影響丹參素的含量.根鮮重與冠幅、根深、根長、根條數(shù)、根粗呈極顯著正相關(guān),說明丹參的各種生長因素也都會影響丹參的產(chǎn)量.根粗與冠幅、根深、根長、根條數(shù)呈極顯著正相關(guān),根條數(shù)與冠幅、根深、根長呈極顯著正相關(guān),根長與根深、冠幅呈極顯著正相關(guān),根深與冠幅呈極顯著正相關(guān),說明產(chǎn)量的高低與丹參生長的個體發(fā)育成正相關(guān),要取得高的產(chǎn)量,個體發(fā)育必須根深葉茂,這一結(jié)果與生產(chǎn)實際相一致.就根鮮重而言,冠幅和根深對它的貢獻率為0.7348和0.7224,根長、根條數(shù)和根粗的貢獻率為0.8447、0.8221和0.8263,丹參素的貢獻率為0.6713,丹參酮ⅡA的貢獻率為-0.037.2.3多態(tài)性分布.結(jié)果表明(表7),南丹參優(yōu)質(zhì)品率與其他種質(zhì)具有極顯著差異,其優(yōu)質(zhì)品率為96.1%,比山東白花、甘西鼠尾、毛地黃鼠尾分別高28.5～29.4%,商洛丹參優(yōu)質(zhì)品率最低(39.3%).折干率最高的是山東白花和毛地黃鼠尾,而山東白花與其他種質(zhì)有極顯著差異.產(chǎn)量表現(xiàn)以南丹參最高(688.05kg/hm2),與其他種質(zhì)具有極顯著差異.2.4病:正/根結(jié)線蟲病對商洛丹參基地的抗病性調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),在商洛地區(qū)主要發(fā)生的病害是根結(jié)線蟲病.高抗根結(jié)線蟲病的種質(zhì)有毛地黃鼠尾、三葉鼠尾、遼寧丹參、山東白花,抗性屬1級,對線蟲病中度感染的有甘西鼠尾、南丹參、61-2-22,高度感染根結(jié)線蟲病的是商洛丹參.3參種品種的選擇(1)南丹參在商洛地區(qū)生長冠幅最大、單株產(chǎn)量、有效成分含量(丹參素)最高,根的優(yōu)質(zhì)品最高,抗根結(jié)線蟲病能力為中度感病,屬3級,是最為適宜推廣種植的種質(zhì)(品種).商洛丹參的冠幅、產(chǎn)量、根的優(yōu)質(zhì)品率居第二位,有效成分含量居第四位,抗根結(jié)線蟲病能力為高度感染,屬4級,是一個較為適宜在陜西商洛地區(qū)推廣種植的丹參品種.甘西鼠尾和山東白花的有效成分含量分別居第二、三位,山東白花高抗根結(jié)線蟲病,屬1級,甘西鼠尾抗根結(jié)線蟲病為中度感染,屬3級,這兩個品種也是較為適宜的品種.61-2-22、毛地黃鼠尾、遼寧丹參、三葉丹參在冠幅、產(chǎn)量、有效成分含量上均較低,不適宜在該地區(qū)種植.三葉丹參是一個高抗根結(jié)線蟲病的品種,可以作為抗病育種的種質(zhì)資源來利用.(2)各性狀間的相關(guān)分析表明性狀之間的影響關(guān)系大小,植株生長茂盛,對單株產(chǎn)量、根粗、根長、根條數(shù)、丹參素以及優(yōu)等品率都有促進作用,而對丹參酮ⅡA的含量不利,要提高產(chǎn)量和丹參酮ⅡA的含量,從試驗結(jié)果看應(yīng)從增加根條數(shù)上解決,生產(chǎn)上如何控制還有待進一步研究.(3)不同種質(zhì)(品種)生物學性狀之間的差異,可以用來鑒定和區(qū)別不同的丹參種質(zhì)(品種),這與張興國等區(qū)別川丹參的研究結(jié)果相同,也與高山林等研究多倍體的特征方法結(jié)果相同.丹參在各地的表現(xiàn)差異較大,而且又受多種因素的影響,從引進種植表現(xiàn)與原產(chǎn)地比較,具有較大差異,須經(jīng)3年以上的觀察鑒定才可確定其適應(yīng)性,故應(yīng)謹慎引種.用十八烷基鍵合硅膠為填充劑,甲醇-水-磷酸(15∶85∶0.3)為流動相,檢測波長為281nm,理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000.精密稱取丹參素鈉對照品1.6mg,置10mL量瓶中,加甲醇