實(shí)驗(yàn)二

粗糙鏈孢霉生活史及雜交精選ppt［一、實(shí)驗(yàn)原理］

粗糙鏈孢霉屬于真菌中的子囊菌綱。粗糙鏈孢霉的菌絲體是單倍體〔n=7〕，每一菌絲細(xì)胞中含有幾十個(gè)細(xì)胞核。由菌絲頂端斷裂形成分生孢子。分生孢子有兩種，小型分生孢子中含有一個(gè)核，大型分生孢子中含有幾個(gè)核。分生孢子萌發(fā)成菌絲，可再生成分生孢子，周而復(fù)始，這是粗糙鏈孢霉的無性生殖過程。精選ppt鏈孢霉〔Neurosporacrassa〕的生活史圖8-19精選ppt粗糙鏈孢霉的菌株有兩種不同的接合型，用A,a或mt+,mt-表示，他們受一對等位基因控制。不同結(jié)合型菌株的細(xì)胞接合產(chǎn)生有性孢子，這過程稱為有性生殖。有性生殖可以通過兩種方式進(jìn)行。一是產(chǎn)生原子囊果，內(nèi)附有產(chǎn)囊體，假設(shè)另一接合型的分生孢子落在這原子囊果的受精絲上時(shí)，分生孢子的細(xì)胞核進(jìn)入受精絲，到達(dá)產(chǎn)囊體，形成接合型基因的異核體。二是不同接合型的菌株的菌絲連接，兩種接合型的細(xì)胞核發(fā)生融合形成合子，產(chǎn)生子囊果。精選ppt其中，1和2是未交換的，稱第一次分裂別離子囊；3-6都是發(fā)生交換的，稱第二次分裂別離子囊。因此，統(tǒng)計(jì)第二次分裂別離子囊占總子囊數(shù)的比例，乘以0.5，就可決定某一基因與著絲粒之間的重組值。重組值去掉%〔即乘以100〕，即為該基因圖距。粗糙鏈孢霉的子囊和子囊型精選ppt粗糙鏈孢霉的子囊和子囊型精選ppt本實(shí)驗(yàn)用賴氨酸缺陷型〔記作Lys-〕與野生型〔記作Lys+〕雜交，得到的子囊孢子別離為4個(gè)黑的〔＋〕，4個(gè)是灰的〔-〕。黑的孢子是野生型；賴氨酸缺陷型孢子成熟遲，所以呈灰色。根據(jù)黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列順序，可有6種子囊類型。

子囊型〔1〕和〔2〕的產(chǎn)生如圖。第一次減數(shù)分裂〔M1〕時(shí)，帶有Lys+的兩條染色單體移向一極，而帶有Lys-的兩條染色單體移向另一極。Lys+/Lys-這對基因在第一次減數(shù)分裂時(shí)別離，稱第一次分裂別離。第二次減數(shù)分裂〔M2〕時(shí)，每一染色單體相互分開，形成四分體，順序是＋＋——或——＋＋，再經(jīng)過一次有絲分裂，成為〔1〕和〔2〕子囊型。形成這兩種子囊型時(shí)，在著絲粒和基因?qū)ys+/Lys-間未發(fā)生過交換，是第一次分裂別離子囊。精選ppt圖中〔3〕和〔4〕的形成。由于Lys基因與著絲粒間發(fā)生了一個(gè)交換，Lys+/Lys-在第一次減數(shù)別離時(shí)沒有別離，到第二次減數(shù)分裂〔M2〕時(shí)，帶有Lys+的染色單體才和帶有Lys-的染色單體相互分開，所以稱為第二次分裂別離。然后再經(jīng)一次有絲分裂，形成4個(gè)孢子對，順序是＋＋--＋＋--或--＋＋--＋＋。這是第二次分裂別離子囊?！?〕和〔6〕子囊型的形成與〔3〕和〔4〕類似，也是兩個(gè)染色單體發(fā)生了交換，不過交換不是發(fā)生在第2條染色單體與第3條染色單體之間，而是發(fā)生在1，3或2，4兩條染色單體之間。精選ppt粗糙鏈孢霉lys+與lys-雜交子囊孢子的排列順序(1)、(2)為非交換型(3)、〔4)、(5)、(6)為交換型子囊(7)、〔8)、(9)、(10)是由轉(zhuǎn)換造成的異常比例精選ppt［二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．掌握粗糙鏈孢霉的雜交技術(shù)；2．統(tǒng)計(jì)雜交結(jié)果，計(jì)算基因圖距。精選ppt[三、實(shí)驗(yàn)材料]粗糙鏈孢霉野生型菌株，Lys+,接合型A.粗糙鏈孢霉賴氨酸缺陷型菌株Lys-,接合型a.精選ppt[四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品]1.器具：顯微鏡，鐘表鑷，解剖針，接種針，載玻片，試管，培養(yǎng)皿。2.藥品：５％次氯酸鈉。精選ppt[五、實(shí)驗(yàn)步驟]1、菌種活化：把野生型和缺陷型菌種從冰箱取出，分別接在兩支土豆培養(yǎng)基試管斜面上，28OC溫箱培養(yǎng)５天。培養(yǎng)到菌絲上部有分生孢子產(chǎn)生。２、雜交：〔１〕同時(shí)在雜交培養(yǎng)基上接種兩親本菌株的分生孢子或菌絲，25OC溫箱進(jìn)行混合培養(yǎng)。注意要貼好標(biāo)簽，寫明親本菌株及雜交日期?！?〕雜交后５－７天就能看到許多棕色的原子囊果出現(xiàn)，以后原子囊果變黑變成子囊果?！?〕在７－１４天左右，就可在顯微鏡下觀察。精選ppt另外一種方法：在雜交培養(yǎng)基上接種一個(gè)親本菌株，25OC培養(yǎng)５－７天后即有原子囊果出現(xiàn)。同時(shí)準(zhǔn)備好另一親本菌株的分生孢子，懸濁于無菌水中〔近于白色的懸濁液〕，將此懸濁液加到形成原子囊果的培養(yǎng)物外表，使外表根本濕潤，繼續(xù)25OC培養(yǎng)。原子囊果在加進(jìn)分生孢子一天后即可開始增大變黑成子囊果，７天后即成熟。３、顯微鏡觀察步驟：〔１〕在長有子囊果的試管中加少量無菌水，搖動(dòng)片刻，把水倒在空三角瓶中，加熱煮沸，以防止分生孢子飛揚(yáng)。精選ppt〔２〕取一載玻片，滴一滴５％次氯酸鈉，然后用接種針挑出子囊果放在載玻片上，用另一載玻片蓋上，用手指壓片，將子囊果壓破，置顯微鏡下〔１０Ｘ１５倍〕檢查，即可見到３０－４０個(gè)子囊?！?〕最后用過的針及玻片要用開水煮過洗凈。精選ppt〔4〕在顯微鏡下觀察記錄子囊孢子在子囊中的排列順序，將結(jié)果記入下表。紅色鏈孢霉性狀遺傳雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果子囊類型子囊數(shù)非交換型（1）＋＋＋＋――――（2）――――＋＋＋＋交換型（3）＋＋――＋＋――（4）――＋＋――＋＋（5）――＋＋＋＋――（6）＋＋――――＋＋合計(jì)其它類型精選ppt鏈孢霉的子囊果和子囊(a)成熟的子囊果；(b)散開的子囊交換型子囊交換型子囊未交換型子囊精選ppt交換型子囊未交換型子囊未交換型子囊精選ppt精選