有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)的定量方法有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)的定量方法根據(jù)雜質(zhì)與主成分的最大吸收波長(zhǎng)及校正因子來確定。若雜質(zhì)與主峰的吸收波長(zhǎng)基本一致，則一般采用自身對(duì)照法或峰面積歸一化法；若雜質(zhì)與主峰的吸收波長(zhǎng)差異范圍較小，校正因子在0.9～1.1之間，則可采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法；超出該范圍，校正因子在0.2～5.0范圍以內(nèi)時(shí)，采用主成分自身對(duì)照法的定量方式，須用校正因子進(jìn)行校正；若雜質(zhì)與主峰的吸收波長(zhǎng)相差較大，校正因子在0.2～5.0范圍以外時(shí)，不能通過校正因子校正，則要采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定。①外標(biāo)法（雜質(zhì)對(duì)照品法）外標(biāo)法定量比較準(zhǔn)確，采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)研究。A檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇測(cè)定方法參照紫外-可見分光光度法（中國(guó)藥典2010版二部附錄ⅣA）進(jìn)行測(cè)定，或采用HPLC法，DAD檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)考察輔料干擾等。B標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系應(yīng)在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)測(cè)定?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測(cè)物質(zhì)濃度系列進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)濃度。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。C精密度試驗(yàn)儀器精密度試驗(yàn)主要是考察測(cè)定方法在所用的試驗(yàn)儀器測(cè)定結(jié)果的偏差，精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。測(cè)定方法：取一定濃度的雜質(zhì)對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定次數(shù)至少6次，以峰面積的測(cè)定結(jié)果計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，考察儀器測(cè)定的。D重復(fù)性試驗(yàn)重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。重復(fù)性測(cè)定可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，如制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，或100％的濃度水平，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。常用的測(cè)定方法時(shí)采用100%的濃度，測(cè)定6次，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)定方法:按含量測(cè)定的方法，分別平行稱取6份樣品，按外標(biāo)法測(cè)定雜質(zhì)的含量，以雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。E中間精密度中間精密度系指在同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如時(shí)間、分析人員、儀器設(shè)備、測(cè)定結(jié)果的精密度。驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動(dòng)因素一般為日期、分析人員、設(shè)備?？疾煸诓煌蛩刈儎?dòng)的條件下，測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)定方法：按含量測(cè)定的方法，分別由不同的人員、時(shí)間、不同儀器按外標(biāo)法測(cè)定樣品雜質(zhì)的含量，以雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。F回收率試驗(yàn)回收率試驗(yàn)來驗(yàn)證測(cè)定方法的準(zhǔn)確度。試驗(yàn)設(shè)計(jì)需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，即測(cè)定9次，報(bào)告已知加入量的回收率（％）或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。并考察不同濃度下測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)定方法：按含量測(cè)定的方法，按加樣回收率測(cè)定方法，在已知雜質(zhì)含量的樣品中加入不同濃度的雜質(zhì)對(duì)照品，按外標(biāo)法分別測(cè)定不同濃度樣品中的測(cè)的量，計(jì)算測(cè)的量比加入量的百分含量（即回收率），以不同濃度下的回收率計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。G雜質(zhì)的檢測(cè)限檢測(cè)限系指試樣中的被分析物能夠被檢測(cè)到的最低量，是反映分析方法靈敏度的一個(gè)重要指標(biāo)；最低檢測(cè)限不得大于該雜質(zhì)的報(bào)告限度，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。測(cè)定方法：取待測(cè)物質(zhì)對(duì)照品適量，加流動(dòng)相配制成一點(diǎn)濃度的對(duì)照品溶液，按倍倍稀釋法，以信噪比為3：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。同時(shí)將信噪比為3：1的樣品溶液進(jìn)樣6針，以峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。判斷結(jié)果：最小檢測(cè)限濃度下樣品峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)≤20%，以最小檢測(cè)限來確定供試品溶液配制的濃度作為依據(jù)。H雜質(zhì)的定量限定量限是指被測(cè)雜質(zhì)能夠被定量測(cè)定的最低量。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測(cè)能力。雜質(zhì)定量試驗(yàn)，需考察方法的定量限，以保證含量很少的雜質(zhì)能夠被準(zhǔn)確測(cè)出。測(cè)定方法：取待測(cè)物質(zhì)對(duì)照品適量，加流動(dòng)相配制成一點(diǎn)濃度的對(duì)照品溶液，按倍倍稀釋法，以信噪比為10：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。同時(shí)將信噪比為10：1的樣品溶液進(jìn)樣6針，以峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。判斷結(jié)果：定量限濃度下樣品峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)≤10%。②加校正因子的主成分自身對(duì)照法采用加校正因子自身對(duì)照法應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)雜質(zhì)的校正因子的測(cè)定，僅適用于已知雜質(zhì)的控制，如果校正因子在0.2～5.0的范圍內(nèi)也可用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。校正因子的定義及特點(diǎn)一般來講，HPLC定量測(cè)定中，物質(zhì)的檢測(cè)量W與色譜響應(yīng)值（峰面積等）A之間的比值稱為絕對(duì)校正因子，即單位響應(yīng)值（峰面積等）所對(duì)應(yīng)3：重復(fù)性：6個(gè)相似重量的樣品計(jì)算出來的F值比較，然后2個(gè)人12個(gè)相似重量的樣品計(jì)算出來的F值比較；4：專屬性：不同物質(zhì)的F一般會(huì)不同，通過對(duì)比確認(rèn)各個(gè)雜質(zhì)的F；5：定量限：這個(gè)應(yīng)該是說在多少重量時(shí)，S/N剛好在10，所以我個(gè)人認(rèn)為計(jì)算這個(gè)數(shù)據(jù)是為了給范圍用的；6：范圍：藥品的重量在什么范圍內(nèi)，做出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率達(dá)標(biāo)，一般會(huì)在LOQ~雜質(zhì)限度150%；7：耐用性：由于溫度，流速，色譜柱都會(huì)不同程度的影響峰面積，進(jìn)而影響F，所以必然要通過耐用性確認(rèn)是否可以進(jìn)行一定范圍內(nèi)的溫度，流速，色譜柱的變化。第三種：采用三根不同色譜柱，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，測(cè)定各雜質(zhì)的校正因子。

①在進(jìn)行準(zhǔn)確度時(shí)，會(huì)有一個(gè)外標(biāo)法的回收率，此時(shí)的對(duì)照，應(yīng)包含主成分，利用主成分進(jìn)行加校正因子的回收率計(jì)算，即我們通常所做的幾個(gè)方法（外標(biāo)法、加校正因子、不加校正因子）回收率的比較，這就完成了準(zhǔn)確度，實(shí)際上我們做驗(yàn)證時(shí)候就做了，只是沒有單獨(dú)羅列出來而已；

②重復(fù)性，不用想了，回收率重復(fù)性一起做，利用同一個(gè)對(duì)照，完成重復(fù)性試驗(yàn)，不過這里要提出的是，要用100%準(zhǔn)確度溶液去進(jìn)行校正因子的重復(fù)性試驗(yàn)，因?yàn)閱渭儤悠凡豢赡軝z出所有已知雜質(zhì)。

③定量限、線性、范圍、耐用性。同理，用100%準(zhǔn)確度溶液＋對(duì)照去試驗(yàn)。我一般整套試驗(yàn)連續(xù)做完，不間斷。校正因子的定量限就是利用主成分和校正因子的方法去換算。實(shí)際什么濃度你就乘上校正因子就是它的定量限了，其實(shí)沒必要單獨(dú)做，都包含在方法學(xué)里面了。第四種：校正因子是用于檢測(cè)產(chǎn)品的雜質(zhì)定量檢測(cè)的，因此它的驗(yàn)證不是單一的校正因子的問題。它的驗(yàn)證項(xiàng)目基本和雜質(zhì)定量的驗(yàn)證項(xiàng)目一致，其意義在于，如果現(xiàn)有一個(gè)有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，該方法是已經(jīng)經(jīng)過驗(yàn)證的方法，你要做一個(gè)原來未做的雜質(zhì)的校正因子，實(shí)際上雜質(zhì)定量項(xiàng)目的驗(yàn)證你全部都要做。再給你舉個(gè)例子，一個(gè)藥典上已有的有關(guān)物質(zhì)分析方法，藥典上已經(jīng)有校正因子，但是如果我們用于檢測(cè)，由于儀器等的差異，校正因子需要驗(yàn)證，這個(gè)時(shí)候