江蘇省連云港市灌南華僑高級中學(xué)2025屆高考生物全真模擬密押卷注意事項：1．答卷前，考生務(wù)必將自己的姓名、準(zhǔn)考證號、考場號和座位號填寫在試題卷和答題卡上。用2B鉛筆將試卷類型（B）填涂在答題卡相應(yīng)位置上。將條形碼粘貼在答題卡右上角"條形碼粘貼處"。2．作答選擇題時，選出每小題答案后，用2B鉛筆把答題卡上對應(yīng)題目選項的答案信息點涂黑；如需改動，用橡皮擦干凈后，再選涂其他答案。答案不能答在試題卷上。3．非選擇題必須用黑色字跡的鋼筆或簽字筆作答，答案必須寫在答題卡各題目指定區(qū)域內(nèi)相應(yīng)位置上；如需改動，先劃掉原來的答案，然后再寫上新答案；不準(zhǔn)使用鉛筆和涂改液。不按以上要求作答無效。4．考生必須保證答題卡的整潔?？荚嚱Y(jié)束后，請將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．下列關(guān)于種群、群落、生態(tài)系統(tǒng)的敘述，正確的是()A．當(dāng)種群的數(shù)量超過K/2時，易導(dǎo)致該種群的豐富度降低B．生態(tài)系統(tǒng)中，生產(chǎn)者的同化量可以用生產(chǎn)者的干重積累量表示C．標(biāo)志重捕法調(diào)查種群密度時，若標(biāo)志物部分脫落，則計算出的種群密度比實際值偏大D．捕食者的存在會降低物種的多樣性，外來物種入侵會破壞生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性2．下圖所示為人體細胞的部分生命歷程，Ⅰ-Ⅳ代表細胞的生命現(xiàn)象,細胞1具有水分減少、代謝減慢的特征，細胞2在適宜條件下可以無限增殖。下列有關(guān)敘述錯誤的是A．成體干細胞經(jīng)過Ⅰ過程形成漿細胞等，體現(xiàn)了細胞的全能性B．Ⅰ-Ⅲ過程中，遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變的是Ⅰ過程和Ⅱ過程C．效應(yīng)T細胞經(jīng)過Ⅳ過程使細胞1和細胞2凋亡,屬于細胞免疫D．細胞2與正常肝細胞相比，細胞膜上的糖蛋白減少，細胞間黏著性下降3．下圖是果蠅體內(nèi)一個正在分裂的細胞及其部分染色體組成（數(shù)字代表對應(yīng)的染色體，字母表示染色體上的基因）。不考慮染色體變異，據(jù)圖判斷此果蠅基因型是（）A．AaBbdd B．AaBbXdY C．AaBbXYd D．AaBbXdXd4．下列關(guān)于內(nèi)環(huán)境的敘述，正確的是（）A．人體的內(nèi)環(huán)境與外界環(huán)境之間保持物質(zhì)和能量的動態(tài)平衡B．單細胞生物直接與外界環(huán)境進行物質(zhì)交換，多細胞生物只能通過內(nèi)環(huán)境與外界環(huán)境進行物質(zhì)交換C．線粒體內(nèi)需要消耗大量的氧氣，所以在線粒體中氧氣濃度高于細胞溶膠D．內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持主要靠神經(jīng)-體液-免疫調(diào)節(jié)5．基因型為AaBb(兩對基因自由組合)的某種動物，可以產(chǎn)生如圖中各種基因型的子細胞，下列說法錯誤的是（）A．在動物的卵巢和睪丸中能同時找到AaBb、AB、Ab、aB和ab五種基因型的細胞B．經(jīng)過程④產(chǎn)生的性狀一定能傳遞給子代C．導(dǎo)致過程③的根本原因是堿基對的替換、增添和缺失D．與過程①、②、④相比，過程③特有的現(xiàn)象是可以產(chǎn)生新基因6．肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實驗分為格里菲斯的體內(nèi)轉(zhuǎn)化實驗和艾弗里的體外轉(zhuǎn)化實驗，下列有關(guān)敘述錯誤的是（）A．格里菲斯認為加熱殺死的S型細菌中含有某種基因使R型活細菌轉(zhuǎn)化為S型活細菌B．格里菲斯體內(nèi)轉(zhuǎn)化實驗沒有證明DNA是遺傳物質(zhì)C．艾弗里認為DNA是使R型細菌產(chǎn)生穩(wěn)定遺傳變化的物質(zhì)，即DNA是遺傳物質(zhì)，而蛋白質(zhì)不是遺傳物質(zhì)D．艾弗里最關(guān)鍵的實驗設(shè)計思路是設(shè)法把DNA與蛋白質(zhì)分開，單獨地、直接地去觀察DNA或蛋白質(zhì)的作用。7．如圖為某種細胞的結(jié)構(gòu)示意圖，正常生理狀態(tài)下，下列選項中的變化都會在該種細胞中發(fā)生的是（）A．氨基酸→RNA聚合酶；[H]+O2→H20B．葡萄糖→淀粉；H2O→[H]+O2C．氨基酸→胰島素；ATP→ADP+PiD．葡萄糖→丙酮酸；染色質(zhì)→染色體8．（10分）下列關(guān)于RNA分子的敘述，正確的是（）A．線粒體中含有mRNA、tRNA和rRNAB．RNA分子中不存在ATP中的“A”C．RNA分子中不含氫鍵，有的RNA具有催化功能D．RNA可以作為細菌的遺傳物質(zhì)也可以作為細胞內(nèi)物質(zhì)的運輸工具二、非選擇題9．（10分）卡爾文給小球藻懸浮液中通入14CO2，光照不同的時間（從1秒到數(shù)分鐘）后殺死小球藻，提取產(chǎn)物并分析。實驗發(fā)現(xiàn)，在RuBP羧化酶的作用下，一分子的14CO2首先結(jié)合一分子的C5（核酮糖二磷酸RuBP），生成一分子不穩(wěn)定的C6，隨后這一分子的C6分解生成兩分子C3（3–磷酸甘油酸），之后3–磷酸甘油酸在NADPH、ATP以及酶的作用下，形成三碳糖，經(jīng)過一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)，一個碳原子將會被用于合成葡萄糖而離開循環(huán)，剩下的五個碳原子經(jīng)一系列變化，再生成一個C5，循環(huán)重新開始。循環(huán)運行六次，生成一分子的葡萄糖。這一過程被稱為卡爾文循環(huán)，結(jié)合材料回答下列問題：（1）卡爾文實驗的研究目的是__________。該實驗的自變量是___________，因變量是_____。（2）在光合作用開始后，二氧化碳可快速轉(zhuǎn)化為許多種類的化合物。若要探究14CO2轉(zhuǎn)化成的第一個產(chǎn)物是否為C6，可對植物進行極短時間的光照，并檢測葉綠體中__________。（3）暗反應(yīng)階段發(fā)生的能量轉(zhuǎn)化過程是__________。夏季晴天中午時分，由于氣孔關(guān)閉，___________供應(yīng)不足，某些植物葉片的光合速率會明顯降低。10．（14分）蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學(xué)家欲獲得高效表達蛋白A的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關(guān)研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒，再將重組質(zhì)粒置于經(jīng)_________處理的大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉(zhuǎn)基因大腸桿菌。（2）檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點的_________技術(shù)。②圖2所示的4次PCR應(yīng)該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和_________分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。為檢測表達產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較_________的大小，以確定表達產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點是_________。11．（14分）基因工程為培育抗病毒植物開辟了新途徑，下圖為研究人員培育轉(zhuǎn)花葉病毒外殼蛋白基因（CMV-CP基因，長度為740個堿基對）番茄的主要過程示意圖(Kanr為卡那霉素抗性基因)。請回答：（1）將CMV-CP基因?qū)敕鸭毎?，培育的番茄植株具有抗CMV感染能力，這種現(xiàn)象屬于植物的特異性免疫，該免疫過程中抗原是____。（2）過程①接種的農(nóng)桿菌細胞中，Kanr及CMV-CP基因應(yīng)整合在Ti質(zhì)粒的T-DNA內(nèi)部，這是由于__。使用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)農(nóng)桿菌的目的是____。（3）為確定用于篩選的Kan適宜濃度，研究人員進行實驗，結(jié)果如右表。最終確定過程③④加入的Kan濃度為35mg·L-1，該濃度既可___，又不至于因Kan濃度過高影響導(dǎo)入重組DNA細胞的生長發(fā)育。Kan濃度/mg．L-1接種外植體數(shù)形成愈傷組織數(shù)外植體狀況05549正常形成愈傷組織25662只膨大、不易形成愈傷組織35660變褐色死亡50640變褐色死亡（4）過程③、④所需的培養(yǎng)基為__（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基。過程⑤再生植株抗性鑒定時，引物序列設(shè)計的主要依據(jù)是_____，引物序列長度及G+C比例直接影響著PCR過程中_______（填“變性”或“退火”或“延伸”）的溫度。（5）過程⑤電泳結(jié)果如圖，其中l(wèi)號為標(biāo)準(zhǔn)參照，2號為重組Ti質(zhì)粒的PCR產(chǎn)物，3-6號為抗性植株DNA的PCR產(chǎn)物，可以確定3—6號再生植株中____號植株基因組中整合了CMV-CP基因。12．科研人員利用固定化酵母直接發(fā)酵甜菜汁生產(chǎn)燃料乙醇，下圖1表示相關(guān)的工藝流程，圖2為不同固定化酵母接種量對發(fā)酵的影響。請回答下列問題：（1）圖1的步驟①中，溶化海藻酸鈉時要______________，以防止焦糊。步驟②中加入果膠酶的作用是_______________________。（2）圖1步驟③中進行增殖培養(yǎng)的目的是_______________________。（3）研究表明使用固定化酵母的酒精產(chǎn)量平均值高于游離酵母的對照組，可能的原因是_____________________。（4）由圖2可知，固定化酵母接種量為______________時酒精產(chǎn)量最高。接種量過高，酒精產(chǎn)量反而有所降低的原因是_____________________。（5）研究表明，固定化酵母更適于甜菜糖液的發(fā)酵環(huán)境，由此可以通過______________的方法來提高固定化酵母對發(fā)酵糖液的耐受性，從而達到提高發(fā)酵效率的目的。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、C【解析】

標(biāo)志重捕法誤差歸納：(1)統(tǒng)計值比實際值偏大的原因：①標(biāo)志物易脫落：可導(dǎo)致重捕個體中帶標(biāo)志的個體數(shù)據(jù)偏小，據(jù)計算公式N總＝初捕數(shù)×重捕數(shù)/重捕中標(biāo)記數(shù)推知，重捕中標(biāo)記數(shù)若減小則N總會比真實值偏大。②被捕獲一次后，難以被再次捕獲：可導(dǎo)致再次捕獲的個體中標(biāo)記數(shù)偏小，最終統(tǒng)計結(jié)果偏差應(yīng)與①相同，即比真實值偏大。(2)統(tǒng)計值比真實值偏小的原因：①標(biāo)志物影響了動物活動，導(dǎo)致更易被捕捉：可導(dǎo)致再次捕獲的個體中標(biāo)記數(shù)偏大，依據(jù)公式可推知，計算所得結(jié)果比真實值應(yīng)偏小。②調(diào)查期間有較多個體死亡或遷出，則統(tǒng)計值將偏小；反之則導(dǎo)致統(tǒng)計值偏大?！驹斀狻緼、當(dāng)種群的數(shù)量超過K/2時，種內(nèi)斗爭加劇，而物種豐富度是指群落中物種數(shù)目的多少稱為豐富度，A錯誤；B、生態(tài)系統(tǒng)中，生產(chǎn)者的同化量是生產(chǎn)者固定的太陽能總量，B錯誤；C、種群中的個體數(shù)=第一次捕獲數(shù)×第二次捕獲數(shù)÷重捕標(biāo)志個體數(shù)，標(biāo)志物部分脫落，則計算出的種群密度比實際值偏大，C正確；D、捕食者的存在會增加物種的多樣性，外來物種入侵或引種不當(dāng)（如引入我國的水葫蘆、食人魚等），則首先會減少當(dāng)?shù)氐奈锓N，從而破壞當(dāng)?shù)氐纳锒鄻有裕ㄖ饕ㄟ^破壞食物鏈的方式造成其他物種消失或者是瀕危），降低生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，D錯誤。故選C2、A【解析】

據(jù)圖分析，圖中過程Ⅰ表示細胞的分裂和分化；由于“細胞1具有水分減少、代謝減慢的特征”，因此過程Ⅱ表示細胞的衰老；由于“細胞2在適宜條件下可以無限增殖”，說明過程Ⅲ表示細胞癌變；過程Ⅳ表示細胞免疫過程中的效應(yīng)階段?！驹斀狻緼、成體干細胞經(jīng)過Ⅰ過程形成漿細胞等的過程發(fā)生了細胞的分裂和分化，沒有形成完整的個體，而已經(jīng)分化的細胞必需要發(fā)育為完整個體才能夠體現(xiàn)細胞的全能性，A錯誤；B、細胞分裂和分化、細胞衰老、細胞癌變過程中，只有細胞癌變過程（Ⅲ）中細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，B正確；C、效應(yīng)T細胞經(jīng)過IV過程使細胞1和細胞2凋亡，屬于細胞免疫，C正確；D、細胞2為癌細胞，與正常肝細胞相比，細胞膜上的糖蛋白減少，細胞間黏著性下降，D正確。故選A?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是了解細胞的生命歷程以及免疫調(diào)節(jié)的有關(guān)知識，能夠根據(jù)題干和題圖信息確定圖中細胞的類型以及各個數(shù)字表示的生理變化。3、C【解析】

果蠅有8條染色體，共4對，其中有3對常染色體，且這3對染色體形態(tài)大小都相同，還有1對性染色體形態(tài)、大小不同，即X和Y染色體。果蠅的Y染色體比X染色體要大?！驹斀狻繄D中畫出了四條染色體，由于其上標(biāo)有基因，根據(jù)等位基因位于同源染色體上，可以清楚的判斷出1和3號染色體是同源染色體，所以推出2和4號應(yīng)是另一對同源染色體，由于二者形態(tài)不同，即X和Y染色體。所以此果蠅是雄性；由于果蠅的X染色體比Y染色體短小，所以2號為X染色體，4號為Y染色體，基因型是AaBbXYd，選C正確。故選C。4、D【解析】

1、內(nèi)環(huán)境又叫細胞外液，由血漿、組織液和淋巴組成，內(nèi)環(huán)境是多細胞生物體的細胞生活的直接液體環(huán)境，是多細胞生物體的細胞與外界環(huán)境進行物質(zhì)交換的媒介；內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)是細胞完成正常生命活動的必要條件。

2、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)是指正常機體通過調(diào)節(jié)作用，使各個器官、系統(tǒng)協(xié)調(diào)活動，共同維持內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定的狀態(tài)，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)是機體進行正常生命活動的必要條件。【詳解】A、通過穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)，使人體內(nèi)環(huán)境的成分和理化性質(zhì)都處于動態(tài)平衡，而不是與外界環(huán)境的物質(zhì)和能量構(gòu)成動態(tài)平衡，A錯誤；

B、單細胞動物都直接與外界環(huán)境進行物質(zhì)交換，多細胞動物的部分細胞可以直接與外界進行物質(zhì)交換，例如蛙的皮膚細胞可以直接從外界吸收氧氣并排出二氧化碳，B錯誤；

C、線粒體內(nèi)需要消耗大量的氧氣，氧氣從細胞溶膠進入線粒體，所以在線粒體中氧氣濃度低于細胞溶膠，C錯誤；

D、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持主要賴神經(jīng)-體液-免疫的調(diào)節(jié)機制，D正確。

故選D。5、B【解析】

分析題圖：①表示減數(shù)分裂形成配子，該過程中能發(fā)生基因重組；②表示有絲分裂形成子細胞；③過程后基因發(fā)生改變，說明該過程中發(fā)生了基因突變，能產(chǎn)生新基因；④過程后，基因數(shù)目減少，應(yīng)該發(fā)生了染色體變異?！驹斀狻緼、動物的卵原細胞和精原細胞都可以進行有絲分裂和減數(shù)分裂，因此在動物的卵巢和睪丸中能同時找到AaBb、AB、Ab、aB和ab五種基因型的細胞，A正確；B、根據(jù)以上分析已知，過程④可能發(fā)生了染色體變異，若該變異發(fā)生在體細胞，則一般不會遺傳給后代，B錯誤；C、根據(jù)以上分析已知，過程③發(fā)生了基因突變，而基因突變指的是基因中堿基對的增添、缺失或改變，C正確；D、只有基因突變能產(chǎn)生新基因，圖中只有③過程發(fā)生了基因突變，因此與過程①、②、④相比，過程③特有的現(xiàn)象是可以產(chǎn)生新基因，D正確。故選B。6、A【解析】

肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實驗包括格里菲斯體內(nèi)轉(zhuǎn)化實驗和艾弗里體外轉(zhuǎn)化實驗，其中格里菲斯體內(nèi)轉(zhuǎn)化實驗證明S型細菌中存在某種“轉(zhuǎn)化因子”，能將R型細菌轉(zhuǎn)化為S型細菌；艾弗里體外轉(zhuǎn)化實驗證明DNA是遺傳物質(zhì)?！驹斀狻緼、格里菲斯認為加熱殺死的S型細菌中含有某種轉(zhuǎn)化因子使R型活細菌轉(zhuǎn)化為S型活細菌，A錯誤；B、格里菲斯體內(nèi)轉(zhuǎn)化實驗沒有證明DNA是遺傳物質(zhì)，B正確；C、艾弗里實驗證明了DNA是遺傳物質(zhì)，而蛋白質(zhì)不是遺傳物質(zhì)，C正確；D、艾弗里最關(guān)鍵的實驗設(shè)計思路是設(shè)法把DNA與蛋白質(zhì)分開，單獨地、直接地去觀察DNA或蛋白質(zhì)的作用，D正確。故選A。7、A【解析】

據(jù)圖分析，細胞能分泌胰高血糖素，屬于胰島A細胞。同一生物體的所有體細胞都是由同一個受精卵有絲分裂而來的，含有相同的基因，且每個體細胞都含有該生物全部的遺傳物質(zhì)，但由于細胞分化，即基因發(fā)生的選擇性表達，不同細胞所含的RNA和蛋白質(zhì)種類有所差別?！驹斀狻堪被帷鶵NA聚合酶；[H]+O2→H2O是正常生命活動的代謝基礎(chǔ)，A正確；葡萄糖→淀粉只在部分植物細胞中發(fā)生，H2O→[H]+O2一般是在光合作用中發(fā)生，而該細胞不能進行光合作用，B錯誤；ATP→ADP+Pi表示ATP水解，發(fā)生在所有的活細胞中，但氨基酸→胰島素只有在胰島B細胞中發(fā)生，C錯誤；染色質(zhì)→染色體發(fā)生在具有分裂能力的細胞中，而胰島A細胞屬于高度分化的細胞，不分裂，D錯誤?！军c睛】易錯選項D，染色質(zhì)變?yōu)槿旧w只能在具有分裂能力的細胞中發(fā)生，而題圖細胞表示高度分化的胰島A細胞，不再分裂。8、A【解析】

RNA分子的種類及功能：（1）mRNA：信使RNA；功能：蛋白質(zhì)合成的直接模板；（2）tRNA：轉(zhuǎn)運RNA；功能：mRNA上堿基序列（即遺傳密碼子）的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者；（3）rRNA：核糖體RNA；功能：核糖體的組成成分，蛋白質(zhì)的合成場所。【詳解】A、線粒體中含有DNA，能進行轉(zhuǎn)錄合成出mRNA、tRNA、rRNA三類RNA，A正確；B、ATP中的“A”指的是腺苷，即腺嘌呤+核糖，存在于RNA中，B錯誤；C、tRNA為單鏈、但分子中含有氫鍵，C錯誤；D、細菌的遺傳物質(zhì)是DNA，D錯誤。故選A?！军c睛】本題考查RNA分子的組成和種類，要求考生識記RNA的種類及功能，能對相關(guān)知識進行歸納總結(jié)，屬于考綱識記層次的考查。二、非選擇題9、探究光合作用中CO2中的碳轉(zhuǎn)化成有機物中的碳的轉(zhuǎn)移途徑在光照條件下通入CO2后的時間葉綠體中含有14C的化合物出現(xiàn)的順序是否除CO2外只有C6具有放射性ATP中活躍的化學(xué)能→有機物中穩(wěn)定的化學(xué)能CO2【解析】

CO2是光合作用暗反應(yīng)的原料，用于合成暗反應(yīng)過程中的有機物。卡爾文給小球藻懸浮液中通入14CO2，光照不同的時間（從1秒到數(shù)分鐘）后殺死小球藻，提取產(chǎn)物并分析。說明本實驗研究的是CO2中的碳轉(zhuǎn)化成有機物中的碳的轉(zhuǎn)移途徑?！驹斀狻浚?）根據(jù)上述分析可知，卡爾文實驗的研究目的是探究光合作用中CO2中的碳轉(zhuǎn)化成有機物中的碳的轉(zhuǎn)移途徑。由于暗反應(yīng)過程中有機物的形成是按照一定順序逐步轉(zhuǎn)化形成的，所以控制光照條件下通入CO2后的時間，可檢測出暗反應(yīng)形成有機物的先后順序。即該實驗的自變量是在光照條件下通入CO2后的時間，因變量是葉綠體中含有14C的化合物出現(xiàn)的順序。（2）若14CO2轉(zhuǎn)化成的第一個產(chǎn)物是C6，則對植物進行極短時間的光照時，葉綠體中除CO2外只有C6具有放射性，若14CO2轉(zhuǎn)化成的第一個產(chǎn)物不是C6，則葉綠體中檢測到放射性的C6時還會同時檢測到具有放射性的其他有機物，所以要探究14CO2轉(zhuǎn)化成的第一個產(chǎn)物是否為C6，可對植物進行極短時間的光照，并檢測葉綠體中是否除CO2外只有C6具有放射性。（3）暗反應(yīng)階段發(fā)生的能量轉(zhuǎn)化過程是ATP中活躍的化學(xué)能→有機物中穩(wěn)定的化學(xué)能。氣孔是CO2進入細胞的通道，夏季晴天中午時分，由于氣孔關(guān)閉，CO2供應(yīng)不足，使暗反應(yīng)的速率減慢，導(dǎo)致光合速率會明顯降低。【點睛】本題以同位素標(biāo)記法為背景，要求考生掌握光合作用的探究過程，識記光合作用的過程，運用所學(xué)基礎(chǔ)知識回答問題。10、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。②區(qū)別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。3、PCR技術(shù)擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。第二步：基因表達載體的構(gòu)建1、目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因（1）啟動子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。（2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞1、轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程。2、常用的轉(zhuǎn)化方法：將目的基因?qū)胫参锛毎翰捎米疃嗟姆椒ㄊ寝r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因?qū)雱游锛毎鹤畛Ｓ玫姆椒ㄊ秋@微注射技術(shù)．此方法的受體細胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛毎涸松镒鳛槭荏w細胞的原因是繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉(zhuǎn)化方法是：先用Ca2+處理細胞，使其成為感受態(tài)細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。3、重組細胞導(dǎo)入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達。第四步：目的基因的檢測和表達1、首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。2、其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交。3、最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進行抗原——抗體雜交。4、有時還需進行個體生物學(xué)水平的鑒定，如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀?！驹斀狻浚?）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA連接酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒；大腸桿菌作為受體細胞，需要用氯化鈣處理，以便重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。（2）①根據(jù)題意和圖示分析，經(jīng)過4次PCR技術(shù)后獲得了新的基因，這是一種定點的基因突變技術(shù)。②與研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），因此4次PCR應(yīng)該分別選擇如圖所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√（3）根據(jù)實驗中的對照原則，若要比較新蛋白A的表達效率是否提高，則需設(shè)置三組實驗實驗變量的處理分別為：僅含新蛋白質(zhì)A的重組質(zhì)粒，僅含蛋白A的重組質(zhì)粒和空白對照（僅含空質(zhì)粒，以排除空質(zhì)?？赡墚a(chǎn)生的影響）。因此，將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用抗原——抗體雜交方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以為檢測表達產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較抑菌圈的大小，以確定表達產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，是因為蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高?！军c睛】本題主要考查基因工程、PCR技術(shù)等相關(guān)知識，考生需要理解和記憶相關(guān)知識，并學(xué)會應(yīng)用所學(xué)知識正確答題。11、CMV-CP（花葉病毒外殼蛋白）Ti質(zhì)粒中僅T-DNA片段可以進入植物細胞并整合到植物細胞染色體DNA中使農(nóng)桿菌大量繁殖，重組Ti質(zhì)粒擴增殺死沒有導(dǎo)入重組DNA的普通番茄細胞固體基因兩端的部分核苷酸序列退火3【解析】

將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上；根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上?！驹斀狻浚?）據(jù)題干信息可知“將CMV-CP基因?qū)敕鸭毎?，培育的番茄植株具有抗CMV感染能力”，故可推知該過程中抗原是CMV-CP（花葉病毒外殼蛋白）。（2）由以上分析可知：因Ti質(zhì)粒中僅T-DNA片段可以進入植物細胞并整合到植物細胞染色體DNA中，故Kanr及CMV-CP基因應(yīng)整合在Ti質(zhì)粒的T-DNA內(nèi)部；為使農(nóng)桿菌大量繁殖，重組Ti質(zhì)粒擴增，需要使用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)農(nóng)桿菌，液體培養(yǎng)基可使菌體與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸。（3）據(jù)題干信息可知：Kanr為卡那霉素抗性基因，故若番茄細胞中成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒，則能在Kan培養(yǎng)基上存活，若未成功導(dǎo)入，則將被殺死，